郭冬芳，黨 箏，劉 喆，孟慶防

(駐馬店市中心醫(yī)院 1.檢驗科；2.風濕免疫科，河南 駐馬店463000)

摘要：目的探討類風濕關節(jié)炎(RA)患者血清免疫球蛋白、14-3-3η蛋白的變化及其意義。方法選取我院2015年2月—2017年12月收治的RA患者110例(RA組)和年齡、性別相匹配的健康對象40例(對照組)，檢測兩組的血清IgA、IgG、IgM、補體C3、C4、14-3-3η蛋白水平，并根據(jù)RA患者是否處于疾病活動期和放射學分級進行分層分析。結(jié)果RA組的血清IgG、14-3-3η蛋白水平顯著高于對照組(P<0.05)，血清IgA、IgM、補體C3、C4蛋白水平與對照組比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；活動期RA患者血清IgG、14-3-3η蛋白水平顯著高于非活動期的RA患者(P<0.05)，血清IgA、IgM、補體C3、C4水平與非活動期的RA患者比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；放射學分級3級、4級RA患者血清IgG、補體C3、14-3-3η蛋白水平顯著高于非活動期組的2級患者(P<0.05)，血清IgA、IgM、補體C4水平與放射學分級2級RA患者比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。結(jié)論RA患者血清IgG、補體C3 14-3-3η蛋白水平較高，血清14-3-3η蛋白、免疫球蛋白水平變化與RA患者病情、活動情況具有一定的相關性。

關鍵詞：類風濕關節(jié)炎；免疫球蛋白；14-3-3η蛋白

中圖分類號：R593.22文獻標識碼：A

Relationshipbetweenserum14-3-3ETAandimmunoglobulinlevelandthedevelopmentofRApatients

GUODong-fang1，DANGZheng1，LIUZhe2，etal.

(1.DepartmentofClinicalLaboratory;2.DepartmentofRheumatologyandImmunology,ZhumadianCentralHospital,Zhumadian463000,China)

Abstract:ObjectiveTo investigate the changes and significance of serum immunoglobulin and 14-3-3 ETA protein in patients with rheumatoid arthritis (RA).MethodsIn our hospital (2015.02-2017.12),110 cases of RA patients (group RA),age and sex matched healthy subjects (control group)were selected to detect the levels of serum IgA,IgG,IgM,complement C3,C4,14-3-3 ETA protein in the two groups,and stratified analysis according to whether the patients were in the period of disease activity and the radiological classification.ResultsSerum IgG and 14-3-3 ETA protein levels in group RA were significantly higher than those in the control group(P<0.05).There was no significant difference in serum IgA,IgM,complement C3 and C4 protein levels between the RA group and the control group(P>0.05),and the serum IgG and protein levels of the RA patients in the active group were significantly higher than those in the non active group.There was no significant difference in serum IgA,IgM,complement C3,and C4 levels between the patients with RA in the dynamic phase group and the RA patients in the inactive group (P>0.05);the serum IgG,complement C3,14-3-3 ETA protein levels of the radiological classification (grade 3,4)were significantly higher than those of the group 2 in the inactive group (P<0.05),and the radiological classification (grade 3)There was no significant difference in serum IgA,IgM and complement C4 levels between patients with RA and those of grade 2 RA (P>0.05)in patients with RA.ConclusionCombined detection of serum IgG and complement C314-3-3 ETA protein level is helpful for clinicians to make judgments on the condition and activity of RA patients,so as to guide treatment.

Keywords:Rheumatoid arthritis;immunoglobulin;14-3-3 ETA protein

(ChinJLabDiagn,2019,23:0784)

近年來類風濕關節(jié)炎(RA)發(fā)生率明顯上升，流行病學研究證實，RA的發(fā)病率可達373-583/萬人左右[1]。臨床上RA的發(fā)生能夠?qū)е禄颊哧P節(jié)功能損傷風險的上升，并能夠增加患者遠期的致殘率[2]。血清免疫球蛋白的紊亂能夠通過對免疫因子的吞噬作用，促進滑膜組織上皮細胞的凋亡，導致局部關節(jié)腔內(nèi)環(huán)境的異常[3,4]；14-3-3η蛋白是重要的酸性蛋白成分，能夠參與到多種生物學活性的調(diào)控過程中。14-3-3η蛋白的高表達能夠激活下游腫瘤壞死因子α，促進炎癥性信號通路的激活，參與到關節(jié)的炎癥性損傷過程[5]。為了揭示14-3-3η蛋白或者免疫球蛋白與RA病情的關系，從而為臨床上RA患者的病情評估提供參考，本研究選取我院2015年2月—2017年12月收治的RA患者為研究對象，探討14-3-3η蛋白或者免疫球蛋白的表達及其與患者病情的關系，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

選取我院2015年2月—2017年12月收治的RA患者110例為RA組，其中男26例，女84例，年齡42-77歲，平均(61.5±13.0歲)；RA活動期患者64例，非活動期患者46例。選取同期年齡、性別相匹配的健康者40例為對照組，其中男8例，女32例，年齡40-76歲，平均(63.0±12.4)歲。納入標準：(1)RA患者的診斷及分期參考1987年美國風濕病協(xié)會(ARA)修訂的診斷標準[6]；(2)患者具有典型的關節(jié)腫脹、疼痛、畸形等癥狀，經(jīng)X線檢查、血清學檢查確診；(3)對照組來源于我院體檢健康的自愿者；(4)本研究獲得研究對象的知情同意和醫(yī)學倫理委員會的批準。排除標準：(1)伴有凝血功能疾病、血液系統(tǒng)疾??；(2)伴有惡性腫瘤；(3)結(jié)核；(4)急性心肌梗死；(5)免疫功能缺陷；(6)長期使用糖皮質(zhì)激素或免疫抑制劑。兩組研究對象年齡、性別比較差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

1.2 指標檢測方法

采集患者入院后靜脈血，離心后收集上清液，采用免疫發(fā)光法檢測IgG、IgA、IgM、補體C3、C4水平，檢測儀器為美國Bio-Bad全自動酶標儀，配套試劑盒購自羅氏檢測公司。

將采集患者的靜脈血3 ml,加入14-3-3η蛋白單抗，標本和標準品中的14-3-3η蛋白會與單抗結(jié)合,PBS液體洗滌5 min。按照1∶500的比例加入羊標志的一抗5 ml，4℃放置過夜，PBS緩沖液洗滌3次，每次5 min，加入鼠來源的二抗(1∶1 000)2 ml，室溫放置2 h，PBS液體洗滌5 min。加入顯色底物,辣根過氧化物酶會使無色的顯色劑現(xiàn)藍色,加終止液變黃。在450 nm處測OD值。

1.3 放射學分級評價標準

RA患者的放射學分級評價標準采用Steinbrocker標準。1級：正?；蚩赡艽嬖诠琴|(zhì)疏松；2級：骨質(zhì)疏松伴軟骨下骨質(zhì)破壞和輕度的關節(jié)間隙狹窄；3級：可見明顯的關節(jié)面下骨質(zhì)破壞、關節(jié)變形、關節(jié)間隙狹窄或消失，但未出現(xiàn)纖維性或骨性強直；4級：除伴有2級和3級的表現(xiàn)外，伴有纖維性或骨性強直。

1.4 統(tǒng)計學方法

2 結(jié)果

2.1 兩組研究對象血清14-3-3η蛋白、免疫球蛋白水平比較

RA組的血清IgG、14-3-3η蛋白水平顯著高于對照組(P<0.05)，血清IgA、IgM、補體C3、C4蛋白水平與對照組比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，見表1。

表1 兩組研究對象的血清14-3-3η蛋白、免疫球蛋白水平比較

2.2 不同分期的RA患者血清14-3-3η蛋白、免疫球蛋白水平比較

活動期RA患者的血清IgG、14-3-3η蛋白水平顯著高于非活動期的RA患者(P<0.05)，血清IgA、IgM、補體C3、C4水平與非活動期組RA患者比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，見表2。

表2 不同分期RA患者的血清14-3-3η蛋白、免疫球蛋白水平比較

2.3 不同放射學分級的RA患者血清14-3-3η蛋白、免疫球蛋白水平比較

放射學分級3級、4級RA患者的血清IgG、補體C3、14-3-3η蛋白水平顯著高于非活動期組的2級患者(P<0.05)，血清IgA、IgM、補體C4水平與2級的RA患者比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，見表3。

表3 不同放射學分級的RA患者血清14-3-3η蛋白、免疫球蛋白水平比較

3 討論

多種病理性因素均能夠?qū)е玛P節(jié)滑膜組織損傷，特別是在有相關家族易感基因攜帶的基礎上，RA的發(fā)生風險具有進一步上升趨勢。炎癥性損傷、自身免疫性功能紊亂等均能夠?qū)е禄せ准毎牡蛲?，加劇軟骨組織的破壞，進而增加了RA不良臨床預后的發(fā)生風險[7,8]。現(xiàn)階段臨床上主要通過免疫抑制劑、糖皮質(zhì)激素等治療RA，但一項囊括了627例樣本量的RA治療的臨床結(jié)局分析發(fā)現(xiàn)，RA治療后的病情緩解率不足36%，治療后的遠期關節(jié)脫位、關節(jié)壞死、骨折或者關節(jié)畸形等的發(fā)生率仍然較高[9]。而本次對于RA患者血清中免疫球蛋白或者14-3-3η蛋白水平的分析研究，不僅能夠為深入揭示RA的發(fā)病機制提供依據(jù)，同時還能為RA的免疫靶向治療提供新的治療靶點。

14-3-3η蛋白是糖蛋白家族的重要成員，能夠通過羧基結(jié)構(gòu)的磷酸化修飾或者甲基化修飾作用，影響生物體的炎癥反應、自身免疫應答或者組織細胞的退行性病變過程。14-3-3η蛋白的表達能夠通過結(jié)合細胞膜上的多種糖蛋白配體，導致上皮細胞膜內(nèi)的信號通路的激活，影響上皮細胞的凋亡和氧化應激損傷過程?；A方面的研究還認為，14-3-3η蛋白的表達能夠通過激活三磷酸腺苷或者鈣離子的表達，進而提高MAPK下游效應因子的上調(diào)程度，導致組織炎癥性損傷及淋巴細胞毒性作用的加強[10,11]。有部分研究者探討14-3-3η蛋白的表達與RA的關系認為，14-3-3η蛋白的表達上升能夠顯著促進RA患者的病情進展，導致患者免疫抑制劑治療敏感性的下降[12]，但缺乏對于14-3-3η蛋白的表達與RA患者的不同分期或者不同影像學評級間的關系研究。

本研究發(fā)現(xiàn)，RA組的血清IgG、14-3-3η蛋白的表達水平均明顯高于對照組，差異較為明顯，提示血清IgG、14-3-3η蛋白均可能影響RA的病情進展過程。通過薈萃分析不同的相關文獻，筆者認為血清IgG、14-3-3η蛋白的高表達主要通過下列幾個方面的途徑促進RA的發(fā)生或者病情進展[13,14]：(1)血清IgG的上升能夠通過激活巨噬細胞或者單核細胞，導致其對于滑膜組織上皮細胞吞噬作用的增強，促進了滑膜組織的自身免疫性損傷程度，導致滑膜上皮細胞的凋亡明顯加速；(2)14-3-3η蛋白表達濃度的上升能夠促進體內(nèi)炎癥信號通路AKT或者MAPK的激活，導致下游IL-6或者腫瘤壞死因子的上調(diào)，增加了炎癥性因子對于關節(jié)軟骨或者關節(jié)腔的浸潤過程。曾婷婷等[15]研究發(fā)現(xiàn)，在RA患者血清或者局部關節(jié)腔液體中，免疫球蛋白IgG的表達濃度明顯上升，特別是在病情進展速度較快或者糖皮質(zhì)激素治療敏感性較低的RA患者中，血清IgG的表達濃度可進一步的下調(diào)。活動期RA患者的病情進展速度、臨床預后等均不佳。本次研究發(fā)現(xiàn)，處于活動期的RA患者血清IgG、14-3-3η蛋白的表達均明顯的上調(diào)，提示二者的表達與RA患者的病情密切相關，這主要是由于血清IgG、14-3-3η蛋白的表達上升導致襯里細胞增生、間質(zhì)大量炎性細胞浸潤等病理過程的進展，并促進了血管翳的形成及軟骨和骨組織的破壞等病理過程。但本次研究中并未發(fā)現(xiàn)IgA、IgM、補體C3、C4水平等在RA患者不同分期中的表達差異，提示相關指標并不能評估患者的病情狀態(tài)。放射學分級通過關節(jié)面下骨質(zhì)破壞程度、關節(jié)有無變形、關節(jié)間隙等情況進而評估RA患者病理性損害的程度，隨著放射學分級的上升，可以發(fā)現(xiàn)RA患者的血清IgG、補體C3、14-3-3η蛋白水平均顯著上升，提示IgG、補體C3、14-3-3η蛋白能夠顯著促進RA患者關節(jié)解剖結(jié)構(gòu)的破壞，加劇關節(jié)的退行性和炎癥性病變程度。

本次研究的創(chuàng)新性在于探討了IgG、14-3-3η蛋白在不同放射學分級和RA分期中的差異性表達情況。綜上所述，RA患者血清IgG、補體C314-3-3η蛋白水平較高，血清14-3-3η蛋白、免疫球蛋白水平變化與RA患者病情、活動情況具有一定的相關性。