陳軍麗

（鄭州華洲食品檢測(cè)科技有限公司 河南 鄭州 450000）

隨著人們生活水平的不斷提高，蔬菜水果中的農(nóng)藥殘留問(wèn)題引起了人們更多更普遍的關(guān)注。有機(jī)磷及氨基甲酸酯類殺蟲劑使用廣泛，占到殺蟲劑用量的70%以上[1～2］。目前，我國(guó)針對(duì)有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留所采用的檢測(cè)方法主要有酶抑制法和色譜法。色譜法具有定性、定量、準(zhǔn)確和靈敏度高等特點(diǎn)[3］，大多為實(shí)驗(yàn)室所采用。不太適合生產(chǎn)基地和流通領(lǐng)域要求的快速檢測(cè)。采用酶抑制方法，儀器和試劑投入成本低、檢測(cè)方法簡(jiǎn)便易學(xué)、檢測(cè)速度快、檢測(cè)不受試驗(yàn)場(chǎng)所限制，是水果生產(chǎn)基地和超市、水果店等流通領(lǐng)域快速自行檢測(cè)的實(shí)用方法[4］。但是使用本方法檢測(cè)部分蔬菜水果時(shí)，對(duì)酶有影響的次生物質(zhì)容易產(chǎn)生假陽(yáng)性結(jié)果，給檢測(cè)帶來(lái)了不便，也給食品監(jiān)管增加了難度。本研究以GB/T 5009.199-2003[5］為基礎(chǔ)，針對(duì)容易產(chǎn)生假陽(yáng)性的幾種蔬菜，采用酶抑制法測(cè)定不同前處理方法對(duì)蔬菜提取液中農(nóng)殘含量的影響，滿足市場(chǎng)監(jiān)督快篩需求，為蔬菜和水果中農(nóng)藥殘留檢測(cè)技術(shù)提供參考。

1 材料和方法

1.1 試劑與儀器。市售試劑盒(鄭州華洲食品檢測(cè)科技有限公司)。農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)儀(廈門綠安分析儀器有限公司，型號(hào)：GNSPRD-8)；電熱恒溫水浴鍋(北京中興偉業(yè)儀器有限公司，型號(hào)：DZKW-4)；分析天平(奧豪斯儀器(常州)有限公司，型號(hào)：CP114)。

1.2 方法

1.2.1 試驗(yàn)原理。在一定條件下，有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥對(duì)膽堿酯酶的正常功能有一定抑制作用，其抑制率與農(nóng)藥濃度呈正相關(guān)。正常情況下，酶催化神經(jīng)傳導(dǎo)代謝產(chǎn)物(乙酰膽堿)水解，其水解產(chǎn)物與顯色劑反應(yīng)產(chǎn)生黃色物質(zhì)，用農(nóng)藥殘留檢測(cè)儀在412 nm處測(cè)定吸光度隨時(shí)間的變化值，計(jì)算出抑制率。通過(guò)抑制率可判斷樣品中是否含有高劑量的有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥[5］。

1.2.2 檢測(cè)步驟。①對(duì)照試驗(yàn)：燒杯中加入2.5 ml緩沖液(即空白樣品)，再加入0.1ml酶液(切勿滴在壁上)和0.1ml顯色劑，搖勻后于37℃水浴鍋內(nèi)放置10min，最后加入0.1 ml底物液，搖勻，立即將反應(yīng)液倒入比色皿中，置于農(nóng)藥殘留檢測(cè)儀通道中檢測(cè)412 nm波長(zhǎng)處反應(yīng)3 min前后的吸光度變化值ΔA0；②樣品試驗(yàn)：另取燒杯分別添加2.5 ml蔬菜樣品提取液，再加入0.1 ml酶液和0.1 ml顯色劑，搖勻后于37℃水浴鍋內(nèi)放置10 min，最后加入0.1 ml底物液，搖勻，立即將反應(yīng)液倒入比色皿中，置于農(nóng)藥殘留檢測(cè)儀通道中檢測(cè)412 nm波長(zhǎng)處反應(yīng)3 min前后的吸光度變化值ΔAt。按以下公式計(jì)算酶的抑制率。

表1 不同前處理對(duì)抑制率的影響

抑制率(%)=[(ΔA0-ΔAt)/ΔA0］×100；式中ΔA0—空白對(duì)照吸光度的變化值；ΔAt—樣品吸光度的變化值。

2 結(jié)果與分析

從表1中可以看出，蒜黃、大蒜、姜、小蔥4種蔬菜只要被剪切就會(huì)使抑制率增高，產(chǎn)生疑似陽(yáng)性；朝天椒、香菇2種蔬菜被剪切的更短，也會(huì)使抑制率增高，產(chǎn)生疑似陽(yáng)性。

3 結(jié)論與討論

3.1 結(jié)論分析。樣品剪短后比整體浸提疑似陽(yáng)性的概率大；樣品剪得越短，結(jié)果疑似陽(yáng)性的概率越大。若蔬菜樣品的酶抑制率達(dá)到50%以上，則表示蔬菜中可能含有高劑量的有機(jī)磷農(nóng)藥和氨基甲酸酯類農(nóng)藥，該樣品則判斷為疑似陽(yáng)性。結(jié)果為疑似陽(yáng)性的樣品，均要進(jìn)行2次以上測(cè)定或通過(guò)氣相色譜等儀器檢測(cè)進(jìn)一步確認(rèn)具體農(nóng)藥品種和含量。

3.2 檢測(cè)誤差分析。在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，實(shí)驗(yàn)環(huán)境溫度的變化對(duì)酶的活性具有一定的影響；實(shí)驗(yàn)過(guò)程中用到的比色皿，清洗的是否干凈對(duì)農(nóng)藥殘留檢測(cè)儀的折光率也會(huì)造成一定的影響；使用移液槍過(guò)程中，人員操作速度、溶液反應(yīng)時(shí)間長(zhǎng)短等都是影響檢測(cè)結(jié)果的因素；實(shí)驗(yàn)中添加過(guò)多的緩沖液會(huì)稀釋農(nóng)藥殘留量，添加過(guò)多的酶液會(huì)提高分解底物的速度，添加過(guò)多的顯色劑會(huì)增加顯色的程度，添加過(guò)多的底物液會(huì)提高酶的利用效率，以上這些因素都會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。