亚洲免费av电影一区二区三区,日韩爱爱视频,51精品视频一区二区三区,91视频爱爱,日韩欧美在线播放视频,中文字幕少妇AV,亚洲电影中文字幕,久久久久亚洲av成人网址,久久综合视频网站,国产在线不卡免费播放

        ?

        TLR2/4配體增強的非特異性肝臟炎癥對BALB/c小鼠自身免疫性肝炎的影響*

        2019-05-28 09:06:04裴晉紅馮作化
        中國病理生理雜志 2019年5期
        關(guān)鍵詞:小鼠

        池 剛,榮 凱,裴晉紅,馮作化

        (1長治醫(yī)學(xué)院生物化學(xué)教研室,山西 長治 046000;2太原市公安局小店分局,山西 太原 030032;3華中科技大學(xué),湖北 武漢 430074)

        自身免疫性肝炎(autoimmune hepatitis,AIH)是慢性的界面性肝炎,其特點是淋巴細胞浸潤及自身抗體和肝纖維化的產(chǎn)生[1-2]。臨床研究表明,細菌和病毒可以引起AIH,某些藥物也可以引起AIH[3-4]。這些因素的共同特點是能夠引起肝臟非特異性炎癥(non-specific liver inflammation)。然而,這些非特異性炎癥最終如何引起AIH的產(chǎn)生目前尚未完全清楚。前期研究發(fā)現(xiàn),腺病毒促進模擬抗原CYP2D6誘導(dǎo)易感型小鼠C57BL/6產(chǎn)生了AIH[5]。本研究通過觀察由四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl4)誘導(dǎo)的強烈的非特異性肝臟炎癥對耐受型小鼠BALB/c AIH的影響,分析其在BALB/c小鼠AIH的啟動中的原因,對進一步了解AIH的形成和發(fā)展的致病機制具有重要意義。

        材 料 和 方 法

        1 實驗動物和試劑

        6~9周齡雌性BALB/c小鼠購于湖北省醫(yī)學(xué)實驗動物中心(合格證號為211002300024158)。小鼠隨機分為對照組(21只)和實驗組(40只)。pcDNA3.1質(zhì)粒購自Invitrogen;實驗室構(gòu)建CYP2D6質(zhì)粒(pCYP2D6)和可溶性Toll樣受體(soluble Toll-like receptor,sTLR)2/4質(zhì)粒(psTLR2/4),保存于-20 ℃冰箱;人CYP2D6蛋白購自Abcam。

        2 方法

        2.1動物接種 將小鼠隨機分為:對照(naive)組、CCl4組、pcDNA3.1空質(zhì)粒對照(p3.1)組、pCYP2D6組、psTLR2/4組、CCl4/psTLR2/4組和CCl4/psTLR2/4/pCYP2D6組,每組6只小鼠。腹腔注射CCl4,每3 d 1次,至第12天停止注射,劑量為0.5 mL/kg;尾靜脈注射質(zhì)粒pCYP2D6和psTLR2/4,其中pCYP2D6質(zhì)粒使用濃度為每只小鼠每次50 μg,psTLR2/4質(zhì)粒使用濃度為100 μg或400 μg。尾靜脈注射pCYP2D6質(zhì)粒從造模前2 d開始,每5 d 注射1次,至第20天停止注射,而psTLR2/4質(zhì)粒從造模前2 d開始注射,每3 d 注射1次,至第15天停止注射。在指定時間處理小鼠并進行相關(guān)實驗。

        2.2病理學(xué)檢測 取小鼠肝組織,4%甲醛固定后,石蠟包埋切片,常規(guī)HE染色和天狼星紅染色,顯微鏡下觀察并記錄結(jié)果。肝臟AIH炎癥評分:肝小葉炎癥的評分,無炎癥(0分),輕微的肝小葉炎癥(1分;<10%的肝實質(zhì)面積),中度肝小葉炎癥(2分;10%~50 %的肝實質(zhì)面積),嚴重的肝小葉炎癥(3分;>50 %肝實質(zhì)面積);肝臟匯管區(qū)的評分,無炎癥(0分),輕微的匯管區(qū)炎癥(1分;<1/3的匯管區(qū)面積),中度的匯管區(qū)炎癥(2分;接近匯管區(qū)面積的1/2),嚴重匯管區(qū)炎癥(3分;>2/3的匯管區(qū)面積);總評分為肝小葉和匯管區(qū)炎癥之和[6]。肝纖維化評分:無纖維化記為0分;輕微肝小葉纖維化記為1分;匯管區(qū)周圍纖維化,纖維間隔形成記為2分;局部橋接纖維化記為3分;嚴重的橋接纖維化記為4分[7]。

        2.3ELISA檢測 取小鼠血清和正常肝組織蛋白,包被肝組織蛋白或人CYP2D6蛋白于96孔板中,4 ℃孵育過夜后,洗板、封閉、抗體孵育、底物顯示并用H2SO4終止反應(yīng),酶標儀讀取數(shù)據(jù),用Excel分析整理結(jié)果。

        3 統(tǒng)計學(xué)處理

        實驗數(shù)據(jù)采用SPSS 16.0軟件進行統(tǒng)計學(xué)處理。實驗數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標準差(mean±SD)表示,兩獨立樣本間比較采用t檢驗,多組間均數(shù)采用單因素方差分析(one-way ANOVA)。 以P<0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

        結(jié) 果

        1 TLR2/4配體增強了BALB/c小鼠非特異性肝臟炎癥

        研究結(jié)果顯示,用sTLR2/4封閉TLR2/4配體減弱了由CCl4引起的肝臟非特異性炎癥,而且隨著sTLR2/4濃度的增加,最終消除了由CCl4引起的肝臟非特異性炎癥,見圖1。這表明CCl4引起的BALB/c小鼠非特異性肝臟炎癥可能由TLR2/4配體介導(dǎo)。

        2 TLR2/4配體增強的非特異性肝臟炎癥對BALB/c小鼠自身免疫應(yīng)答的影響

        ELISA檢測結(jié)果顯示,封閉TLR2/4配體后,體內(nèi)抗CYP2D6抗體(anti-CYP2D6)和抗自身肝蛋白抗體(anti-HP)的滴度下降,增大sTLR2/4濃度后,無抗CYP2D6抗體和自身抗體產(chǎn)生,見圖2。這表明由TLR2/4配體增強的非特異性肝臟炎癥促進模擬抗原人CYP2D6使BALB/c小鼠產(chǎn)生自身免疫應(yīng)答。

        3 TLR2/4配體增強的肝臟非特異性炎癥對BALB/c小鼠AIH的影響

        HE染色結(jié)果顯示,封閉了TLR2/4配體后,AIH減弱,而且增大sTLR2/4濃度后,無AIH產(chǎn)生,見圖3。這表明在模擬抗原CYP2D6存在的情況下,TLR2/4配體增強的非特異性肝臟炎癥促進了BALB/c小鼠AIH。

        4 TLR2/4配體增強的肝臟非特異性炎癥對BALB/c小鼠肝臟纖維化的影響

        天狼星紅染色結(jié)果顯示,封閉了TLR2/4配體后肝纖維化減弱,而且增大sTLR2/4濃度后,肝纖維化消失,見圖4。這表明在模擬抗原CYP2D6存在的情況下,TLR2/4配體增強的非特異性肝臟炎癥可能使BALB/c小鼠肝纖維化惡化。

        討 論

        AIH的形成與病毒感染和藥物作用有密切關(guān)系[3, 8-9]。無論是病毒還是藥物,這些因素的共同特點均是引起了非特異性肝臟炎癥,造成了肝臟損傷,從而釋放危險信號,包括TLR2/4配體[10-12]。研究表明,非特異性的肝損傷釋放的TLR2/4配體與AIH可能存在密切聯(lián)系[12]。

        Figure 1.TLR2/4 ligand enhanced liver non-specific inflammation in the BALB/c mice. A: the liver tissues with HE staining on day 10 (×200); B: inflammatory score of HE staining. Mean±SD.n=6.**P<0.01vsCCl4group.

        圖1 TLR2/4配體增強了BALB/c小鼠的肝臟非特異性炎癥

        Figure 2.TLR2/4 ligand enhanced liver autoimmune responses in the BALB/c mice. Mean±SD.n=6.**P<0.01vsCCl4/pCYP2D6 group.

        圖2 TLR2/4配體增強了BALB/c小鼠肝臟自身免疫應(yīng)答反應(yīng)

        我們的研究結(jié)果顯示,在封閉了體內(nèi)TLR2/4配體后,非特異性肝臟炎癥和AIH均下降,并且隨著可溶性受體sTLR2/4濃度增加,非特異性肝臟炎癥和AIH均消失,重要的是,在前期封閉體內(nèi)TLR2/4配體后,后期纖維化也降低或消失。所以推測TLR2/4配體可能參與了AIH在耐受型小鼠BALB/c的啟動。

        盡管前期研究表明在C57BL/6易感型小鼠中由腺病毒和模擬抗原能引起AIH[5],而且攜帶模擬抗原人CYP2D6的腺病毒載體的FVB小鼠也能觀察到產(chǎn)生AIH的特征[13]。然而,攜帶模擬抗原的腺病毒載體在耐受型小鼠BALB/c中無法誘導(dǎo)產(chǎn)生AIH[4],提示弱炎癥可能無法啟動耐受型小鼠的AIH。我們的研究結(jié)果表明,由CCl4引起的強烈的非特異性肝臟炎癥可以誘導(dǎo)模擬抗原人CYP2D6打破耐受型小鼠BALB/c的免疫耐受,從而產(chǎn)生AIH和肝纖維化,并且我們發(fā)現(xiàn),這種強烈的非特異性肝臟炎癥是通過TLR2/4信號啟動了BALB/c小鼠的AIH。

        Figure 3.TLR2/4 ligand enhanced autoimmune hepatitis (AIH) in BALB/c mice. A: the liver tissues with HE staining in week 7 (×200); B: inflammatory score of HE staining. Mean±SD.n=6.**P<0.01vsCCl4/pCY2D6 group.

        圖3 TLR2/4配體增強了BALB/c小鼠AIH

        Figure 4.TLR2/4 ligand enhanced liver fibrosis in the BALB/c mice. A: the liver tissues with Sirius red staining in week 9 (×200); B: fibrosis score of Sirius red staining. Mean±SD.n=6.**P<0.01vsCCl4/pCYP2D6 group.

        圖4 TLR2/4配體增強了BALB/c小鼠肝纖維化

        綜上所述,非特異性肝臟炎癥可能參與了AIH的啟動和發(fā)展,然而,弱的非特異性肝臟炎癥可能無法啟動耐受型小鼠BALB/c的AIH,只有強烈的非特異性肝臟炎癥才能啟動耐受型小鼠BALB/c的AIH,而且這種強烈的非特異性肝臟炎癥可能是由TLR2/4配體介導(dǎo)的。因此,本研究結(jié)果對深入研究AIH的致病機制具有重要意義,為設(shè)計相應(yīng)的藥物靶點提供了有效路徑。

        猜你喜歡
        小鼠
        晚安,大大鼠!
        萌小鼠,捍衛(wèi)人類健康的“大英雄”
        視神經(jīng)節(jié)細胞再生令小鼠復(fù)明
        科學(xué)(2020年3期)2020-11-26 08:18:30
        小鼠大腦中的“冬眠開關(guān)”
        今天不去幼兒園
        清肝二十七味丸對酒精性肝損傷小鼠的保護作用
        中成藥(2018年2期)2018-05-09 07:19:34
        米小鼠和它的伙伴們
        高氟對C57BL/6J小鼠睪丸中AQP1、AQP4表達的影響
        Avp-iCre轉(zhuǎn)基因小鼠的鑒定
        加味四逆湯對Con A肝損傷小鼠細胞凋亡的保護作用
        美女很黄很色国产av| 亚洲AV永久无码精品一区二国| 日韩精品中文字幕免费人妻| 嫩呦国产一区二区三区av| 男人的天堂免费a级毛片无码| 亚洲av日韩av无码av| 亚洲成a人片在线观看中文!!!| 美女一区二区三区在线视频| 亚洲日韩精品a∨片无码加勒比| 三级4级全黄60分钟| AV无码免费不卡在线观看| 美国黄色av一区二区| 亚洲综合激情另类小说区| www插插插无码免费视频网站 | 开心激情视频亚洲老熟女| 成人无码网www在线观看| 亚洲一区二区三区偷拍女厕| 女同另类激情在线三区 | 欲求不満の人妻松下纱荣子 | 久人人爽人人爽人人片av| 吃奶还摸下面动态图gif| 亚洲无码激情视频在线观看| 日本免费看片一区二区三区| 精品欧洲av无码一区二区14| 少妇高潮惨叫喷水在线观看| 久久亚洲一级av一片| 亚洲av网站在线观看一页| 人妻无码一区二区视频| 亚洲AⅤ无码片一区二区三区| 国产精品久久一区二区蜜桃| 亚洲中字幕日产av片在线| 亚洲国产精品特色大片观看完整版 | 丰满熟妇人妻无码区| 男女动态91白浆视频| 久久精品国产亚洲av影院| 亚洲乱码视频在线观看| 青春草在线观看免费视频| 精品国产亚洲亚洲国产| 国产精品国产av一区二区三区| 中文字幕人妻中文| 国产精品久久久久久2021|