亚洲免费av电影一区二区三区,日韩爱爱视频,51精品视频一区二区三区,91视频爱爱,日韩欧美在线播放视频,中文字幕少妇AV,亚洲电影中文字幕,久久久久亚洲av成人网址,久久综合视频网站,国产在线不卡免费播放

        ?

        BDNF在APP/PS1轉(zhuǎn)基因小鼠皮層和海馬內(nèi)的表達(dá)及其對(duì)學(xué)習(xí)記憶能力的影響*

        2019-05-28 09:05:56郝繼偉李鶯歌耿慧霞
        中國(guó)病理生理雜志 2019年5期
        關(guān)鍵詞:海馬記憶小鼠

        郝繼偉,李鶯歌,王 來(lái),耿慧霞△

        (河南大學(xué)1護(hù)理與健康學(xué)院,2生命科學(xué)學(xué)院,河南 開封 475001)

        阿爾茨海默病(Alzheimer disease,AD)是一種中樞神經(jīng)慢性退行性疾病,其典型的神經(jīng)病理學(xué)變化為大腦內(nèi)出現(xiàn)β-淀粉樣蛋白(amyloid β-protein,Aβ)沉淀形成老年斑和神經(jīng)原纖維纏結(jié)(neurofibrillary tangles,NFTs),從而致使神經(jīng)元大量凋亡,導(dǎo)致患者記憶能力的降低和認(rèn)知、情感的障礙[1]。APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠大腦神經(jīng)元內(nèi)轉(zhuǎn)入突變的淀粉樣前體蛋白(APPswe)和早老素(ΔE9)基因,從而使該小鼠的大腦內(nèi)在3月齡時(shí)即可檢測(cè)出Aβ斑,因此,常作為研究AD的一種動(dòng)物模型[2]。

        腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)屬于神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子家族成員之一,廣泛表達(dá)在皮層、海馬、杏仁核和小腦等腦區(qū),參與神經(jīng)元的發(fā)育、生長(zhǎng)、軸突出芽和樹突棘形成等神經(jīng)元的成熟過(guò)程,影響著神經(jīng)元與神經(jīng)元之間突觸的可塑性和學(xué)習(xí)記憶能力的形成等高級(jí)神經(jīng)生物學(xué)過(guò)程[3]。AD患者的臨床檢測(cè)顯示大腦內(nèi)BDNF的表達(dá)減少,然而對(duì)多種AD動(dòng)物模型的研究表明,腦內(nèi)BDNF表達(dá)水平的變化出現(xiàn)差異,如APPswe和APPswe/PS1-P264L模型小鼠的BDNF在mRNA水平降低,而APPswe/PS1-M146V 模型小鼠沒(méi)有發(fā)生該類改變;APPswe/PS1/tau模型小鼠腦內(nèi)BDNF在蛋白質(zhì)水平表達(dá)降低,而另外的研究顯示該蛋白的表達(dá)水平升高[4]。為進(jìn)一步明確AD動(dòng)物模型APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠腦內(nèi)BDNF的表達(dá)變化以及對(duì)學(xué)習(xí)記憶能力的影響,本研究以APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠作為研究對(duì)象,利用剛果紅染色、TUNEL試劑盒、免疫熒光、Western blot技術(shù)和Morris水迷宮方法分別檢測(cè)大腦皮層和海馬區(qū)淀粉樣蛋白Aβ斑的沉積,神經(jīng)元細(xì)胞凋亡,BDNF的表達(dá)以及空間學(xué)習(xí)記憶能力,從而深入探究BDNF在野生型小鼠和APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠大腦皮層和海馬內(nèi)的表達(dá)變化以及對(duì)學(xué)習(xí)記憶能力的影響。

        材 料 和 方 法

        1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

        C57BL/6小鼠和APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠購(gòu)于南京大學(xué)模式動(dòng)物研究所[許可證號(hào):SCXK(蘇)2001-0001],并在本實(shí)驗(yàn)室飼養(yǎng)繁育。APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因雄鼠與野生型雌鼠合籠繁殖,幼鼠2周后,做基因型鑒定,選取6月齡和12月齡的雌雄APP/PS1轉(zhuǎn)基因鼠和野生型小鼠作為研究對(duì)象。在保證供水、飼料充足的前提下,按自然晝夜節(jié)律,室溫22~25 ℃、相對(duì)濕度60%~80%的環(huán)境下飼養(yǎng)。

        2 主要試劑

        TUNEL細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒購(gòu)自Promega;DAPI試劑和剛果紅染色試劑盒購(gòu)自索萊寶公司;兔抗BDNF多克隆抗體(ab108319)和鼠抗β-actin多克隆抗體(ab8226)購(gòu)自Abcam;2×PCR Mix和RIPA裂解液購(gòu)自康為世紀(jì)生物有限公司;增強(qiáng)型ECL發(fā)光試劑盒購(gòu)自Millipore;Alexa Fluor 488標(biāo)記的熒光 II 抗和BCA蛋白定量試劑盒購(gòu)自Thermo Fisher;HRP標(biāo)記的 II 抗購(gòu)自北京中杉金橋生物科技有限公司;其它試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。

        3 實(shí)驗(yàn)方法

        3.1石蠟切片 選取適宜月齡的APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因和C57BL/6野生型小鼠,10%水合氯醛腹腔麻醉,預(yù)冷PBS經(jīng)心臟灌流,直至灌流液清亮為止,隨后用4%的多聚甲醛緩緩進(jìn)行灌注固定。將固定后的小鼠用剪刀從頸部剪開取出完整大腦,并置于4%多聚甲醛中室溫浸泡固定24 h,然后用PBS漂洗3次。對(duì)固定后的大腦組織塊進(jìn)行修剪處理,棄小腦,分離左右半球。隨后進(jìn)行脫水處理,依次在濃度為50%的乙醇浸泡2 h、70%的乙醇浸泡過(guò)夜、80%的乙醇浸泡1 h、90%的乙醇浸泡1 h、95%的乙醇Ⅰ浸泡1 h、95%的乙醇Ⅱ浸泡1 h、無(wú)水乙醇Ⅰ浸泡1 h、無(wú)水乙醇Ⅱ浸泡1 h、二甲苯Ⅰ浸泡1 h、二甲苯Ⅱ浸泡1 h,放入冬青油中過(guò)夜。提前1~2 h打開生物組織包埋機(jī),脫水后的組織塊分別用蠟Ⅰ、蠟Ⅱ和蠟Ⅲ各處理1 h,最后用硬蠟包埋即可得到蠟塊。將蠟塊置于萊卡輪式切片機(jī)(Leica,RM2235)上切為厚度為4 μm的薄片。

        3.2Aβ斑標(biāo)記 將切好的組織切片鋪于涂有多聚賴氨酸的載玻片上,60 ℃烘箱烘干1 h,常規(guī)脫蠟至水(二甲苯Ⅰ浸泡15 min,二甲苯Ⅱ浸泡15 min、無(wú)水乙醇Ⅰ浸泡5 min、無(wú)水乙醇Ⅱ浸泡5 min、95%的乙醇Ⅰ浸泡5 min、95%的乙醇Ⅱ浸泡5 min、90%的乙醇浸泡5 min、80%的乙醇浸泡5 min、70%的乙醇浸泡5 min、50%的乙醇浸泡5 min)。入蘇木素染色液浸染5~15 min,酸性乙醇分化10~15 s,然后立即入水終止分化,自來(lái)水沖洗2 min,再用堿性NaCl溶液浸染切片,然后將切片直接放入堿性剛果紅染色液浸染(溶液均為現(xiàn)配現(xiàn)用),無(wú)水乙醇沖洗,逐級(jí)常規(guī)乙醇脫水,二甲苯透明,中性樹膠封固。顯微鏡(Olympus, BX61)觀察海馬和皮層區(qū)域并拍照。

        3.3TUNEL檢測(cè)細(xì)胞凋亡 選取小鼠大腦石蠟切片,常規(guī)脫蠟至水,根據(jù)試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作。將載玻片依次浸入0.85% 的NaCl溶液5 min、PBS 5 min、4%的甲醛溶液20 min,PBS洗滌 5 min×3次,蛋白酶 K覆蓋孵育7~12 min、PBS 5 min、4%的甲醛溶液5 min、PBS 5 min、100 μL平衡緩沖液覆蓋細(xì)胞5~10 min(以上過(guò)程均在室溫下進(jìn)行)。與此同時(shí)提前避光配制rTdT孵育緩沖液(每50 μL 反應(yīng)體系含有平衡緩沖液45 μL+核苷混合物5 μL+rTdT酶1 μL)。吸去平衡緩沖液,然后在細(xì)胞上加上rTdT孵育緩沖液,置于濕盒內(nèi),在37 ℃孵育60 min發(fā)生加尾反應(yīng),避免光照,后將載玻片浸入2×SSC溶液,室溫放置15 min以終止反應(yīng),后將載玻片浸入新鮮的PBS中洗滌3次,每次5 min。DAPI甘油封片,在熒光顯微鏡下觀察皮層和海馬區(qū)域并拍照。

        3.4免疫熒光 選取石蠟切片,脫蠟至水,0.1 mol/L的 PBS浸洗3次,每次10 min,后將石蠟切片浸入檸檬酸鹽緩沖液中微波加熱到92~100 ℃ 10 min(注意不能沸騰)以修復(fù)抗原,待放置恢復(fù)常溫后PBS洗3次,每次10 min,擦干切片組織周圍水分后用免疫組化筆圈起組織,加稀釋過(guò)的 I 抗(兔抗BDNF多克隆抗體,稀釋比例1∶100),放置于濕盒內(nèi),4 ℃冰箱過(guò)夜。次日早晨,取出室溫放置30 min,PBS洗滌3次,每次10 min。擦干多余液體,注意組織不能干透,避光加稀釋過(guò)的 II 抗(稀釋比例1∶500),室溫孵育3 h或38 ℃ 30 min,PBS洗滌3次,每次10 min,DAPI甘油封片,熒光顯微鏡(Olympus,BX61)觀察皮層和海馬區(qū)域并拍照。

        3.5Western blot實(shí)驗(yàn) 10%水合氯醛腹腔麻醉實(shí)驗(yàn)小鼠,冰上灌流,取腦,剝離皮層和海馬,分別置于800 mL和500 mL 的RIPA裂解液中,勻漿器勻漿,4 ℃、12 000×g離心10 min,收集上清凍存-80 ℃?zhèn)溆谩CA法對(duì)蛋白定量。30 μg樣品經(jīng)12% SDS-PAGE分離,電流200 mA,濕法轉(zhuǎn)膜2 h,5%脫脂牛奶室溫封閉1 h,加入 I 抗,4 ℃過(guò)夜。次日早上,用TBST漂洗3次,每次5 min,然后在含有 II 抗的孵育袋內(nèi)室溫孵育2 h,TBST漂洗3次,每次5 min,添加ECL發(fā)光液暗室曝片。

        3.6Morris水迷宮實(shí)驗(yàn) 分2個(gè)部分進(jìn)行。第1部分為定位航行實(shí)驗(yàn),該實(shí)驗(yàn)用于訓(xùn)練和檢測(cè)小鼠的空間學(xué)習(xí)和記憶能力。每天訓(xùn)練小鼠,選定水迷宮的某一象限將小鼠放入,攝像頭記錄并計(jì)算小鼠從放入點(diǎn)游到平臺(tái)所需的時(shí)間,即為逃避潛伏期;倘若小鼠在60 s時(shí)間內(nèi)沒(méi)有游行到平臺(tái),則引導(dǎo)其到平臺(tái)并停留10 s。每天如此訓(xùn)練,共持續(xù)6 d。第7天開始記錄小鼠游到平臺(tái)所需的時(shí)間即為逃避潛伏期。第2部分為空間搜索實(shí)驗(yàn):在第8天時(shí),將水下平臺(tái)撤除,將小鼠放置在訓(xùn)練時(shí)的同一象限,記錄60 s內(nèi)小鼠尋找平臺(tái)所耗費(fèi)的時(shí)間和進(jìn)入該平臺(tái)所位象限的次數(shù),作為空間記憶的檢測(cè)指標(biāo)。

        4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

        采用GraphPad Prism 6.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。數(shù)據(jù)結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)的形式表示。組間均數(shù)比較采用單因素方差分析(one-way ANOVA)或獨(dú)立樣品t檢驗(yàn),以P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

        結(jié) 果

        1 Aβ斑的形成

        剛果紅染色標(biāo)記皮層和海馬區(qū)Aβ斑變化的結(jié)果顯示,12月齡的野生型小鼠皮層和海馬CA1區(qū)都沒(méi)有見(jiàn)到Aβ斑的出現(xiàn),而6月齡和12月齡的APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠皮層和海馬CA1區(qū)都出現(xiàn)Aβ斑,且12月齡小鼠Aβ斑的數(shù)量多于6月齡小鼠(P<0.05)。對(duì)Aβ斑的形態(tài)結(jié)構(gòu)和大小分析表明,12月齡小鼠皮層和海馬CA1區(qū)Aβ斑的形態(tài)明顯大于6月齡小鼠,見(jiàn)圖1、2。這說(shuō)明隨著年歲的增加和發(fā)病時(shí)間的延長(zhǎng),腦內(nèi)形成的Aβ斑數(shù)量增加,形態(tài)變大,因此后續(xù)實(shí)驗(yàn)就采用12月齡的APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠作為研究對(duì)象。

        2 神經(jīng)元凋亡

        APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠和野生型小鼠皮層和海馬區(qū)神經(jīng)元細(xì)胞凋亡的檢測(cè)結(jié)果顯示,12月齡APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量明顯多于野生型小鼠(P<0.01),見(jiàn)圖3、4。

        3 BDNF的表達(dá)

        分別采用免疫熒光和Western blot的方法檢測(cè)APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠和野生型小鼠皮層和海馬區(qū)BDNF的表達(dá)變化。免疫熒光的結(jié)果顯示,野生型小鼠BDNF表達(dá)陽(yáng)性的細(xì)胞數(shù)量多于APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠(P<0.01),見(jiàn)圖5。Western blot結(jié)果顯示,野生型小鼠皮層和海馬區(qū)成熟形式的BDNF表達(dá)量明顯高于APP/PS1轉(zhuǎn)基因小鼠(P<0.01),見(jiàn)圖6。

        Figure 1.Aβ plaques were stained with Congo red in the cerebral cortex of WT andAPP/PS1transgenic mice. A: WT mice; B: 6-month-oldAPP/PS1mice; C: 12-month-oldAPP/PS1mice; D: the quantificative analysis of Aβ plaques inAPP/PS1mice. The scale bar=20 μm. Mean±SD.n=3.*P<0.05vs6 months.

        圖1 剛果紅染色標(biāo)記皮層的Aβ斑

        Figure 2.Aβ plaques were stained with Congo red in the hippocampus of WT andAPP/PS1transgenic mice. A: WT mice; B: 6-month-oldAPP/PS1mice; C: 12-month-oldAPP/PS1mice; D: the quantitative analysis of Aβ plaques inAPP/PS1mice. The scale bar=20 μm. Mean±SD.n=3.*P<0.05vs6 months.

        圖2 剛果紅染色標(biāo)記海馬的Aβ斑

        4 空間學(xué)習(xí)記憶能力

        Morris水迷宮檢測(cè)結(jié)果顯示,APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠的逃逸潛伏期長(zhǎng)于野生型小鼠,且在空間搜索實(shí)驗(yàn)中,APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠在60 s內(nèi)穿越平臺(tái)所在象限的次數(shù)也少于野生型小鼠(P<0.05或P<0.01),見(jiàn)圖7A、B。軌跡圖的結(jié)果表明APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠的運(yùn)行軌跡雜亂無(wú)章,而野生型小鼠運(yùn)行軌跡并不雜亂,圍繞平臺(tái)尋找,規(guī)律性比較明顯,見(jiàn)圖7C。

        討 論

        隨著老齡化社會(huì)的到來(lái),AD嚴(yán)重威脅著中老年人的身心健康。病理檢測(cè)發(fā)現(xiàn),該病的典型病理學(xué)特點(diǎn)為大腦內(nèi)出現(xiàn)Aβ斑聚集和神經(jīng)元纖維纏結(jié),并觀察到神經(jīng)元的凋亡和軸突降解,致使患者出現(xiàn)認(rèn)知功能障礙、記憶能力降低等癥狀。有研究顯示,APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠可以作為AD研究的動(dòng)物模型,最早在3月齡時(shí)即可觀測(cè)到腦內(nèi)Aβ斑的形成,本研究證實(shí),該鼠在6個(gè)月時(shí)可觀察到皮層和海馬區(qū)出現(xiàn)Aβ斑,并隨病程的增長(zhǎng),12月齡時(shí),Aβ斑的數(shù)量和形態(tài)都呈進(jìn)行性增加,說(shuō)明隨著年歲的增加,該小鼠AD的神經(jīng)病理學(xué)變化更加明顯,符合臨床上年齡越大該病發(fā)病率越高、癥狀越嚴(yán)重的特點(diǎn)。伴隨Aβ斑形成,出現(xiàn)的是神經(jīng)元凋亡的數(shù)量發(fā)生相應(yīng)的變化,如12月齡的APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠皮層和海馬區(qū)神經(jīng)元細(xì)胞凋亡的數(shù)量與野生型相比急劇增加。對(duì)小鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力的檢測(cè)也表明,12月齡APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠的空間學(xué)習(xí)記憶能力受到嚴(yán)重?fù)p傷,如逃逸潛伏期所耗時(shí)長(zhǎng)遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于野生型小鼠,在60 s內(nèi)穿越平臺(tái)所位象限的次數(shù)也少于野生型小鼠,且在Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)中的游泳軌跡雜亂無(wú)章,沒(méi)有規(guī)律可循。這些變化與AD患者出現(xiàn)Aβ斑聚集的病理變化和病程增加出現(xiàn)認(rèn)知、記憶功能障礙的臨床表現(xiàn)相一致,表明該轉(zhuǎn)基因小鼠可以作為研究AD發(fā)病機(jī)制的一種理想動(dòng)物模型。

        Figure 3.Apoptosis in the cerebral cortex of WT andAPP/PS1transgenic mice was detected by TUNEL assay. The scale bar=50 μm. Mean±SD.n=3.**P<0.01vsWT group.

        圖3 野生型和APP/PS1轉(zhuǎn)基因小鼠皮層細(xì)胞凋亡情況的比較

        Figure 4.Apoptosis in the hippocampus of WT andAPP/PS1transgenic mice was detected by TUNEL assay. The scale bar=50 μm. Mean±SD.n=3.**P<0.01vsWT group.

        圖4 野生型和APP/PS1轉(zhuǎn)基因小鼠海馬區(qū)細(xì)胞凋亡情況的比較

        Figure 5.BDNF positive cells were detected by immunofluorescence staining in cerebral cortex and hippocampus of WT andAPP/PS1transgenic mice. The scale bar=20 μm. Mean±SD.n=3.**P<0.01vsWT group.

        圖5 免疫熒光檢測(cè)皮層和海馬區(qū)BDNF表達(dá)陽(yáng)性的細(xì)胞數(shù)

        Figure 6.BDNF expression was detected by Western blot in the cerebral cortex and hippocampus of WT andAPP/PS1transgenic mice. Mean±SD.n=3.**P<0.01vsWT group.

        圖6 Western blot檢測(cè)皮層和海馬區(qū)BDNF的表達(dá)

        Figure 7.The changes of learning and memory abilities of WT andAPP/PS1transgenic mice. A: the escape latency; B: the times across the platform quadrant in 60 s; C: the swim-tracking path. Mean±SD.n=3.*P<0.05,**P<0.01vsWT group.

        圖7 野生型與APP/PS1轉(zhuǎn)基因小鼠學(xué)習(xí)記憶能力的變化

        BDNF最早由德國(guó)神經(jīng)化學(xué)家Barde從豬的大腦中分離并克隆[5],其基因在人類定位于第11號(hào)染色體短臂1 區(qū)3 帶(11p13),而在鼠類定位于第12號(hào)染色體上。BDNF基因編碼的多肽鏈為前體BDNF(proBDNF),相對(duì)分子質(zhì)量約為32 kD,經(jīng)過(guò)胞內(nèi)的絲氨酸蛋白酶和基質(zhì)金屬蛋白酶切除N端的信號(hào)肽等翻譯后修飾過(guò)程,從而形成相對(duì)分子量為13 kD的具有生物學(xué)活性的成熟形式BDNF(active BDNF)[6-7]。成熟形式的BDNF與酪氨酸蛋白激酶受體TrkB結(jié)合發(fā)揮其促進(jìn)神經(jīng)元分化、發(fā)育、存活、軸突出芽、樹突棘形成、突觸可塑性以及學(xué)習(xí)記憶的形成和維持等神經(jīng)生物學(xué)功能[8]。本研究證實(shí),BDNF陽(yáng)性表達(dá)的細(xì)胞數(shù)量在12月齡的APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠皮層和海馬區(qū)與野生型相比明顯減少,并且成熟形式的BDNF表達(dá)也隨著減少,表明BDNF在大腦的表達(dá)量降低參與了APP/PS1轉(zhuǎn)基因小鼠產(chǎn)生AD的病理變化及臨床表現(xiàn),如神經(jīng)元細(xì)胞凋亡增加和學(xué)習(xí)記憶能力降低。

        BDNF在神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)的重要作用促使研究人員關(guān)注其參與中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的病理機(jī)制和治療潛力,對(duì)AD患者的大腦標(biāo)本檢測(cè)表明,BDNF在mRNA和蛋白質(zhì)表達(dá)水平都出現(xiàn)降低,且這種減低在AD患者出現(xiàn)輕度認(rèn)知障礙階段就已發(fā)生,說(shuō)明BDNF在大腦內(nèi)表達(dá)水平的降低確實(shí)導(dǎo)致AD記憶能力降低等臨床癥狀的出現(xiàn)[4]。BDNF基因的單核苷酸多態(tài)性(Val66Met,rs6265)影響該蛋白在細(xì)胞內(nèi)的轉(zhuǎn)導(dǎo)和分泌,也參與AD的發(fā)病病理機(jī)制,尤其是Met攜帶者具有更嚴(yán)重的Aβ斑聚集和認(rèn)知功能障礙[9-10]。其它研究證明,增強(qiáng)或促進(jìn)腦內(nèi)BDNF的表達(dá)可以改善其他中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的病理改變和臨床癥狀,如腦內(nèi)高的BDNF水平抑制抑郁癥小鼠海馬區(qū)神經(jīng)元的凋亡,減輕抑郁癥癥狀,從而發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用[11-12]。本研究顯示,12月齡的APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠皮層和海馬區(qū)成熟形式BDNF的表達(dá)下降,并出現(xiàn)神經(jīng)元凋亡增加,導(dǎo)致小鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力的降低。因此,調(diào)控腦內(nèi)成熟BDNF的含量也許可以作為預(yù)防和治療AD的一個(gè)有效手段。

        猜你喜歡
        海馬記憶小鼠
        海馬
        小鼠大腦中的“冬眠開關(guān)”
        海馬
        米小鼠和它的伙伴們
        記憶中的他們
        “海馬”自述
        兒時(shí)的記憶(四)
        兒時(shí)的記憶(四)
        記憶翻新
        海外文摘(2016年4期)2016-04-15 22:28:55
        海馬
        日韩有码在线观看视频| 日韩AV有码无码一区二区三区| 午夜亚洲国产精品福利| 99久久婷婷国产综合亚洲91| 国产亚洲成年网址在线观看| 亚洲白嫩少妇在线喷水| 久久亚洲日韩精品一区二区三区| 无码国产色欲xxxxx视频| 狠狠久久亚洲欧美专区| av大片在线无码永久免费网址 | 国产三级一区二区三区在线观看 | 中文字幕一区日韩精品| 自拍偷自拍亚洲精品播放| baoyu网址国产最新| 国产亚洲精品一区在线| 91精品亚洲成人一区二区三区| 久久精品国产网红主播| 9999精品视频| 最新国产一区二区三区| 无码人妻丰满熟妇区免费| 免费网站看v片在线18禁无码| 亚洲xxxx做受欧美| 久久久亚洲精品午夜福利| 青青草视频在线观看绿色| 女人色熟女乱| 亚洲人成影院在线无码观看| 亚洲中国美女精品久久久 | 特黄做受又粗又长又大又硬| 亚洲色图+国产精品| 91精品国产乱码久久久| 亚洲av无码国产精品色| 国内揄拍国内精品人妻浪潮av | 白白白色视频在线观看播放 | 91精品手机国产在线能| 综合图区亚洲偷自拍熟女| 91l视频免费在线观看| 人人摸人人搞人人透| 欧洲亚洲综合| 人妻系列少妇极品熟妇| 日韩欧美在线综合网另类| 久久久久久久女国产乱让韩|