趙詠中 ，董 偉 ，王建軍 ，李 兵 ，徐 寧

（1.武威市畜牧獸醫(yī)科學(xué)研究院，甘肅 武威 733000；2.武威普康養(yǎng)殖有限公司，甘肅 武威 733000）

澳洲白綿羊是澳大利亞第一個(gè)利用現(xiàn)代基因測定手段培育而成的粗毛型、中大型肉羊品種，集成了白頭杜泊綿羊、萬瑞綿羊、無角陶賽特羊和特克塞爾羊的優(yōu)良品種基因，具有抗逆性好、生長速度快、性成熟早、四季發(fā)情、合群性強(qiáng)、胴體質(zhì)量好、肉質(zhì)好等特點(diǎn)，對雜交改良湖羊體軀不豐滿、胴體形狀欠佳等種質(zhì)特性具有重要意義。而人工授精技術(shù)是實(shí)現(xiàn)澳洲白綿羊純繁和湖羊雜交改良的重要技術(shù)措施。目前，在生產(chǎn)實(shí)踐中，羊的人工授精一般采用鮮精，且通過子宮頸口輸精，但對精液的不同劑型、輸精部位對母羊情期受胎率影響的研究報(bào)道較少。因此，本試驗(yàn)選用澳洲白綿羊精液研究不同精液劑型和輸精部位對湖羊情期受胎率的影響，以探索最佳精液劑型和輸精部位，同時(shí)也為澳洲白綿羊的繁殖育種技術(shù)提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)時(shí)間與地點(diǎn)

2016年至2018年的春夏時(shí)節(jié)在甘肅普康養(yǎng)殖有限公司（飼養(yǎng)量達(dá)3萬只）進(jìn)行試驗(yàn)。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物與飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)?zāi)秆蜻x取年齡2歲左右、生長發(fā)育良好、無繁殖疾病的經(jīng)產(chǎn)湖羊，試驗(yàn)期間參加配種母羊共2 431只。試驗(yàn)公羊?yàn)榧兎N澳洲白公羊（天津奧群牧業(yè)有限公司引進(jìn)），年齡3歲左右，體格健壯，無傳染性疾病。

試驗(yàn)羊全部舍飼，飼喂全混合日糧，上、下午各1次，自由飲水，羊舍內(nèi)放置舔磚，自由舔舐。為提高配種公羊的精液品質(zhì)，采精前15 d開始對公羊進(jìn)行采精訓(xùn)練，并對精液進(jìn)行品質(zhì)檢查。

1.3 試驗(yàn)藥品與儀器

高錳酸鉀、生理鹽水、75%乙醇、青鏈霉素、甘油等藥品；Motic SMZ-140顯微鏡、腹腔內(nèi)窺鏡、恒溫水浴鍋、高壓滅菌鍋、液氮罐等儀器；母羊保定臺、子宮鉗、手術(shù)剪等、開膣器、集精杯等輸精器械。

1.4 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與分組

試驗(yàn)?zāi)秆蚓鶠樽匀话l(fā)情，采用試情法鑒定母羊發(fā)情。公羊使用假陰道法采集精液，鏡檢合格稀釋后，通過人工授精方式進(jìn)行配種。母羊1個(gè)情期應(yīng)輸精2次，發(fā)情時(shí)輸精1次，間隔10 h左右復(fù)配1次。陰道底部、子宮頸口輸精的母羊，返情時(shí)要追配1次。

發(fā)情母羊隨機(jī)分組，3種精液劑型對母羊受胎率影響試驗(yàn)采用常規(guī)的子宮頸內(nèi)口部位輸精；3種輸精部位對母羊受胎率影響試驗(yàn)采用鮮精精液劑型。即Ⅰ組：冷凍精液—子宮頸內(nèi)口；Ⅱ組：4℃冷卻精液（24 h后廢棄）—子宮頸內(nèi)口；Ⅲ組：鮮精—子宮頸內(nèi)口；Ⅳ組：陰道—鮮精；Ⅴ組：子宮頸內(nèi)口—鮮精；Ⅵ組：腹腔子宮角—鮮精。

1.5 方法

1.5 .1發(fā)情鑒定

1.5.1 .1體外觀察鑒定 試情員將系有試情布的公羊牽入母羊群中尋找發(fā)情母羊，每天上、下午2次試情。公母羊試情比例1∶25，試情30 min。如果母羊主動(dòng)接近公羊，或公羊爬跨時(shí)母羊靜立不動(dòng)視為發(fā)情母羊。

1.5.1 .2卵巢觀察鑒定 腹腔鏡子宮角輸精時(shí)，觀察卵巢上卵泡、紅體及黃體數(shù)目。如果卵巢上有卵泡發(fā)育，視為發(fā)情母羊；如果卵巢處于靜止或無卵泡發(fā)育，即使體外有發(fā)情表現(xiàn)，也視為未發(fā)情母羊。

1.5.2 精液處理

1.5.2 .1 稀釋液配制 100 mL蒸餾水中加葡萄糖3 g、檸檬酸鈉1.4 g，溶解后過濾3～4次，蒸煮30 min滅菌，降至室溫后，再加新鮮卵黃20 mL，青霉素10萬IU，震蕩溶解待用［4］。

1.5.2 .2鮮精 輸精前1 h對澳洲白種公羊進(jìn)行采精，快速送往鏡檢室對精子活力進(jìn)行鑒定，活力在0.7以上的精液稀釋后留下待用。

1.5.2 .3凍精 凍精為純種澳洲白綿羊凍精，由天津奧群牧業(yè)有限公司提供。輸精前，從液氮中取出精液細(xì)管，迅速放置到37℃的保溫水浴鍋中，10 s后取出待用。

精液通過上述有效處理后，確保輸精時(shí)有效精子數(shù)在4 000萬個(gè)以上（采用PHOTOMETER SDM5全自動(dòng)精子密度儀進(jìn)行測定），以提高參配母羊的受胎率。

1.5.3 人工授精

1.5.3 .1陰道底部輸精 母羊自然站立，保定母羊頭部，向上提起尾巴對陰門周圍消毒，輸精器插入陰道底部，注入精液，完成輸精。

1.5.3 .2子宮頸內(nèi)口輸精 母羊倒立保定，陰門周圍消毒，陰道內(nèi)慢慢插入開膣器，尋找子宮頸口，后將輸精器插入到子宮頸口內(nèi)0.5～1.0 cm深處，注入精液，完成輸精。保定員拍打母羊股部一掌，使其子宮頸收縮，以防精液外流，影響母羊受胎率［5］。

1.5.3 .3腹腔鏡子宮角輸精 輸精前12 h母羊禁食。母羊仰臥保定，剪去乳頭近腹部被毛，消毒，腹中線右側(cè)2～3 cm處縱切，插入套管針，充入適量CO2，向腹腔伸入內(nèi)窺鏡，觀察子宮角及排卵情況；腹中線左側(cè)相同部位切口，用牽引鉗將有黃體發(fā)育一側(cè)的子宮角拉出，生理鹽水沖洗，子宮角遠(yuǎn)端1/3處刺破子宮壁，輸入精液，放回子宮角，取出器械，縫合，肌肉注射土霉素3 mL（消炎），完成輸精。

1.5.4 輸精后的管理與觀察 人工授精完成后，對母羊維持較高營養(yǎng)水平的日糧，隨時(shí)觀察母羊狀態(tài)，減少刺激，避免應(yīng)激。配種一周后，要特別注意觀察母羊的返情情況，對返情母羊進(jìn)行追配。

1.5.5 妊娠鑒定 人工授精后，對未返情的母羊第28天時(shí)利用直腸探頭測孕儀進(jìn)行孕檢，并詳細(xì)記錄妊娠情況。

1.6 數(shù)據(jù)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)處理、統(tǒng)計(jì)、圖表制作采用Excel 2007軟件，結(jié)果運(yùn)用SPSS 17.0軟件進(jìn)行卡方檢驗(yàn)分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 澳洲白綿羊不同精液劑型對湖羊情期受胎率的影響

由表1可知，通過常規(guī)部位子宮頸內(nèi)口輸精，采用冷凍精液、4℃冷卻精液和鮮精的第1情期受胎率分別為 66.7%、81.2%、88.0%，組間均呈極顯著差異（P＜0.01）；情期受胎率分別為 66.5%、80.3%、87.8%，組間也均呈極顯著差異（P＜0.01），與第1情期受胎率相比均有所降低；3組試驗(yàn)?zāi)秆虻氖芴ヂ史謩e為88.7%、95.4%、98.3%，其中Ⅲ組鮮精的受胎率最高，與Ⅰ組間呈極顯著差異（P＜0.01），與Ⅱ組間呈顯著差異（P＜0.05），而Ⅱ組與Ⅰ組間呈極顯著差異（P＜0.01）。

表1不同精液劑型對湖羊母羊情期受胎率的影響

2.2 不同輸精部位對湖羊情期受胎率的影響

由表2可知，不同輸精部位對母羊受胎率也有影響。采用鮮精，通過陰道底部、子宮頸內(nèi)口和腹腔子宮角進(jìn)行輸精的第1期受胎率分別為74.1%、85.8%、95.7%，組間均呈極顯著差異（P＜0.01）；情期受胎率分別為72.9%、86.4%、95.1%，組間也均呈極顯著差異（P＜0.01）；受胎率分別為91.8%、98.7%、99.2%，其中腹腔子宮角受胎率最高，與Ⅳ組間呈極顯著差異（P＜0.01），與Ⅴ組間差異不顯著（P＞0.05），但Ⅳ組與Ⅴ組間呈極顯著差異（P＜0.01）。

表2不同輸精部位對母羊情期受胎率的影響

3 討論

3.1 澳洲白綿羊不同精液劑型對母羊受胎率的影響

近年來，很多研究表明精液劑型影響母畜的受胎率。劉桂娟等［6］研究表明，鮮精子宮頸口輸精母羊受胎率（53.33%）明顯優(yōu)于凍精人工授精的受胎率（30.61%）。烏達(dá)巴拉等［7］驗(yàn)證，鮮精子宮頸口人工授精母羊的受胎率（76.68%）極顯著高于凍精子宮頸口的受胎率（57.05%）（P＜0.01）。趙有璋［4］提出，新鮮精液、低溫保存和冷凍精子到達(dá)受精部位的能力分別為0.8～1分、0.5～0.8分、0.4分，若要提高凍精受胎率，在輸精時(shí)應(yīng)注重輸精部位和輸精次數(shù)。本試驗(yàn)對冷凍精液、4℃冷卻精液、鮮精3種精液劑型通過常規(guī)子宮頸內(nèi)口人工輸精對湖羊母羊情期受胎率進(jìn)行比較研究，結(jié)果表明，鮮精的情期受胎率和平均受胎率均最高，其中情期受胎率87.8%，與冷凍精液（66.5%）和4℃冷卻精液（80.3%）之間均呈極顯著差異（P＜0.01）；平均受胎率98.3%，與冷凍精液（88.7%）之間差異極顯著（P＜0.01），與 4℃冷卻精液（95.4%）之間差異顯著（P＜0.05）。鑒于以上研究成果，為提高湖羊母羊的情期受胎率，在保證單次輸精的平均有效精子濃度達(dá)3 000萬個(gè)以上［8］，優(yōu)先選擇鮮精，其次為4℃冷卻精液，以提高母羊人工授精的受胎率。

盡管鮮精和4℃冷卻精液的情期受胎率較高，但由于精子有效存活期較短（鮮精一般4 h，冷卻精液一般在12 h以內(nèi)［9］），遠(yuǎn)距離運(yùn)輸配種會降低精子活力，影響母羊受胎率；而冷凍精液活力具有較高的穩(wěn)定性且不受地域限制，有效保存時(shí)間達(dá)10年以上（澳大利亞Salamon用保存11年的綿羊凍精進(jìn)行子宮頸輸精，產(chǎn)羔率達(dá)55%），可省去因引進(jìn)優(yōu)質(zhì)種公羊的高額成本［4］。因此，鮮精、4℃冷卻精液、凍精這3種精液劑型各具其優(yōu)缺點(diǎn)，應(yīng)根據(jù)當(dāng)?shù)馗黟B(yǎng)殖場的具體養(yǎng)殖狀況選擇適宜的精液劑型。

3.2 不同輸精部位對母羊情期受胎率的影響

采用輸精時(shí)有效精子數(shù)在4 000萬個(gè)以上的鮮精劑型，通過陰道底部、子宮頸內(nèi)口、腹腔子宮角3個(gè)輸精部位進(jìn)行人工授精的情期受胎率分別為72.9%、86.4%、95.1%，組間均呈極顯著差異（P＜0.01）；但母羊的平均受胎率卻是子宮頸內(nèi)口輸精（98.7%）極顯著高于陰道底部輸精（91.8%）（P＜0.01），與腹腔子宮角輸精（99.2%）無顯著性差異（P＞0.05）。多項(xiàng)研究表明［6-7，10］，腹腔鏡子宮角輸精效果要比陰道（受胎率較低）和子宮頸口輸精效果好很多，這可歸結(jié)為綿羊子宮頸較為復(fù)雜的結(jié)構(gòu)，精液不能到達(dá)子宮頸深部，而腹腔鏡子宮角深部輸精可逾越這種生理結(jié)構(gòu)上的障礙，提高精子進(jìn)入輸卵管壺腹部的密度，增加精卵結(jié)合幾率，從而提高了受胎率。雖然采用子宮角深部輸精可大大提高母羊的情期受胎率，但平均受胎率差別不明顯，而且此項(xiàng)技術(shù)要想取得較高的受胎率，其前提是要保證擁有高水平的技術(shù)人員，并且操作環(huán)境要保證無菌，否則易損傷子宮粘膜，引起感染，影響母羊受孕。

4 小結(jié)

綜上所述，在滿足單次輸精的平均有效精子濃度達(dá)3 000萬個(gè)以上的條件下，采用腹腔子宮角深部鮮精的輸精方式，可有效提高母羊的情期受胎率。但從經(jīng)濟(jì)效益、技術(shù)人員、外界環(huán)境等方面綜合考慮，最佳、最契合生產(chǎn)實(shí)際的人工授精方式則是通過母羊子宮頸內(nèi)口輸入鮮精劑型，此項(xiàng)技術(shù)既省時(shí)省力，又省成本，同時(shí)受胎率僅比腹腔子宮角輸鮮精的受胎率低0.5%。