張永康， 楊 剛， 李生虎

(寧夏職業(yè)技術(shù)學(xué)院，寧夏 銀川 750021)

7-脫甲氧基娃兒藤堿(DEM)，又名安托芬，是牛心樸子(CynanchumkomanoviiAL Iljinshi)中的主要有效成分，研究發(fā)現(xiàn)其具有抗腫瘤、抗菌、殺菌等藥理活性[1]，但對7-脫甲氧基娃兒藤堿(DEM)的抗炎鎮(zhèn)痛作用未見報(bào)道，鑒此，本研究通過小鼠熱板法試驗(yàn)和二甲苯致小鼠耳殼腫脹試驗(yàn)，對DEM的鎮(zhèn)痛作用和抗炎作用進(jìn)行試驗(yàn)。

1 材 料

1.1 試驗(yàn)藥物

7-脫甲氧基娃兒藤堿(DEM)，由筆者工作所在實(shí)驗(yàn)室從牛心樸子植物中分離得到。二甲苯，批號870116分析純，西安化學(xué)試劑廠生產(chǎn)。

1.2 試驗(yàn)儀器

Db-2型電熱板，蘇州威爾實(shí)驗(yàn)用品有限公司制造；AR1140電子天平，美國制造。

1.3 試驗(yàn)動(dòng)物

ICR小鼠100只，體重18～24 g，雌、雄小鼠各50只，購于寧夏醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，試驗(yàn)動(dòng)物均于室溫下自由飲水采食，所喂飼料為全價(jià)條狀飼料，購于寧夏醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。

2 方 法

2.1 DEM對小鼠熱板法鎮(zhèn)痛作用的影響

選用水溫55 ℃的水浴鍋，把小鼠置于水浴鍋上，小鼠因熱刺激而出現(xiàn)舔后足或踢后腿或四肢亂動(dòng)的反應(yīng)，以此反應(yīng)為痛反應(yīng)指標(biāo)，若反應(yīng)時(shí)間延長，則表明該藥具有鎮(zhèn)痛作用，但以60 s為限，不出現(xiàn)反應(yīng)把小鼠取出，以免損傷足部[2]。選取30只雌小鼠(雄小鼠因陰囊受熱刺激易松弛，與“熱板”接觸面積較大，常影響反應(yīng)結(jié)果)，隨機(jī)分為3組，每組10只，第1組為對照組，第2組為10 mg/kg藥物組，第3組為30 mg/kg藥物組，臀部肌肉注射，試驗(yàn)時(shí)用秒表記錄小鼠自放于熱金屬板上至出現(xiàn)疼痛反應(yīng)的時(shí)間，作為痛閾的指標(biāo)。在給藥前先測定每只小鼠的痛閾，反應(yīng)不規(guī)則者，如過敏、遲鈍、或喜跳動(dòng)者挑出不要，給藥后在第1 h內(nèi)每隔15 min測定一次痛反應(yīng)時(shí)間，記錄痛閾值并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析(t檢驗(yàn)，組間比較)。

2.2 DEM對二甲苯所致小鼠耳殼腫脹的影響[3]

小鼠40只隨機(jī)分為4組，每組10只，第1組為生理鹽水對照組，第2組、第3組、第4組分別為0.25 mg，0.50 mg，0.75 mg劑量組，臀部肌肉注射DEM注射液，每次0.5 mL，每12 h注射1次，共注射3次，對照組注射等量生理鹽水，末次給藥1 h后于小鼠左耳涂二甲苯(25 μL/耳)，45 min后用打孔器打下2片耳片稱重，以左右耳重量差計(jì)算耳增重。

3 試驗(yàn)結(jié)果

3.1 DEM對小鼠熱板法鎮(zhèn)痛作用

選取30只雌小鼠，隨機(jī)分為3組，每組10只，第1組為對照組，第2組為10 mg/kg藥物組，第3組為30 mg/kg藥物組，臀部肌肉注射，試驗(yàn)時(shí)用秒表記錄小鼠自放于熱金屬板上至出現(xiàn)疼痛反應(yīng)的時(shí)間，作為痛閾的指標(biāo)。結(jié)果表明，30 mg/kg體重的DEM對熱板法所致小鼠的疼痛反應(yīng)具有明顯的抑制作用，結(jié)果見表1。

表1 DEM對小鼠熱板法痛閾值的影響

注：a表示與生理鹽水組相比較差異極顯著；b表示與給藥前相比較差異極顯著(P<0.01)。

3.2 DEM注射劑對二甲苯致小鼠耳殼腫脹的影響

以二甲苯所致小鼠耳殼腫脹作用為模型，把40只小鼠隨機(jī)分為4組，肌肉注射不同劑量DEM注射液，對照組注射等量生理鹽水，末次給藥1 h后于小鼠左耳涂二甲苯，45 min后用打孔器打下2片耳片稱重，以左右耳重量差計(jì)算耳增重。試驗(yàn)結(jié)果(表2)表明，最小劑量在0.50 mg/kg時(shí)對二甲苯所致小鼠的耳殼腫脹有明顯的抑制作用(P<0.01)，作用與劑量呈正相關(guān)性。

表2 DEM注射劑對二甲苯致小鼠耳殼腫脹的影響

注：a表示與生理鹽水組相比差異極顯著；b表示與0.25 mg相比差異極顯著(P<0.01)。

4 討 論

牛心樸子又稱老瓜頭(CynanchumkomaroviiAL Iljinshi)，屬于蘿摩綱蘿摩科鵝絨藤屬(CynanchumL.)植物，為直立半灌木，高達(dá)50 cm，常生長在沙漠、河邊及荒山坡，垂直分布可達(dá)2 km左右。民間用于鎮(zhèn)痛、殺蟲, 藏醫(yī)用于退燒、止瀉，也用于治療膽囊炎。近年來研究發(fā)現(xiàn)牛心樸子在醫(yī)學(xué)上有抗癌、抗炎、抗菌、止咳、祛痰及平喘作用。張永康等[4]報(bào)道牛心樸子總堿對家兔的乳房炎有一定的治療作用；張珠明等[5]報(bào)道牛心樸子總堿對引起奶牛乳腺炎的常見致病菌在體外有一定的抑制作用，揭示出牛心樸子在治療奶牛乳房炎方面具有很大潛力。祁利明等[6]報(bào)道牛心樸子總生物堿對腹腔注射醋酸引起的小鼠扭體有明顯的鎮(zhèn)痛作用，而其揮發(fā)油的鎮(zhèn)痛作用不明顯；農(nóng)興旭等[7]報(bào)道其總生物堿36.5 mg/kg，給藥2 h后均可明顯抑制由角叉菜膠所致大鼠足腫脹作用；楊衛(wèi)東等[8]報(bào)道牛心樸子總堿對急慢性炎癥模型具有明顯的抑制作用，可以明顯降低大鼠足趾腫脹部位的炎癥組織內(nèi)PGE2的含量，提示牛心樸子總堿的抗炎作用與其抑制炎癥部位的PGE2合成和釋放有關(guān)。楊文莉等[9]報(bào)道牛心樸子生物總堿對大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎的繼發(fā)性炎癥有抑制作用。陳靖等[10]報(bào)道老瓜頭鎮(zhèn)痛、抗炎的活性部位在二氯甲烷層。本研究通過熱板法對DEM的鎮(zhèn)痛作用進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果表明DEM的濃度在30 mg/kg體重具有明顯的鎮(zhèn)痛作用。通過二甲苯致小鼠耳殼腫脹的試驗(yàn)，證明DEM劑量在0.50 mg時(shí)對二甲苯致小鼠的耳殼腫脹有明顯的抑制作用，進(jìn)一步揭示了牛心樸子生物堿中具體成分DEM的抗炎作用，關(guān)于抗炎的具體機(jī)理，還需更進(jìn)一步研究。