陳香紅

(鄭州市第一人民醫(yī)院，河南 鄭州 450004)

近年來，兒童急性白血病的發(fā)病率逐年升高，成為嚴(yán)重威脅兒童生命健康安全的一種惡性腫瘤，其治療非常棘手，大多數(shù)兒童因?yàn)閷χ委煼桨傅牟荒褪芏艞壷委熁蛞驀?yán)重的不良反應(yīng)而終止治療[1]。尋找兒童急性白血病的早期診斷及判斷預(yù)后的指標(biāo)是目前研究的難點(diǎn)和熱點(diǎn)[2]?；|(zhì)金屬蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9，MMP-9)屬于目前研究較多且與腫瘤關(guān)系密切的一種MMP，與惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展關(guān)系密切[3]。半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)是Caspase級聯(lián)反應(yīng)中重要的效應(yīng)酶，其高表達(dá)能夠促進(jìn)細(xì)胞的凋亡，惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程中Caspase-3表達(dá)的降低是其關(guān)鍵因素[4]。本研究采用免疫組化S-P法檢測兒童急性髓細(xì)胞性白血病骨髓細(xì)胞中MMP-9和Caspase-3蛋白的表達(dá)，并觀察兩者表達(dá)之間的關(guān)系以及兩者聯(lián)合檢測對兒童急性髓細(xì)胞性白血病的診斷及預(yù)后評估價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料入組鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院、鄭州市第一人民醫(yī)院2016年1月至2018年6月收治的經(jīng)病理證實(shí)的兒童急性髓細(xì)胞性白血病100例，其中男74例，女26例；年齡1.5～13.3歲，中位年齡6.9歲；所有患兒均為初診未治患兒。并選擇同期住院的非惡性血液病患兒50例作為對照，其中男31例，女19例；年齡1.8～13.0歲，中位年齡7.2歲；免疫性血小板減少性紫癜21例，缺鐵性貧血18例，原發(fā)性血小板減少11例。2組患兒的性別、年齡等基線資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。本研究已經(jīng)獲得醫(yī)院倫理委員會的審核通過，入組患兒家屬也均已簽署知情同意書。

1.2 主要試劑MMP-9、Caspase-3單克隆抗體購自美國SAB公司；S-P免疫組化試劑盒購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司。

1.3 免疫組化S-P法檢測兒童急性髓細(xì)胞性白血病骨髓細(xì)胞中MMP-9和Caspase-3蛋白的表達(dá)[5-6]采用免疫組化S-P法檢測100例兒童急性髓細(xì)胞性白血病和50例非惡性血液病患兒骨髓細(xì)胞中MMP-9和Caspase-3的表達(dá)。具體方法：1)首先提取骨髓單個核細(xì)胞，并用質(zhì)量分?jǐn)?shù)4%多聚甲醛固定；2)常規(guī)S-P免疫組化步驟檢測骨髓單個核細(xì)胞中MMP-9和Caspase-3蛋白的表達(dá)，以PBS代替一抗作為陰性對照。

1.4 免疫組化結(jié)果判讀[7-8]MMP-9和Caspase-3蛋白免疫組化結(jié)果均采用半定量法進(jìn)行判讀。每張切片均隨機(jī)選取5個高倍鏡(×400)視野，分別按照染色強(qiáng)度和陽性細(xì)胞比例進(jìn)行評分，然后兩者乘積作為結(jié)果，0～1分為(-)，2～3分為弱陽性(+)，4～5分為中等陽性(++)，6～7分為強(qiáng)陽性(+++)，其中陰性(-)、弱陽性(+)為陰性結(jié)果，中等陽性(++)、強(qiáng)陽性(+++)為陽性結(jié)果。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS 19.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，MMP-9和Caspase-3蛋白的陽性表達(dá)率等計(jì)數(shù)資料用百分?jǐn)?shù)表示，比較用χ2檢驗(yàn)，MMP-9和Caspase-3蛋白的相關(guān)性采用Spearman相關(guān)分析法分析，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 不同患兒骨髓細(xì)胞中MMP-9和Caspase-3蛋白表達(dá)的比較100例兒童急性髓細(xì)胞性白血病骨髓細(xì)胞中MMP-9和Caspase-3的陽性表達(dá)率分別為26.00%(26/100)和73.00%(73/100)，50例非惡性血液病患兒的陽性表達(dá)率分別為78.00%(39/50)和22.00%(11/50)，比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=36.706、35.187，P均<0.001)。

2.2 兒童急性髓細(xì)胞性白血病骨髓細(xì)胞中MMP-9和Caspase-3蛋白表達(dá)的相關(guān)性100例兒童急性髓細(xì)胞性白血病骨髓細(xì)胞中MMP-9和Caspase-3的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)關(guān)系(rs=-0.615，P<0.001)。見表1。

表1 兒童急性髓細(xì)胞性白血病骨髓細(xì)胞中MMP-9和Caspase-3蛋白表達(dá)的相關(guān)性 n

注：rs=-0.615，P<0.001

3 討論

兒童急性白血病的主要臨床表現(xiàn)均是骨髓內(nèi)異常的原始造血細(xì)胞異常增殖造成的。臨床上兒童急性白血病診治的難點(diǎn)是早期診斷和預(yù)后判斷，尋找早診早治手段、改善預(yù)后是當(dāng)前兒童急性白血病臨床研究的熱點(diǎn)問題。白血病細(xì)胞向周圍的擴(kuò)散及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移均需要穿過基底膜，而MMP家族是基底膜主要成分的降解酶類，因此，MMP家族成員的異常表達(dá)是基底膜完整性與否的關(guān)鍵因素[9]。Caspase級聯(lián)反應(yīng)在所有細(xì)胞的凋亡中發(fā)揮重要作用，其被抑制是惡性腫瘤細(xì)胞異常增殖的關(guān)鍵原因，而Caspase-3是這一過程中重要的效應(yīng)酶[10]。Sam等[11]發(fā)現(xiàn)，急性白血病患者體內(nèi)存在MMP-9的異常表達(dá)。Montiel-Cervantes等[12]發(fā)現(xiàn)，Caspase-3的低表達(dá)與急性白血病的發(fā)生、發(fā)展關(guān)系密切。

本研究結(jié)果顯示，100例兒童急性髓細(xì)胞性白血病骨髓細(xì)胞中MMP-9和Caspase-3的陽性表達(dá)率分別為26.00%(26/100)和73.00%(73/100)，50例非惡性血液病患兒的陽性表達(dá)率分別為78.00%(39/50)和22.00%(11/50)，比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=36.706、35.187，P均<0.001)。100例兒童急性髓細(xì)胞性白血病骨髓細(xì)胞中MMP-9和Caspase-3的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)關(guān)系(rs=-0.615，P<0.001)。

總之，MMP-9和Caspase-3蛋白在兒童急性髓細(xì)胞性白血病的骨髓細(xì)胞中存在異常表達(dá)，且兩者的檢測對于兒童急性髓細(xì)胞性白血病的診斷和預(yù)后判斷具有重要價值。