李文淼

大興區(qū)豬藍耳病免疫主要使用高致病性豬藍耳病活疫苗（JXA1-R株）和豬繁殖與呼吸綜合征滅活疫苗（NVDC-JXA1株）。本實驗選用未免疫過任何疫苗的斷奶仔豬60頭作為實驗對象。實驗豬分為3組，每組20頭;按免疫程序依次注射弱毒苗、滅活苗和生理鹽水。實驗豬免疫后每隔半個月采樣稱重一次，共三個月。樣品采用間接ELISA的方法診斷和定量檢測豬繁殖和呼吸綜合征抗體。通結(jié)果如下：與豬繁殖與呼吸綜合征滅活疫苗相比，高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗可產(chǎn)生較好的免疫抗體滴度，且免疫抗體維持時間較長。

一、材料與方法

1.1實驗材料

1.1.1實驗地點及實驗動物篩選

大興某種豬場3棟實驗豬舍。

選用豬場自繁自養(yǎng)的長白斷奶仔豬60頭，公豬17頭，母豬43頭。臨床檢查健康。均未免疫過豬藍耳病滅活疫苗，且豬藍耳病抗體檢測為陰性。

1.1.2實驗疫苗

兩種疫苗均由實驗豬場提供。

高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗（JXA1-R株），生產(chǎn)廠家：A廠家;規(guī)格：20頭份/瓶

豬繁殖與呼吸綜合征滅活疫苗（NVDC-JXA1株），生產(chǎn)廠家B廠家;規(guī)格：50ml/瓶

1.1.3實驗主要試劑

主要試劑為LSI豬繁殖和呼吸綜合征抗體檢測試劑盒。來源：北京天之泰生物科技有限公司;規(guī)格：96孔板*5;產(chǎn)地：法國

1.1.4 實驗用主要設(shè)備：

BioTek ELX800酶標儀（產(chǎn)地：美國）

BioTek EX50洗板機（產(chǎn)地：美國）

1.2實驗方法

1.2.1實驗分組

按照注射藍耳病疫苗的不同隨機分為3組，每組20頭;分別在相對隔離的環(huán)境飼養(yǎng)，直到實驗結(jié)束。

弱毒疫苗組：公豬5頭，母豬15頭。實驗豬注射高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗，免疫日期為8月7日（根據(jù)免疫程序免疫，斷奶前后首免，首免后4個月加強免疫一次，每次免疫注射疫苗一頭份）。

滅活疫苗組：公豬5頭，母豬15頭。實驗豬注射豬繁殖與呼吸綜合征滅活疫苗，首次免疫日期為8月7日，二次免疫日期為9月5日（根據(jù)免疫程序免疫，斷奶前后首免，首免后4周加強免疫一次，每次免疫注射疫苗2ml）。

對照組：公豬7頭，母豬13頭。實驗豬注射生理鹽水，每次免疫注射生理鹽水2ml，首次免疫日期為8月7日。

注：實驗豬根據(jù)豬場實際情況按程序注射除藍耳病疫苗以外的其他疫苗。

1.2.2采血稱重計劃

首次免疫后每隔半個月采血并稱重一次，每次采血60份，每份血液樣品5ml，共檢測9次，檢測時間為三個月。

1.2.3藍耳病抗體檢測

本實驗的實驗室檢測采用間接ELISA的方法檢測豬繁殖和呼吸綜合征抗體。

二、結(jié)果與分析

2.1免疫后臨床癥狀觀察

免疫后60天，有3頭實驗豬（弱毒疫苗組1頭，滅活疫苗組2頭）再采血后出現(xiàn)精神萎靡、食欲下降、生長減緩等情況，診斷為頻繁采血所致的應(yīng)激反應(yīng)。大部分實驗豬在注射疫苗后的90天內(nèi)，臨床觀察健康。

2.2對實驗豬增重的影響

免疫前分別計算每組20頭實驗豬的平均體重：弱毒疫苗組（30日齡）的平均體重為7.4Kg;滅活疫苗組（30日齡）的平均體重為7.7Kg;對照組（30日齡）的平均體重為7.5Kg。免疫后每半個月稱重一次，計算每組的平均體重和平均日增重.

2.3藍耳病抗體檢測結(jié)果

根據(jù)實驗采樣計劃，用ELISA試劑盒對實驗豬進行藍耳病抗體的監(jiān)測，記錄每次檢測結(jié)果，免疫后抗體檢測陽性數(shù)、陽性率、均值結(jié)果。

2.3.1抗體檢測陽性頭數(shù)比較結(jié)果

結(jié)果表明：弱毒疫苗組免疫后檢測抗體陽性個數(shù)隨時間變化逐漸升高，免疫后60天達到20頭，并持續(xù)到免疫后90天。滅活疫苗組免疫后45天檢測抗體陽性個數(shù)到達峰值11頭，隨后出現(xiàn)下降趨勢，到免疫后90天為8頭。對照組持續(xù)為0頭。

2.3.2抗體檢測陽性率比較結(jié)果.

結(jié)果表明：活疫苗首免后30天抗體陽性率≥70%，免疫后60天，抗體陽性率達到100%并持續(xù)到免疫后90天;而相同毒株的滅活疫苗首免后30天抗體陽性率僅為30%，二免后30天抗體陽性率僅為50%，整個實驗期，滅活疫苗免疫抗體陽性率≤55%，免疫效果遠低于活疫苗。

2.3.3抗體檢測陽性均值比較結(jié)果

結(jié)果表明：弱毒疫苗組免疫后抗體檢測均值隨時間變化逐漸升高，到免疫后90天達到2.289。滅活疫苗組抗體檢測均值最高出現(xiàn)在免疫后60天，達到0.532，到免疫后90天下降到0.491。

弱毒疫苗組與滅活疫苗組及對照組相比，免疫后各階段的檢測抗體陽性頭數(shù)、陽性率和抗體均值都高于滅活疫苗組及對照組，且差異極顯著。（p<0.01）

滅活疫苗組與對照組相比，免疫后各階段的檢測抗體陽性頭數(shù)、陽性率和抗體均值都高于對照組，且差異極顯著（p<0.01）。

三、討論

通過豬藍耳病滅活與弱毒疫苗免疫效力的比較實驗得出的結(jié)果可見，注射高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗的實驗組免疫后各階段的檢測抗體陽性頭數(shù)、陽性率和抗體均值都高于滅活疫苗組。

疫苗毒株經(jīng)充分致弱后，安全性和穩(wěn)定性方面都有所增強，在豬體內(nèi)連續(xù)6代毒力不返強，可安全使用。在整個實驗過程中持續(xù)對實驗豬進行臨床癥狀觀察，至實驗結(jié)束注射高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗、滅活疫苗和對照組實驗豬只未發(fā)生死亡，結(jié)果說明高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗、滅活疫苗都有很好的安全性。

綜上所述，一是高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗與滅活疫苗相比，活疫苗有較高的免疫抗體滴度。二是，高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗與滅活疫苗相比，活疫苗產(chǎn)生的保護抗體持續(xù)時間更長。

（作者單位：102600北京市大興區(qū)動物疾病控制中心）