徐榮 李?lèi)? 趙博雅 蘇鑫 李翔國(guó)

目前，生產(chǎn)上防治植物病害使用的殺菌劑大多數(shù)是化學(xué)農(nóng)藥?；瘜W(xué)殺菌劑的使用次數(shù)越來(lái)越多，土壤里的殘留物不斷增加，為減少污染和病蟲(chóng)害，植物源提取液防治病害得到快速發(fā)展。研究表明，丁香的乙醇提取液中主要成分是丁香酚，對(duì)多種細(xì)菌真菌的生長(zhǎng)具有抑制甚至致死作用，同時(shí)丁香提取液對(duì)人參灰霉病病原菌、龍眼的致腐真菌有抑制作用、對(duì)霉菌和酵母菌的抑菌效果顯著。曹鵬飛利用大蒜、銀杏、海金沙3種植物提取液對(duì)櫻桃番茄青枯病病原菌進(jìn)行了抑菌實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明，隨著3種提取物濃度的增加，抑菌效果逐漸增強(qiáng)，3種提取物的抑菌效果極顯著高于農(nóng)藥。莫熙禮等研究發(fā)現(xiàn)花椒提取物在低濃度條件下對(duì)桃褐腐病菌具有強(qiáng)烈的抑制作用，隨濃度升高抑制作用增強(qiáng)。以上學(xué)者的研究都可以說(shuō)明不少植物提取物可以抑制多種病菌的危害。

藜蘆乙醇提取物和各層萃取物對(duì)多種植物病原菌均有不同程度的抑菌作用。田慧霞等研究發(fā)現(xiàn)一定濃度的藜蘆活性物質(zhì)對(duì)細(xì)菌有毒殺作用，抑制細(xì)菌生長(zhǎng)。楊麗娟等發(fā)現(xiàn)藜蘆各部位的沸水提取液、乙醇提取液、丙酮提取液對(duì)水稻稻瘟病有不同程度的抑菌效果。劉佳實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)虎杖、黃連、藁本這三種中藥的提取物均有抑制真菌活性。李翔國(guó)等研究發(fā)現(xiàn)艾蒿正丁醇提取物、藜蘆生物堿提取物、延胡索氯仿提取物對(duì)玉米彎孢葉斑病菌的抑菌活性較高。

在探討白頭翁抗菌作用的有效部位及白頭翁湯的體外抑菌作用時(shí)，時(shí)維靜等研究發(fā)現(xiàn)白頭翁中的原白頭翁素抑菌效果最好，且白頭翁不同溶劑提取液對(duì)玉米小斑病菌菌絲生長(zhǎng)和孢子萌發(fā)均具有一定的抑制作用，對(duì)菌絲生長(zhǎng)的抑制效果好于對(duì)其孢子萌發(fā)的抑制效果。白頭翁和延胡索的不同溶劑提取物對(duì)供試植物的發(fā)芽、生長(zhǎng)以及對(duì)葉綠素合成有著不同的影響，對(duì)病原菌的抑制率與病原菌的種類(lèi)有關(guān)，對(duì)植物的發(fā)芽和生長(zhǎng)有明顯的抑制作用，而且白頭翁氯仿提取液的抑制活性高于白頭翁正丁醇提取液。

人參黑斑病是人參地上部最為普遍的一種病害之一，生產(chǎn)上防治人參黑斑病使用的殺菌劑主要有多菌靈、代森錳鋅等，農(nóng)藥品種顯得陳舊，而且用藥次數(shù)多，并出現(xiàn)農(nóng)藥殘留、環(huán)境污染等一系列社會(huì)問(wèn)題，不符合人參的GAP規(guī)范化栽培標(biāo)準(zhǔn)。本試驗(yàn)旨在研究藜蘆與白頭翁不同溶劑提取液對(duì)人參黑斑病菌的室內(nèi)抑菌活性，篩選出對(duì)人參黑斑病菌具有較強(qiáng)抑菌活性的提取液，為進(jìn)一步田間藥效試驗(yàn)奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1材料

試驗(yàn)材料：藜蘆與白頭翁分別采集于吉林省安圖縣。樣品經(jīng)清洗，陰干，粉碎備用。供試菌株：人參黑斑病菌（Alternaria panax Whetz），由延邊大學(xué)農(nóng)學(xué)院植物病理學(xué)教研室提供。供試藥劑：甲醇、丙酮、乙醇由天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)。

1.2 方法

1.2.1 提取液的制備

將采集的藜蘆與白頭翁陰干后用粉碎機(jī)制成粉末，各取50 g，分別用甲醇、乙醇、丙酮，用索氏提取器提取8 h，再濃縮到50 mL，即為各提取液的母液，提取液經(jīng)0.22 μm濾膜除菌，4 ℃冰箱貯存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 提取液抑菌活性的測(cè)定

采用生長(zhǎng)速率法測(cè)定提取液對(duì)人參黑斑病菌的抑菌作用，將每種提取液配成不同濃度后，在超凈工作臺(tái)中，將經(jīng)高溫高壓滅菌的馬鈴薯瓊脂葡萄糖培養(yǎng)基，加入不同濃度提取液制成平板，每處理設(shè)3次重復(fù)。用內(nèi)徑為7 mm的打孔器在菌落邊緣打菌餅，放入含提取液平板中央，以不加提取液的平板接菌餅作對(duì)照，于25 ℃恒溫箱中培養(yǎng)。連續(xù)六天測(cè)量菌落直徑，取第六天的數(shù)據(jù)計(jì)算不同殺菌劑對(duì)人參黑斑病菌菌絲生長(zhǎng)的抑制率。計(jì)算公式如下：

以處理濃度對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo)，不同濃度下的抑制生長(zhǎng)率轉(zhuǎn)換成機(jī)率值為縱坐標(biāo)繪制出毒力曲線，求出毒力直線回歸方程、相關(guān)系數(shù)、抑制中濃度（EC50）值。

2 結(jié)果與分析

2.1 藜蘆不同溶劑提取液對(duì)人參黑斑病菌的抑菌效果

藜蘆不同溶劑提取液對(duì)人參黑斑病菌菌絲生長(zhǎng)的抑制作用見(jiàn)圖1-3，提取液的抑菌活性均隨著濃度的增大而增強(qiáng)，且劑量與毒力呈正相關(guān)。其中藜蘆甲醇提取液回歸方程為y=1.6868x+2.4601，EC50=32.0442 μg·mL-1，相關(guān)系數(shù)r=0.9707;藜蘆丙酮提取液回歸方程為y=1.3663x+2.8674，EC50=36.3800μg·mL-1，相關(guān)系數(shù)r=0.8865;藜蘆乙醇提取液回歸方程為y=1.7618x+2.5928，EC50=23.2500μg·mL-1，相關(guān)系數(shù)r=0.9367。

2.2白頭翁不同溶劑提取液對(duì)人參黑斑病菌的抑菌效果

白頭翁不同溶劑提取液對(duì)人參黑斑病菌菌絲生長(zhǎng)的抑制作用見(jiàn)圖4-6，提取液的抑菌活性整體上隨著濃度的增大而增強(qiáng)，且劑量與毒力呈正相關(guān)，只有在乙醇提取液上呈先降后生的趨勢(shì)。其中白頭翁甲醇提取液回歸方程為y=1.9188x+2.4402，EC50=21.8050 μg·mL-1，相關(guān)系數(shù)r=0.9567;白頭翁丙酮提取液回歸方程為y=1.6652x+2.5688，EC50=28.8400μg·mL-1，相關(guān)系數(shù)r=0.9492;白頭翁乙醇提取液回歸方程為y=1.1908x+3.1510，EC50=35.7100μg·mL-1，相關(guān)系數(shù)r=0.9072。

綜上所述，根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果表明藜蘆與白頭翁的甲醇、乙醇、丙酮提取液對(duì)人參黑斑病菌均存在不同程度的抑菌效果，說(shuō)明藜蘆與白頭翁均是具有一定抑菌作用的植物。采用不同溶劑提取的抑菌效果比較，藜蘆的藥用成分提取最好使用乙醇，而白頭翁的藥用成分提取最好使用甲醇。

通過(guò)試驗(yàn)篩選出了對(duì)人參黑斑病菌具有較強(qiáng)抑菌活性的提取液，為進(jìn)一步田間藥效試驗(yàn)奠定了基礎(chǔ)。而提取液在田間對(duì)人參黑斑病的防治效果、作用機(jī)理以及對(duì)人參的生長(zhǎng)是否有影響，還有待于進(jìn)一步的研究。

（作者單位：133002吉林延吉延邊大學(xué)農(nóng)學(xué)院）