袁 媛，賈福懷，熊菲菲，雷 蕾，王彩霞，許璐云

（寧波御坊堂生物科技有限公司，浙江寧波 315012）

隨著工業(yè)的發(fā)展，現(xiàn)代人的生活環(huán)境發(fā)生了重大的變化，大氣、水體污染加重等因素導(dǎo)致人體免疫力下降，進(jìn)而導(dǎo)致多種疾病的發(fā)生[1]。通過選擇合適的食品，可以適當(dāng)提高免疫力。據(jù)報道，肽能夠通過刺激淋巴細(xì)胞增殖、增強巨噬細(xì)胞功能等來增強機體免疫力[2]。小麥低聚肽是以谷朊粉為原料，經(jīng)酶解制得的小分子肽類的混合物[3]，于2002年由中華人民共和國衛(wèi)生部批準(zhǔn)為新食品原料。研究表明，小麥低聚肽具有ACE抑制、嗎啡作用、抗氧化等多種生物活性[4]。目前，對小麥低聚肽類食品抗氧化活性研究較多，而關(guān)于此類食品的免疫功能研究較少，通過小鼠試驗研究小麥低聚肽固體飲料與免疫功能的關(guān)系，為小麥低聚肽類食品開發(fā)提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗動物

試驗動物為SPF級的體重18～22 g的雌性ICR小鼠，浙江省實驗動物中心提供，生產(chǎn)許可證號為SCXK（浙） 2014-0001，使用許可證號為 SYXK（浙） 2011-0166。飼養(yǎng)環(huán)境：室溫20～25℃，相對濕度40%～70%。

1.2 材料與試劑

小麥低聚肽固體飲料（由小麥低聚肽、菊粉、谷物粉等組成），自制；羧甲基纖維素鈉，阿拉丁試劑（上海） 有限公司提供；Hank"s液、ConA液，Sigma公司提供；RPMI1640培養(yǎng)液，Gibco公司提供；噻唑藍(lán)（MTT），Solarbio公司提供；綿羊紅細(xì)胞（SRBC）、雞血紅細(xì)胞，南京森貝伽生物科技有限公司提供；乳酸脫氫酶（LDH）測試盒，南京建成生物工程研究所提供。

1.3 儀器與設(shè)備

CP214型精密電子天平，美國OHAUS公司產(chǎn)品；759型紫外可見分光光度計；SZX7型解剖顯微鏡，日本OLYMPUS公司產(chǎn)品；VertA1型相機、AZ100型熒光顯微鏡，尼康公司產(chǎn)品。

1.4 試驗分組

試驗設(shè)3個劑量組和1個陰性對照組（質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%的羧甲基纖維素鈉）。低、中、高3個劑量分別為1.0，2.5， 5.0 g（kg·bw），相當(dāng)于人體推薦攝入量的2，5，10倍。分別取小麥低聚肽固體飲料10，50，100 g加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%的羧甲基纖維素鈉至200 mL，灌胃體積為10 g（kg·bw），對照組給予等體積的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%的羧甲基纖維素鈉，每天灌胃1次，連續(xù)30 d。

1.5 試驗方法[5]

1.5.1 臟器/體重比值

各組1次/d灌胃給予小麥低聚肽固體飲料，連續(xù)30 d，頸椎脫臼法處死小鼠，取胸腺、脾臟，稱質(zhì)量，計算胸腺/體重和脾臟/體重的比值。

1.5.2 細(xì)胞免疫功能測定

采用MTT法研究小麥低聚肽固體飲料對ConA誘導(dǎo)的小鼠淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化的影響，采用足跖增厚法研究其對綿羊紅細(xì)胞（SRBC）誘導(dǎo)小鼠遲發(fā)型超敏反應(yīng)（DTH） 的影響。

1.5.3 體液免疫功能測定

采用Jerne改良玻片法研究小麥低聚肽固體飲料對小鼠抗體生成細(xì)胞的影響，采用血凝法研究其對小鼠血清溶血素的影響。

1.5.4 單核-巨噬細(xì)胞功能測定

采用碳粒廓清法研究小麥低聚肽固體飲料對小鼠肝、脾吞噬細(xì)胞的影響，采用滴片法測定其對小鼠腹腔吞噬細(xì)胞的影響。

1.5.5 NK細(xì)胞活性測定

采用LDH測定法研究小麥低聚肽固體飲料對小鼠自然殺傷細(xì)胞（NK細(xì)胞）活性的影響。

1.6 數(shù)據(jù)處理與結(jié)果評定[5-6]

使用SPPS 19.0對試驗結(jié)果進(jìn)行分析，運用LSD法進(jìn)行單因素方差分析，p＜0.05為顯著差異，p＜0.01為極顯著差異。

增強免疫力功能判定：細(xì)胞免疫功能、體液免疫功能、單核-巨噬細(xì)胞功能測定單項中的2個試驗任意2個劑量組結(jié)果陽性，判定該項陽性；NK細(xì)胞活性測定試驗的1個以上劑量組結(jié)果為陽性，可判定該項陽性；以上4個方面評價任意2個方面陽性，可判定該產(chǎn)品具有一定的增強免疫力功能。

2 結(jié)果與分析

2.1 小麥低聚肽固體飲料對小鼠臟器/體重比值的影響

小麥低聚肽固體飲料對小鼠臟器/體重比值的影響見表1。

原始數(shù)據(jù)符合方差齊性要求（p＞0.05）。與陰性對照組比較，3個計量組小鼠胸腺/體重比值與脾臟/體重比值的差異均無顯著性差異。

表1 小麥低聚肽固體飲料對小鼠臟器/體重比值的影響

2.2 小麥低聚肽固體飲料對小鼠體重的影響

小麥低聚肽固體飲料對小鼠體重的影響見表2；小麥低聚肽固體飲料對小鼠體重的影響見表3；小麥低聚肽固體飲料對小鼠體重的影響見表4；小麥低聚肽固體飲料對小鼠體重的影響見表5。

表2 小麥低聚肽固體飲料對小鼠體重的影響

表3 小麥低聚肽固體飲料對小鼠體重的影響

表4 小麥低聚肽固體飲料對小鼠體重的影響

表5 小麥低聚肽固體飲料對小鼠體重的影響

與陰性對照組比較，3劑量組小鼠體重在試驗的初期、中期及終期，均無顯著性差異。

2.3 小麥低聚肽固體飲料對小鼠細(xì)胞免疫功能的影響

小麥低聚肽固體飲料對ConA誘導(dǎo)的小鼠淋巴細(xì)胞增殖能力的影響見表6，小麥低聚肽固體飲料對綿羊紅細(xì)胞（SRBC）誘導(dǎo)小鼠DTH的影響見表7。

用光密度值代表小鼠淋巴細(xì)胞的增殖能力，與陰性對照組比較，低、中、高劑量組ConA誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖能力試驗光密度值均有增加，且中、高劑量組具有顯著性差異。SRBC可刺激T淋巴細(xì)胞增殖成致敏淋巴細(xì)胞，免疫4 d后，再以SRBC攻擊時，攻擊部位會出現(xiàn)遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)。通過表7可以看出，各劑量組小鼠后足跖部24 h和0 h厚度差值均有一定程度的增加，與陰性對照組比較，無顯著差異（p＞0.05）。以上結(jié)果表明，小麥低聚肽細(xì)胞免疫功能測定為陽性。

表6 小麥低聚肽固體飲料對ConA誘導(dǎo)的小鼠淋巴細(xì)胞增殖能力的影響

表7 小麥低聚肽固體飲料對綿羊紅細(xì)胞（SRBC）誘導(dǎo)小鼠DTH的影響

2.4 小麥低聚肽固體飲料小鼠體液免疫功能的影響

小麥低聚肽固體飲料對小鼠抗體生成細(xì)胞的影響見表8，小麥低聚肽固體飲料對小鼠血清溶血素的影響見表9。

表8 小麥低聚肽固體飲料對小鼠抗體生成細(xì)胞的影響

表9 小麥低聚肽固體飲料對小鼠血清溶血素的影響

通過表8可以發(fā)現(xiàn)，與陰性對照組比較，低、中、高劑量組的溶血空斑數(shù)均有增多，低、中劑量組無顯著性差異，高劑量組具有極顯著性差異（p＜0.01）。由表9可知，原始數(shù)據(jù)符合方差齊性要求（p＞0.05）。與陰性對照組比較，中、高劑量組小鼠血清溶血素抗體積數(shù)值升高，具有顯著性差異（p＜0.01）。以上結(jié)果表明，小麥低聚肽固體飲料體液免疫功能結(jié)果為陽性。

2.5 小麥低聚肽固體飲料對小鼠單核-巨噬細(xì)胞功能的影響

小麥低聚肽固體飲料對小鼠碳廓清試驗吞噬指數(shù)的影響見表10，小麥低聚肽固體飲料對小鼠巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞的影響見表11。

表10 小麥低聚肽固體飲料對小鼠碳廓清試驗吞噬指數(shù)的影響

表11 小麥低聚肽固體飲料對小鼠巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞的影響

由表10可知，與陰性對照組比較，無顯著性差異。由表11可知，吞噬百分率通過X=Sin-1P1/2進(jìn)行數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換，與陰性對照組比較，低、中、高劑量組小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞的吞噬率高于陰性對照組，僅高劑量組的吞噬率和吞噬指數(shù)高于陰性對照組，與陰性對照組比較，具有顯著性差異。以上結(jié)果表明，小麥低聚肽固體飲料對小鼠單核-巨噬細(xì)胞功能測定結(jié)果為陰性。

2.6 小麥低聚肽固體飲料對小鼠NK細(xì)胞活性的影響

小麥低聚肽固體飲料對小鼠NK細(xì)胞活性的影響見表12。

表12 小麥低聚肽固體飲料對小鼠NK細(xì)胞活性的影響

由表12可知，NK細(xì)胞活性通過X=Sin-1P1/2進(jìn)行數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換，與陰性對照組比較，3個劑量組小鼠NK細(xì)胞活性明顯升高，具有極顯著性差異，說明NK細(xì)胞活性試驗結(jié)果陽性。

3 結(jié)論

試驗設(shè)置低、中、高3個劑量組，分別相當(dāng)于人體推薦攝入量的2，5，10倍，同時設(shè)陰性對照組（質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%的羧甲基纖維素鈉），連續(xù)1個月經(jīng)口給予小鼠不同劑量的小麥低聚肽固體飲料，各試驗組小鼠的初期體重、中期體重、終期體重、臟器/體重比值與陰性對照組相比均無顯著性差異。通過試驗證實，小麥低聚肽固體飲料細(xì)胞免疫功能、體液免疫功能、NK細(xì)胞活性試驗結(jié)果為陽性，小鼠單核-巨噬細(xì)胞功能試驗結(jié)果為陰性，說明小麥低聚肽固體飲料對小鼠無不良影響，且具有一定增強免疫力功能。

機體通過激活巨噬細(xì)胞、促進(jìn)T細(xì)胞轉(zhuǎn)化、提高B淋巴細(xì)胞和NK細(xì)胞的活性來完成免疫反應(yīng)[7]。Alberto M等人[8]研究發(fā)現(xiàn)，巨噬細(xì)胞通過分泌促炎性細(xì)胞因子和趨化因子來參加免疫應(yīng)答，發(fā)揮免疫作用，還可通過抑制細(xì)胞因子IL-10/TGF-B等下調(diào)免疫應(yīng)答，從而進(jìn)行免疫調(diào)節(jié)。試驗中各劑量組的小麥低聚肽固體飲料對小鼠碳廓清試驗吞噬指數(shù)與陰性對照組比無顯著差異。在對小鼠腹腔巨噬細(xì)胞雞紅細(xì)胞影響的試驗中，低、中劑量組的吞噬率和吞噬指數(shù)與陰性對照組相比無顯著差異，高劑量組極顯著高于陰性對照組，說明一定劑量的小麥低聚肽固體飲料才能激活巨噬細(xì)胞。在機體中，參與免疫應(yīng)答的主要免疫效應(yīng)細(xì)胞為T，B淋巴細(xì)胞，這些細(xì)胞的體外增殖轉(zhuǎn)化能力可以反映細(xì)胞免疫功能，而脾臟中有一定數(shù)量的T，B淋巴細(xì)胞定居[9]。自然殺傷細(xì)胞（NK細(xì)胞） 獨立于T，B淋巴細(xì)胞，屬于固有的免疫細(xì)胞，是機體防御的第一道防線[10]。經(jīng)研究證實NK細(xì)胞對半抗原具有記憶功能，當(dāng)機體再次出現(xiàn)抗原刺激時，免疫應(yīng)答會針對預(yù)先致敏宿主發(fā)生[11-12]。研究中，小麥低聚肽固體飲料對ConA誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖能力增加、提高NK細(xì)胞活性、小麥低聚肽類產(chǎn)品的開發(fā)提供依據(jù)。