朱 舟，伍朝君 ，陳 玲

（1.重慶市中醫(yī)院，重慶 400021； 2.四川省樂山職業(yè)技術(shù)學院，四川 樂山 614000）

馬錢子為馬錢科植物馬錢 Strychnos nuxvomica L.的干燥成熟種子，是有毒中藥，臨床一般用其炮制品[1-2]。我院的醫(yī)院制劑黃馬酒治療癌痛起效快，效果明顯。馬錢子為方中主藥，入藥時用砂燙品，為降低馬錢子的毒性而不降低療效，采用膨化法炮制馬錢子。與砂燙法相比，膨化法操作簡便，只需掌握壓力和時間即可，既縮短了加工周期，又避免了砂燙法煙熏、灰塵及揮發(fā)氣體對操作人員身體的影響。本研究中采用膨化法炮制馬錢子，并優(yōu)化炮制工藝。現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

儀器：1100型高效液相色譜儀（美國Agilent公司）；AE100型電子分析天平（瑞士 Mettler Toledo公司）；膨化設(shè)備為自行設(shè)計委托加工的鐵質(zhì)容器，容積3.0 L，包括進料斗、膨化器、壓力調(diào)節(jié)計、溫度計、接收器等。

試藥：馬錢子(重慶市藥材公司，批號為20160321），經(jīng)重慶市中醫(yī)院藥劑科中藥庫房主管藥師樊小明鑒定為正品；藥品馬錢子砂燙炮制品，由以上生馬錢子按2015年版《中國藥典（一部）》要求，由重慶市中醫(yī)院實驗室自行炮制（批號為20160620）；士的寧氮氧化物對照品（純度為97.2%，批號為652154-10-4）、馬錢子堿氮氧化物對照品（純度為 96.3% ，批號為 1421-86-9），均購自德國KarlsruheFRG公司；乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純，水為重蒸水（我院藥劑科自制）。

2 方法與結(jié)果

2.1 含量測定

2.1.1 色譜條件

色譜柱：LichrospherC18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：乙腈（A） -0.2% 乙酸溶液 -0.2% 三乙胺（B），梯度洗脫(0 min、8%A，15 min、92%A，30 min、79%A，60 min、40%A)；流速：1 mL ／min；檢測波長：254 nm；柱溫：30 ℃；進樣量：10 μL。在此色譜條件下，待測成分之間皆可達到基線分離。色譜圖見圖1。

2.1.2 溶液制備

稱取馬錢子堿氮氧化物對照品、士的寧氮氧化物對照品各適量，精密稱定，用甲醇溶解并定容，得質(zhì)量濃度分別為 107.233 1，110.452 3 μg ／mL 的混合對照品溶液，備用。稱取馬錢子膨化藥材粉末1 g，精密稱定，置150 mL圓底燒瓶中，加 50 mL 氫氧化鈉 -甲醇（3∶20，V／V），水浴保持微沸2 h，濾過，置50 mL容量瓶中，用溶劑定容，即得供試品溶液。

2.1.3 方法學考察

圖1 高效液相色譜圖

線性關(guān)系考察：分別吸取對照品溶液 2，4，6，8，10，12 μL，進樣，按擬訂色譜條件測定，以進樣量（μg，C）對峰面積（A）進行線性回歸。結(jié)果士的寧氮氧化物絕對進樣量在0.12～0.73 μg范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好，回歸方程為 A1＝2 352.542 3 C1-11.993 3，r＝0.999 5（n＝6）；馬錢子堿氮氧化物絕對進樣量在 0.15～0.67 μg范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好，回歸方程為 A2＝2 243.156 7 C2-8.925 3，r＝0.999 7（n ＝6）。

精密度試驗：精密吸取對照品溶液10 μL，連續(xù)進樣6次，依法測定。結(jié)果峰面積的 RSD士的寧氮氧化物為 0.52% （n＝6），馬錢子堿氮氧化物為 0.66%（n＝6），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗：室溫下取供試品溶液，分別于0，2，4，6，8 h時各進樣10 μL，依法測定。結(jié)果士的寧氮氧化物、馬錢子堿氮氧化物峰面積的 RSD分別為0.74%，0.80%（n＝5），表明室溫下供試品溶液放置8 h內(nèi)穩(wěn)定。

重復性試驗：取同一批膨化藥材樣品，依法制備6份供試品溶液，分別進樣10 μL，依法測定。結(jié)果士的寧氮氧化物及馬錢子堿氮氧化物峰面積的 RSD分別為2.50%和 2.70% （n＝ 6），表明方法重復性良好。

加樣回收試驗：稱取藥材粉末0.5 g，精密稱定，共9份，加入一定量的混合對照品溶液，依法制備供試品溶液，進樣測定。結(jié)果士的寧氮氧化物的平均回收率為98.23% ，RSD 為 1.35% （n＝9）；馬錢子堿氮氧化物的平均回收率為 97.22%，RSD 為 1.12%（n＝9）。

2.1.4 樣品含量測定

取馬錢子膨化品適量，依法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件進樣，測定含量。

2.2 單因素考察

根據(jù)預試驗結(jié)果，以加熱后的壓強和保溫時間為考察因素[3]初步篩選。結(jié)果保溫時間設(shè)為2 h，則壓強為0.5，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0，3.5 kg ／cm2時，士的寧氮氧化物及馬錢子堿氮氧化物含量和分別為0.0021，0.0038，0.005 0，0.006 3，0.005 0，0.004 2，0.003 5 mg ／g；膨化壓強設(shè)為 1.5 kg／cm2，則保溫時間為 2，4，6，8h 時，2 種氮氧化物含量和分別為 0.0050，0.0062，0.0052，0.0042mg／g。

2.3 正交試驗

因素與水平：根據(jù)2.2項下試驗結(jié)果，以壓強為因素A、保溫時間為因素B設(shè)計試驗因素水平表（表1），并根據(jù)因素水平條件選用 L9（34）正交試驗表安排試驗，平行操作2次。將馬錢子裝入膨化機內(nèi)，以適當火力加熱，以40 r／min的速率勻速轉(zhuǎn)動膨化器，待升溫至所需壓力，保溫一定時間后，將馬錢子膨化（瞬間釋壓至常壓）置接收器內(nèi)冷卻，粉碎，過40目篩，備用。

表1 因素水平表

正交試驗結(jié)果與分析：按上述 L9（34）正交試驗表進行試驗，結(jié)果見表2和表3?？梢?，保溫時間的影響程度大于壓強；方差分析結(jié)果表明，保溫時間對二者的含量有非常顯著的影響，而壓力對其也有顯著影響。極差分析與方差分析結(jié)果相一致。綜合分析，最佳膨化條件為A2B2，即膨化壓強為 2.0 kg ／cm2，膨化保溫時間為 4 min。

表2 L9(34)正交試驗結(jié)果(n＝9)

表3 方差分析結(jié)果

2.4 最佳工藝驗證

取生馬錢子3份，按上述最佳工藝膨化炮制，冷卻，粉碎，過40目篩。各取1 g膨化粉末制成供試品溶液，依法分別測定士的寧氮氧化物及馬錢子堿氮氧化物含量，并與生品及砂炒品進行比較[4]，馬錢子砂炒品按2015年版《中國藥典（一部）》方法砂炒，取凈馬錢子，砂炒至鼓起，去毛。結(jié)果見表4?？梢?，士的寧氮氧化物及馬錢子堿氮氧化物的含量均處于較高水平，且較之生品及砂炒品均有較大增加，說明該工藝穩(wěn)定可行。

表4 馬錢子炮制后士的寧氮氧化物及馬錢子堿氮氧化物含量比較（mg）

3 討論

中藥提取工藝的相對落后，已嚴重影響了中藥質(zhì)量及臨床療效。中藥材膨化技術(shù)的原理是將中藥材置膨化機中，隨著溫度、壓強的升高，中藥材內(nèi)部的水分子呈過熱狀態(tài)，當達到一定高壓后瞬間變成常壓，中藥材內(nèi)部過熱狀態(tài)的水分子同時汽化而發(fā)生爆炸，巨大的膨化壓力改變了中藥材的外部形態(tài)和內(nèi)部結(jié)構(gòu)，使其膨脹疏松，形成海綿狀空心網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，使淀粉粒糊化，細胞壁破裂，細胞群散離，草酸鈣結(jié)晶破碎為小方晶和砂晶，導管斷裂變短[5]。馬錢子膨化后質(zhì)地松脆，硬度顯著降低，利于有效成分的浸出，經(jīng)試驗驗證，膨化法比傳統(tǒng)砂炒法更有利于士的寧氮氧化物和馬錢子堿氮氧化物的轉(zhuǎn)化。由藥效學試驗結(jié)果可知，膨化馬錢子加水煮沸的濃縮液與傳統(tǒng)炮制品2次水煎液鎮(zhèn)痛作用相同[6-7]?？梢姡蚧夹g(shù)可顯著提高煎出效能和浸提速率。

根據(jù)氣體熱力學的查理定律可知，在質(zhì)量和體積一定時，壓強與溫度呈正相關(guān)，當在某一壓力時氣體的溫度會維持在相應水平不變。本試驗中膨化機機艙密閉，氣體質(zhì)量和體積不能改變，故機艙內(nèi)溫度由壓強決定，故設(shè)計正交試驗時為簡便實用起見，僅考慮易控制的壓力與時間。2015年版《中國藥典（一部）》規(guī)定，馬錢子采用砂炒法炮制，因藥材經(jīng)高溫處理后質(zhì)地疏松，利于煎出有效成分，且有減毒作用[8]。但砂炒不易把握火候[9-10]，往往因為以砂為媒介導致受熱不均，出現(xiàn)一部分藥材已發(fā)生炭化，而另一部分藥材卻炮制不徹底的現(xiàn)象。膨化炮制法與砂炒法相比較，操作更簡便，只需掌握壓力和時間即可，既縮短了加工周期，又避免了砂炒法煙熏、灰塵及揮發(fā)氣體對操作人員身體的影響。該工藝不僅降低了馬錢子的毒性，而且提高了有效成分的浸提效率，更有利于調(diào)劑制劑。