閆 麗，王曉婷，高 慧

（遼寧中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，遼寧 大連 116600）

知母為百合科植物知母 Anemarrhena asphodeloides Bge.的干燥根莖，有清熱瀉火、滋陰潤燥功效，可用于治療外感熱病、高熱煩渴、肺熱燥咳、骨蒸潮熱、內(nèi)熱消渴、腸燥便秘等癥[1]。鹽知母是知母歷代的主流炮制品種，前期研究發(fā)現(xiàn)，知母鹽炙后降血糖作用顯著增強，且其醇提物作用優(yōu)于水煎液[2-3]。目前公認(rèn)的2型糖尿病血脂異常是由于血液中游離脂肪酸增多引起三酰甘油（TG）、低密度脂蛋白（LDL）增加，高密度脂蛋白（HDL）減少，導(dǎo)致糖尿病發(fā)病增多[4]。本試驗中以糖尿病模型大鼠的血糖血脂因子活性為指標(biāo)進行研究，觀察不同體積分?jǐn)?shù)鹽知母醇提物對其的影響，優(yōu)選鹽知母醇提物降血糖的最佳體積分?jǐn)?shù)?，F(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 儀器、試藥與動物

儀器：Multiskan MK3型酶標(biāo)儀（美國賽默飛世爾科技有限公司）；TGL-16C型臺式離心機（上海安亭科學(xué)儀器廠）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠）；搖擺式高速萬能粉碎機（溫嶺市吉大機械有限公司）；Milli-Q Integral一體機純水儀（大連烽木源科技有限公司）；血糖儀（上海健臻醫(yī)療科技有限責(zé)任公司）；FSH-2型可調(diào)高速電動勻漿機（江蘇金壇市佳美儀器有限公司）；H1650-W型臺式離心機（長沙湘儀離心機儀器有限公司）；SHA-C型臺式恒溫振蕩器（常州國華電器有限公司）；pH酸度計（上海鵬順科學(xué)儀器有限公司）。

試藥：知母（四川新荷花中藥飲片股份有限公司，批號為 1702083）；胰島素（INS）試劑盒（批號為PE30620）、TG試劑盒（批號為 BPE30046）、HDL試劑盒（批號為BPE30048）、LDL 試劑盒（批號為 BPE30047）、總膽固醇（TC）試 劑 盒 （批 號 為 BPE30045）、糖 化 血 紅 蛋 白（HbA1C）試劑盒（批號為 BPE30395），均由上海朗頓生物科技有限公司提供；鏈脲佐菌素（STZ，北京博愛港商貿(mào)中心）；其余試劑均為分析純，水為純化水。

動物：SPF級SD大鼠60只，雄性，體質(zhì)量180～220g，由遼寧長生生物技術(shù)有限公司提供，實驗動物許可證號為SCXK（遼）2015-0001。于室溫25℃、相對濕度50%的環(huán)境下適應(yīng)性飼養(yǎng)7 d。

1.2 方法

1.2.1 樣品溶液制備

STZ 緩沖液：取檸檬酸 2.1 g，檸檬酸鈉 2.94 g，分別溶于 100 mL 水中，測得 pH 介于 4.2～4.5，經(jīng) 0.22微孔濾膜濾過，加入STZ適量，避光，充分混勻，備用。

脂肪乳：取20 g豬油，加熱至熔化，加入5 g膽固醇，待膽固醇全熔后加入吐溫-80、甘油各10 mL，加水至100 mL，加入蔗糖和果糖各5 g[5]。

鹽知母醇提液：按前期工藝炮制鹽知母[6]。稱適量鹽知母，分別以65%，75%，85%，95%乙醇回流提取3次，每次1 h，濾過，合并濾液，濃縮得醇浸膏。用水混懸浸膏，分別制備成質(zhì)量濃度為0.25 g／mL的溶液。

1.2.2 建模與給藥

隨機取10只SD大鼠作為空白組，其余大鼠用高脂飼料和脂肪乳交替喂養(yǎng)。當(dāng)大鼠體質(zhì)量在300 g以上時，禁食 12 h，腹腔注射 STZ 緩沖液（40 mg／kg），72 h后測空腹血糖（FBG）≥11.7 mmol為建模成功。將建模成功的50只大鼠，隨機均分為65%乙醇組、75%乙醇組、85%乙醇組、95%乙醇組（分別予相應(yīng)體積分?jǐn)?shù)乙醇提取物）及模型組，各組大鼠均連續(xù)灌胃給藥(2.5 g／kg)2周，每天1次。試驗期間，空白組與模型組大鼠根據(jù)體質(zhì)量給予等體積的0.9%氯化鈉溶液。定期測量大鼠體質(zhì)量，以調(diào)整給藥劑量。

1.2.3 指標(biāo)檢測

末次給藥后，行腹主動脈取血，靜置 30 min，3 800 r／min離心15 min，取上清液，嚴(yán)格按試劑盒說明檢測大鼠血清空腹胰島素(FINS)，TG，TC，HbA1C含量。

取部分肝組織，稱定質(zhì)量后放入10 mL EP管中，按質(zhì)量（g）∶體積（mL）為 1∶9的比例，用移液槍吸取磷酸鹽緩沖液（PBS，pH 介于 7.2 ～ 7.4），加入 EP 管中并用高速勻漿機勻漿，勻漿后將其放入高速離心機中，3 800 r／min離心20 min，取上清液檢測大鼠肝組織HDL和LDL。并按公式計算胰島素敏感指數(shù)(ISI)[7]、胰島 素 抵 抗 指 數(shù) （HOMA-IR）[8]。ISI＝ln[1／（FBG ×FINS）]；HOMA-IR ＝ FBG × FINS ／22.5。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理

采用SPSS 17.0統(tǒng)計學(xué)軟件分析，計量資料以 X±s表示，行 t檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

結(jié)果見表1和表2。與模型組比較，各給藥組大鼠給藥7，14 d后FBG均明顯降低，其中75%乙醇組FBG降低作用最顯著；各給藥組大鼠血糖、血脂水平均不同程度改善，其中75%乙醇組降血糖、調(diào)血脂效果最顯著。

3 討論

糖尿病屬中醫(yī)“消渴”范疇，與素體肥胖、飲食失節(jié)、過食肥甘厚味等密切相關(guān)[9]，從而導(dǎo)致陰津虧耗、燥熱偏盛、痰濁濕熱、肝失疏泄等現(xiàn)象[10]。本研究中通過高脂飼料及脂肪乳灌胃輪流喂養(yǎng)，從而使大鼠飲食過度，進而導(dǎo)致肥胖，然后腹腔注射STZ的方法建立2型糖尿病模型。建模后大鼠出現(xiàn)尿多、尿液黏膩、飲水量增加、精神萎靡、活動松散、體質(zhì)量減輕等現(xiàn)象；給藥后大鼠飲水量及尿量減少，體質(zhì)量有所控制，精神有所好轉(zhuǎn)。

表1 不同體積分?jǐn)?shù)鹽知母醇提物對糖尿病模型大鼠FBG 的影響（X ± s，mmol／L，n ＝10）

現(xiàn)代研究認(rèn)為，脂肪組織的胰島素抵抗可降低胰島素介導(dǎo)的抗脂解效應(yīng)和葡萄糖攝取，由于糖尿病患者游離脂肪酸增多，干擾了胰島素在周圍組織中與受體結(jié)合，使胰島素作用下降，造成不同程度的胰島素抵抗[11]。TG的水解需要脂蛋白脂肪酶（LPL），LPL的合成、分泌和活性均依賴胰島素的作用，而2型糖尿病患者因其出現(xiàn)胰島素抵抗，故其TG水平升高[12]。因此，本試驗中研究了鹽知母不同體積分?jǐn)?shù)醇提物對糖尿病大鼠血糖、血脂作用的影響，選取了 LDL，TG，HDL等考察指標(biāo)，結(jié)果表明，75%鹽知母醇提物可顯著降低TG水平，肝臟可正常合成LDL，使LDL進入正常的代謝途徑，從而減少糖尿病的產(chǎn)生。HDL及其主要成分載脂蛋白A-I對血管內(nèi)皮具有多重保護功能，也可阻止一系列病變的產(chǎn)生，從而改善脂肪代謝的紊亂狀態(tài)。

研究發(fā)現(xiàn)，不同體積分?jǐn)?shù)醇提物對糖尿病模型大鼠的血糖、血脂均有不同程度的改善作用，且75%醇提物降糖效果較顯著。本研究中，經(jīng)炮制后的鹽知母治療糖尿病效果好，這為鹽知母醇提物降血糖活性部位的選擇提供了藥理學(xué)依據(jù)，且對鹽知母降血糖的臨床開發(fā)、應(yīng)用提供了進一步研究的基礎(chǔ)。