賈青龍/康地飼料中國(guó)集團(tuán)

豬流行性腹瀉是由豬流行性腹瀉病毒引起的消化道疾病，具有急性、接觸性、高度傳染性；以哺乳仔豬、斷奶仔豬和育肥豬發(fā)病率最高，主要癥狀為嘔吐、水樣腹瀉和脫水，其中，以哺乳仔豬受害最為嚴(yán)重。豬流行性腹瀉（PED）與豬傳染性胃腸炎（TGE）、豬輪狀病毒病是目前危害我國(guó)豬群最嚴(yán)重的三種病毒性腹瀉病，臨床癥狀都是以腹瀉為主，很難區(qū)分。本研究以河南某暴發(fā)仔豬腹瀉的豬場(chǎng)為例，分析豬流行性腹瀉病毒（PEDV）毒株特性，對(duì)其與近些年的流行毒株進(jìn)行了比對(duì)，旨在為豬流行性腹瀉的防控及免疫機(jī)理的研究提供理論依據(jù)。

一、發(fā)病情況

2018年1月份，河南某豬場(chǎng)初生仔豬2日齡開始出現(xiàn)嘔吐、水樣腹瀉，發(fā)病仔豬食欲下降，精神狀態(tài)差，腹瀉24 h之后脫水，出現(xiàn)死亡?；疾∽胸i嚴(yán)重行走不便，采食量較低，病程持續(xù)時(shí)間7日齡，耐受的或經(jīng)過治療存活的仔豬后續(xù)發(fā)育受阻。母豬、保育、育肥等階段未見任何癥狀。

二、臨床表現(xiàn)

病畜體表被毛粗亂發(fā)暗、有結(jié)痂物，腹下和鼻鏡出現(xiàn)紫紺，個(gè)別發(fā)病仔豬有體溫上升現(xiàn)象，體溫39.5～40.2℃。尾部及后部被糞便污染，排出糞便呈水樣（圖1）。豬群怕冷，擠堆，發(fā)病仔豬死亡率達(dá)85%。病情嚴(yán)重的仔豬，精神沉郁，臥地不起，糞便自行流出，初步確診為腹瀉。同批次母豬所產(chǎn)仔豬發(fā)病率達(dá)35%。

三、臨床診斷

剖檢病豬，可見胃黏膜潮紅、水腫，小腸腸壁變薄、透明，腸內(nèi)充滿氣體和黃色水樣物，腸黏膜脫落，據(jù)此判斷疑似豬流行性腹瀉。

圖1 病豬體表及水樣糞便

四、實(shí)驗(yàn)室檢查

1.RT-PCR檢測(cè)。收集病死豬腸內(nèi)容物和腸系膜淋巴結(jié)等具有代表性的組織病料3份，送武漢某疾病診療中心實(shí)驗(yàn)室，采用RT-PCR方法分別檢測(cè)豬傳染性胃腸炎病毒（TGEV）、豬流行性腹瀉病毒（PEDV）和豬德爾塔冠狀病毒（PDCOV），結(jié)果如圖2。

圖2 豬流行性腹瀉病毒（PEDV）PCR檢測(cè)結(jié)果

圖2從陽(yáng)性模板中擴(kuò)增出283 bp的片段，如果樣品中有豬流行性腹瀉病毒存在，能夠擴(kuò)增出283 bp大小的條帶。圖3從陽(yáng)性模板中擴(kuò)增出415 bp的片段，如果樣品中有豬傳染性胃腸炎病毒存在，能夠擴(kuò)增出415 bp大小的條帶。圖4從陽(yáng)性模板中擴(kuò)增出266 bp的片段，如果樣品中有豬傳染性胃腸炎病毒存在，能夠擴(kuò)增出266 bp大小的條帶。通過檢測(cè)擴(kuò)增片段，檢測(cè)到送檢樣本中存在PEDV，沒有檢測(cè)到TEGV和PDCOV。

圖3 豬傳染性胃腸炎（TEGV）PCR檢測(cè)結(jié)果

圖4 豬德爾塔冠狀病毒（PDCOV）PCR檢測(cè)結(jié)果

2.基因序列分析。通過RT-PCR擴(kuò)增PEDV S1基因片段，與該毒株的全基因組序列GenBank登錄號(hào)KF761675.1的PEDV基因序列97%的相似度，證明擴(kuò)增的片段是PEDV病毒，如圖5。

3.同源性分析。同源性分析顯示，送檢毒株的基因組序列與我國(guó)AJ1102的同源關(guān)系最近，相似性為97.5%， 而 AJ1102、CH-HNZZ47-2016、CH-LNC-2012S、PEDV4-S-3這幾支毒株是國(guó)內(nèi)最新的流行毒株，送檢毒株與他們相似性較高。送檢毒株與韓國(guó)毒株South Korea-2008、美國(guó)毒株USA2014的序列相似性均為96.8%，而與CV777疫苗毒株的相似性較低，為87%（表 1）。

圖5 所送樣品PEDV基因測(cè)序結(jié)果

表1 PEDV毒株和常見毒株的同源性比對(duì)結(jié)果

4.PEDV S1基因進(jìn)化樹。進(jìn)化樹分析顯示PEDV S1基因?qū)儆谧儺惗局辏℅2群）。

圖6 PEDV S1基因進(jìn)化樹

五、結(jié)論與討論

通過對(duì)送檢樣本病例豬體的腸樣本病毒的分離鑒定，確認(rèn)送檢群體中存在豬流行性腹瀉病毒，序列進(jìn)化樹分析表明該毒株和我國(guó)新近毒株、韓國(guó)及美國(guó)的變異毒株進(jìn)化關(guān)系較近，而與我國(guó)之前流行的PEDV毒株以及疫苗毒株CV777處于不同分支，揭示中國(guó)流行的PEDV已經(jīng)發(fā)生了變異。PEDV毒株呈現(xiàn)快速變異和進(jìn)化趨勢(shì)，現(xiàn)有的基于經(jīng)典毒株CV777所產(chǎn)生的活疫苗和滅活苗不能有效的防控流行的PEDV疾病。開展豬傳染性胃腸炎病原檢測(cè)，進(jìn)行豬腹瀉病的鑒別診斷，并采用疫苗免疫與藥物相結(jié)合的防治措施，才能有效控制豬流行性腹瀉病的發(fā)生與流行。研究結(jié)果解釋了PED疫苗免疫失敗的原因，為有效地制訂PEDV的防控措施提供理論依據(jù)。