王繪翔 蘇宗義 龔愛紅

（大連市皮膚病醫(yī)院 遼寧 大連 116021）

沙眼衣原體,染色為革蘭氏陰性，寄生于真核細(xì)胞內(nèi)的原核細(xì)胞微生物。有始體和原體兩種發(fā)育形式。其中，原體具有感染性，而始體為其繁殖型。臨床上，沙眼衣原體是非淋菌性尿道炎的主要致病菌[1]。在歐美國(guó)家，由沙眼衣原體引起的泌尿生殖系統(tǒng)感染已經(jīng)超越淋病奈瑟菌躍居第一位。在我國(guó)，泌尿生殖系統(tǒng)感染的首位仍是淋病奈瑟菌。但隨著我國(guó)經(jīng)濟(jì)地不斷發(fā)展，性觀念逐步開放，沙眼衣原體的感染率逐年上升，已經(jīng)成為我國(guó)重點(diǎn)監(jiān)測(cè)的傳染病[2]。沙眼衣原體感染后，男性多表現(xiàn)為尿道炎，不經(jīng)治療也可緩解，但可呈慢性周期性加重，并可合并附睪炎、直腸炎等。女性則能引起尿道炎、宮頸炎以及輸卵管炎等較嚴(yán)重的并發(fā)癥。嚴(yán)重影響患者的身心健康及生活質(zhì)量[3]。本研究旨在了解大連地區(qū)皮膚性病門診患者CT的感染情況對(duì)2017年3月-2018年3月共979例泌尿生殖道標(biāo)本以FQ-PCR的方法進(jìn)行了衣原體檢測(cè)，并對(duì)結(jié)果進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)分析，現(xiàn)報(bào)告如下。

1.資料與方法

1.1 一般資料

選取2017年3月-2018年3月本院皮膚性病科門診患者979例,其中男性570例，女性409例，年齡在10～80歲。大多數(shù)患者中，有尿道或陰道黏液性或黏液膿性分泌物，并有尿痛、尿道不適等癥狀，且患者在進(jìn)行沙眼衣原體檢測(cè)前均未服用抗生素治療。

1.2 標(biāo)本采集

所有標(biāo)本均按無(wú)菌操作進(jìn)行采集。男性患者取尿道分泌物。用細(xì)小無(wú)菌男性一次性棉拭子深入尿道約2～4cm取分泌物；女性患者則用無(wú)菌棉簽擦凈宮頸分泌物，再用無(wú)菌棉拭子插入宮頸內(nèi)，停留幾秒,旋動(dòng)棉拭取出。所有采集好的標(biāo)本立即置入一次性專用試管中加蓋密閉備檢。

1.3 檢測(cè)方法

檢測(cè)均采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)（FQPCR）。實(shí)驗(yàn)選用儀器為宏石公司生產(chǎn)的Slan熒光定量PCR。實(shí)驗(yàn)所用的CT檢測(cè)試劑盒由上海之江公司提供，有效期內(nèi)使用,操作及結(jié)果判斷嚴(yán)格按照說(shuō)明書進(jìn)行。

儀器為宏石公司Slan熒光PCR檢測(cè)儀。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

數(shù)據(jù)采用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料采用率（%）表示，進(jìn)行χ2檢驗(yàn)，計(jì)量資料采用（±s）表示，進(jìn)行t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.結(jié)果

2.1 男、女性CT檢出情況比較

979例疑似泌尿生殖道感染者CT總陽(yáng)性率為12.2%，其中男性和女性患者的陽(yáng)性檢出率占各自所在組別人數(shù)的百分比的14.6%和7.4%。男性檢出率明顯高于女性，且χ2檢驗(yàn)結(jié)果P＜0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，顯示大連地區(qū)沙眼衣原體感染率存在性別差異，見表1。

表1 大連地區(qū)沙眼衣原體檢出率性別差異

2.2 感染者年齡差異比較

979例疑似泌尿生殖道感染者中，患者年齡人數(shù)以21～50歲所占比率最高，但就陽(yáng)性率來(lái)說(shuō)，以10歲～20歲，21歲～30歲和31歲～40歲三組年齡組人CT感染者所占比例最高，分別為16%，14.7%和14%。組間χ2檢驗(yàn)P＜0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，顯示大連地區(qū)沙眼衣原體感染人群以10～40歲的青壯年為主，并存在年齡差異，見表2。

表2 大連地區(qū)沙眼衣原體檢出率年齡差異

2.3 混合感染情況

結(jié)合臨床其他檢測(cè)項(xiàng)目發(fā)現(xiàn)，本院皮膚性病科門診CT感染者復(fù)合感染NG（淋球菌）、UU（解脲支原體）最為常見。檢出率為分別為16.78%和10.71%，見表3。

表3 大連地區(qū)沙眼衣原體混合感染其他疾病情況

3.討論

隨著我國(guó)社會(huì)不斷進(jìn)步，人們的性觀念逐漸改變，且人們普遍對(duì)性衛(wèi)生知識(shí)了解不深，保護(hù)意識(shí)較弱，且病原微生物感染常呈隱形感染，患者常無(wú)任何臨床癥狀。使得我國(guó)由不潔性交而造成的泌尿生殖道感染逐年上升。在泌尿生殖道感染者中，以解脲支原體，沙眼衣原體以及淋病奈瑟菌為感染率最高[4]。衣原體（CT）是主要的非淋菌性尿道炎的致病病原體，常規(guī)檢測(cè)方法包括涂片法、免疫膠體金法、酶聯(lián)免疫法以及細(xì)胞和藥敏培養(yǎng)法[5]。雖然細(xì)胞培養(yǎng)是檢測(cè)衣原體的金標(biāo)準(zhǔn)，檢測(cè)的是有繁殖能力的始體，因而是臨床診斷衣原體感染的最直接的依據(jù)。但檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)，而其余常規(guī)方法敏感性較低，特異性不高，容易造成假陰性，且對(duì)實(shí)驗(yàn)要求較高，且易存在主觀性誤差，從而阻礙相關(guān)診斷。因而，已經(jīng)逐漸被其他檢測(cè)方法所代替。酶聯(lián)免疫法是一種檢測(cè)體液中微量物質(zhì)的固相免疫測(cè)定方法，發(fā)展于上個(gè)世紀(jì)70年代。當(dāng)前，已成為眾多科研項(xiàng)目的重點(diǎn)研究方向。很多實(shí)踐研究均證實(shí)該種檢測(cè)方法靈敏度和特異性均較高，優(yōu)勢(shì)較為明顯。但該方法對(duì)窗口期感染患者檢出率低，在復(fù)發(fā)感染的患者中陽(yáng)性檢出率也較低，且常伴有非特異性反應(yīng)的發(fā)生[6]。PCR檢測(cè)技術(shù)作為分子生物學(xué)的常規(guī)檢測(cè)方法，應(yīng)用廣泛，涵蓋病原微生物、腫瘤、遺傳病等多方面疾病的檢測(cè)和診斷。而熒光定量PCR（FQ-PCR）發(fā)展較晚，是二十世紀(jì)末基于普通PCR的基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)新型的檢測(cè)技術(shù)。由于在擴(kuò)增時(shí)加入了一對(duì)引物及特異熒光探針,便可通過(guò)熒光能量傳遞獲得想用的檢測(cè)結(jié)果。讀取熒光定量PCR結(jié)果時(shí)，我們可以引入CT。當(dāng)樣本CT≤37時(shí)，結(jié)果判定為陽(yáng)性，當(dāng)CT=40或無(wú)CT時(shí)，結(jié)果判定為陰性，黨CT介于37與40之間時(shí)，應(yīng)視為灰區(qū)，對(duì)標(biāo)本復(fù)檢。熒光定量PCR能夠有效避免傳統(tǒng)PCR易污染的缺點(diǎn),也就解決了常規(guī)PCR假陽(yáng)性率高的問(wèn)題，因此獲得檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性更高。靈敏度、準(zhǔn)確度、特異性、敏感性都實(shí)現(xiàn)了質(zhì)的飛躍，檢測(cè)時(shí)間也大大縮短。上述種種優(yōu)點(diǎn)使得這項(xiàng)檢測(cè)技術(shù)得到諸多臨床及科研工作者的認(rèn)可。采用FQPCR進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，熒光信號(hào)強(qiáng)度是隨著基因產(chǎn)物的增加而等比例增強(qiáng)。所以，可以將每次循環(huán)后收集到的熒光信號(hào)組成擴(kuò)增曲線。不論采用何種方法檢測(cè)，每次實(shí)驗(yàn)均應(yīng)該設(shè)置陽(yáng)性和陰性對(duì)照來(lái)印證實(shí)驗(yàn)的有效性。此外，檢測(cè)前的質(zhì)量控制也對(duì)檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性有很多影響，包括標(biāo)本的采集，以及對(duì)標(biāo)本的前處理。因此，要獲得準(zhǔn)確的檢測(cè)結(jié)果，還要有保證患者采集標(biāo)本前正確準(zhǔn)備，臨床醫(yī)師能夠準(zhǔn)確采集標(biāo)本，標(biāo)本正確運(yùn)輸、保存等措施。

“擴(kuò)大金標(biāo)準(zhǔn)”為FQ-PCR和常規(guī)方法同為陽(yáng)性的判定方法，本研究既是采用此標(biāo)準(zhǔn)，但由于實(shí)驗(yàn)條件有限，并未采用細(xì)胞培養(yǎng)作為檢測(cè)，而是采用免疫膠體金法檢測(cè)。用此兩種檢測(cè)方法均為陽(yáng)性作為評(píng)判陽(yáng)性的標(biāo)準(zhǔn)。在119例“真陽(yáng)性”標(biāo)本中，F(xiàn)Q-PCR法檢測(cè)出陽(yáng)性32例，膠體金法僅檢測(cè)出陽(yáng)性13例，在860例“真陰性”標(biāo)本中，PCR法檢測(cè)出陽(yáng)性3例，膠體金方法并未檢測(cè)出陽(yáng)性。在本研究中，F(xiàn)Q-PCR檢測(cè)的敏感性明顯高于免疫膠體金法。這與王勤和戴蕓等人的研究結(jié)果，PCR熒光探針?lè)ǖ年?yáng)性率分別為9.76%和9.94%,明顯高于膠體金法2.64%和6.29%相符[7-8]。證實(shí)FQ-PCR方法有利于避免CT檢測(cè)假陰性的發(fā)生。但是，我們同時(shí)也發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)QPCR的檢測(cè)方法特異性較弱，應(yīng)注意避免假陽(yáng)性造成的誤診。因此，在臨床中，如果將兩種方法聯(lián)合應(yīng)用，將很大程度上提高檢測(cè)報(bào)告的準(zhǔn)確率。

根據(jù)帕麗扎提.阿不都熱依木等對(duì)318例疑似衣原體感染患者的研究表明，CT陽(yáng)性標(biāo)本為30例，占9.43%，其中男性8例，占6.25%，女性22例，占11.58%。女性感染率高于男性[9]。王敬人等的研究則表明，2014年至2016年，柳州地區(qū)CT的陽(yáng)性率約為10.90%，且女性患者CT陽(yáng)性率約為12.2%，同樣高于男性患者9.92%的陽(yáng)性率[10]。而本研究中CT總陽(yáng)性率為12.2%，高于新疆地區(qū)及柳州地區(qū)，但低于馬曉慧等人的研究結(jié)果-河南地區(qū)CT感染率16.5%[11]以及車漢榮等人的研究結(jié)果-茂名地區(qū)CT感染率19.08%[12]。表明CT感染率存在地域差異。大連地區(qū)女性標(biāo)本36例為陽(yáng)性，陽(yáng)性率為7.4%,男性CT感染例數(shù)為83例，陽(yáng)性率為14.6%，明顯高于女性，與帕麗扎提以及王敬仁等的調(diào)查結(jié)果不符，但同馬曉慧等人的研究結(jié)果-河南地區(qū)男性CT感染率29.32%，女性CT感染率3.61%，男性CT感染率高于女性相符。年齡上，21～30歲和31～40歲年齡組CT感染率最高，分別為為14.7%和14.9%，這與王敬人等人的研究結(jié)果相符，21～30歲年齡組和31～40歲年齡組，分別為12.34%和8.84%[13]以上陽(yáng)性檢出率青壯年所占比例最高，其原可能為處于性活躍階段，且大部分青年缺乏相應(yīng)的保護(hù)意識(shí)。以上不同于相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道20歲以下人群的CT陽(yáng)性率相對(duì)高于其他年齡階段的報(bào)道，此結(jié)果可能與本院就診患者年齡年齡主要集中于21～50歲有關(guān)。同時(shí)，疑似沙眼衣原體感染患者合并感染淋球菌及支原體者較多。我院就診患者中，CT（衣原體）+NG（淋球菌）合并感染率為16.78%，高于CT（衣原體）+UU（解脲支原體）合并感染率10.71%。這與車漢榮的研究結(jié)果-UU＋CT感染最為常見,陽(yáng)性率最高,為35.73%；CT＋NG陽(yáng)性率較低,為9.27%不符.說(shuō)明不同地區(qū)衣原體的感染率在性別及合并感染情況上存在一定差異。這可能與本地區(qū)就診群體差異相關(guān)。此外，各地區(qū)氣候、風(fēng)俗、文化、教育程度、醫(yī)療條件等也是造成以上差異的原因。

綜上所述，F(xiàn)Q-PCR的檢測(cè)方法較常規(guī)檢測(cè)方法擁有操作便捷、檢測(cè)時(shí)間短、敏感性高等優(yōu)點(diǎn)，符合早發(fā)現(xiàn)、早治療的臨床需求，具有較高的臨床診斷價(jià)值。但由于其特異性較弱，建議與其他常規(guī)方法聯(lián)合檢測(cè)。同時(shí)，對(duì)年齡、性別易感染的重點(diǎn)人群應(yīng)注意篩查，也建議在篩查衣原體感染時(shí)同時(shí)進(jìn)行淋球菌及解脲支原體感染的篩查，從而為臨床診斷、治療提供有效理論依據(jù)。