胡平 馮國(guó)昌 張華強(qiáng)

(青島市疾病預(yù)防控制中心 青島市預(yù)防醫(yī)學(xué)研究院，山東 青島 266000)

阿爾茨海默病(AD)是一種伴有認(rèn)知、行為和功能失常的進(jìn)行性的神經(jīng)變性疾病，是老年癡呆的一種最常見(jiàn)的形式〔1〕。AD致殘率和死亡率高，已成為繼心血管病、腦血管病和癌癥之后威脅老年人健康的第四大殺手〔2〕。研究表明，高膽固醇代謝是AD的一個(gè)風(fēng)險(xiǎn)因素。膽固醇24S-羥化酶(CYP46A1)基因是細(xì)胞色素P450家族成員，是一個(gè)與脂代謝關(guān)系密切的基因〔3〕。該基因的產(chǎn)物CYP46酶，是顱內(nèi)膽固醇轉(zhuǎn)化為24S-羥化膽固醇過(guò)程中的限速酶〔4〕。因此，CYP46A1基因可能涉及AD的發(fā)病機(jī)制。

目前關(guān)于CYP46A1基因第二個(gè)內(nèi)含子rs754203多態(tài)性與AD關(guān)系的研究比較受關(guān)注，但研究結(jié)果并不完全一致。本研究搜集了較為全面的文獻(xiàn)，對(duì)相關(guān)病例對(duì)照研究(RCT)進(jìn)行Meta分析，定量評(píng)價(jià)CYP46A1基因rs754203多態(tài)性基因與AD發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1檢索策略 計(jì)算機(jī)檢索PubMed、中國(guó)知網(wǎng)、萬(wàn)方數(shù)據(jù)庫(kù)及維普數(shù)據(jù)庫(kù)，搜集有關(guān)CYP46A1基因rs754203多態(tài)性與AD發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)性的RCT，檢索時(shí)限為建庫(kù)至2017年12月。檢索采用主題詞和自由詞結(jié)合的方式進(jìn)行。檢索語(yǔ)種限定為中文和英文。中文檢索詞包括膽固醇24S-羥化酶、CYP46A1、rs754203、基因多態(tài)性、阿爾茨海默病；英文檢索詞包括：cholesterol 24S-hydroxylase、CYP46A1、rs754203、polymorphism、Alzheimer′s disease。

1.2文獻(xiàn)篩選

1.2.1納入標(biāo)準(zhǔn) ①公開(kāi)發(fā)表的關(guān)于CYP46A1基因rs754203多態(tài)性與AD的RCT；②文獻(xiàn)中可直接查到或可以間接推算確切的基因型頻數(shù)；③診斷標(biāo)準(zhǔn)明確，采用美國(guó)國(guó)立神經(jīng)病學(xué)及語(yǔ)言障礙和腦卒中研究所——老年癡呆及相關(guān)學(xué)會(huì)(NINCDS-ADRDA)標(biāo)準(zhǔn)、精神疾病診斷和統(tǒng)計(jì)手冊(cè)(DSM-Ⅳ)、修訂版精神疾病診斷和統(tǒng)計(jì)手冊(cè)(DSM-Ⅲ-R)、阿爾茨海默病聯(lián)合登記協(xié)作組織(CERAD)標(biāo)準(zhǔn)；④納入研究的樣本數(shù)據(jù)明確且可靠；⑤對(duì)同一人群或重復(fù)文獻(xiàn)的報(bào)道選擇文獻(xiàn)質(zhì)量較高的一篇。

1.2.2剔除標(biāo)準(zhǔn) ①綜述、會(huì)議摘要類文獻(xiàn)；②未涉及CYP46A1基因rs754203多態(tài)性基因頻率的研究；③無(wú)法獲取有效數(shù)據(jù)的文獻(xiàn)；④重復(fù)發(fā)表文獻(xiàn)。

1.3文獻(xiàn)篩選與資料提取 由2位研究者根據(jù)納入與排除標(biāo)準(zhǔn)獨(dú)立篩選文獻(xiàn)、提取資料，如遇分歧則由第三方協(xié)助裁定。資料提取內(nèi)容：第一作者的姓名，發(fā)表年限，研究人群的種族和國(guó)家，病例組及對(duì)照組的基本信息(包括性別分布、平均年齡、診斷標(biāo)準(zhǔn)、基因型及基因分布、樣本量)，對(duì)照組的基因型分布是否符合Hardy-Weinberg平衡(HWE)法則。

1.4統(tǒng)計(jì)分析 應(yīng)用STATA11.0軟件。①對(duì)各納入研究中對(duì)照組基因型分布進(jìn)行Hardy-Weinberg遺傳平衡檢驗(yàn)，計(jì)算各組的χ2值，以P<0.05為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。②通過(guò)計(jì)算 3種基因型〔等位基因模型(C vs T)、顯性模型(CC+CT vs TT)、隱性模型(CC vs CT+TT)〕獲得合并比值比(OR)值及其 95%可信區(qū)間(CI)，用以評(píng)估CYP46A1基因rs754203多態(tài)性和AD發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)之間的關(guān)聯(lián)強(qiáng)度，并結(jié)合人群種族情況進(jìn)行亞組分析。③用I2統(tǒng)計(jì)量檢驗(yàn)法評(píng)估不同研究間異質(zhì)性，對(duì)于異質(zhì)性可以忽略的情況(I2值<50%)，采用固定效應(yīng)模型進(jìn)行統(tǒng)計(jì)量的合并；否則采用隨機(jī)效應(yīng)模型。④應(yīng)用剔除法進(jìn)行敏感性分析，對(duì)剩余研究重新合并效應(yīng)量，觀察結(jié)果的穩(wěn)定性。⑤繪制漏斗圖評(píng)估發(fā)表偏倚。

2 結(jié) 果

2.1文獻(xiàn)檢索情況 文獻(xiàn)檢索流程見(jiàn)圖1，最終納入22篇文獻(xiàn)〔5～26〕26組數(shù)據(jù)進(jìn)行Meta分析。納入文獻(xiàn)研究對(duì)象包括病例組4 956例，對(duì)照組4 994例，其中8組數(shù)據(jù)是關(guān)于中國(guó)人的研究，16組數(shù)據(jù)是關(guān)于高加索人的研究，剩余的2組中1組是非裔美國(guó)人，另1組研究人群的種族不明。見(jiàn)表1。

圖1 文獻(xiàn)篩選流程及結(jié)果

2.2Meta分析結(jié)果

2.2.1等位基因模型(C vs T) 異質(zhì)性檢驗(yàn)I2=54.5%，故采用隨機(jī)效應(yīng)模型進(jìn)行分析，Meta分析結(jié)果顯示:在等位基因模型下，CYP46A1基因rs754203多態(tài)性與AD的發(fā)病無(wú)明顯相關(guān)性〔OR= 0.976，95%CI(0.884～1.077)〕。去除對(duì)照組基因型不符合HWE的4個(gè)研究〔9,10,12,22〕后，結(jié)果也無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義〔OR=0.984，95%CI(0.886～1.092)〕?；谌巳悍N族進(jìn)行亞組分析的結(jié)果與整體分析結(jié)果一致〔中國(guó)人：OR=0.912，95%CI(0.678～1.225)；高加索人：OR=0.997，95%CI(0.883～1.126)〕。見(jiàn)表2。

表1 納入研究基本特征(n)

續(xù)表1 納入研究基本特征(n)

1)對(duì)異質(zhì)性產(chǎn)生主要影響的研究

2.2.2顯性模型(CC+CT vs TT) 異質(zhì)性檢驗(yàn)I2=58.1%，故采用隨機(jī)效應(yīng)模型進(jìn)行分析，Meta分析結(jié)果顯示:在顯性模型下，CYP46A1基因rs754203多態(tài)性與AD的發(fā)病無(wú)明顯相關(guān)性〔OR= 0.943，95%CI(0.826～1.076)〕。去除對(duì)照組基因型不符合HWE的4個(gè)研究〔9,10,12,22〕后，結(jié)果也無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義〔OR=0.947，95%CI(0.820～1.094)〕?；谌巳悍N族進(jìn)行亞組分析結(jié)果與整體分析結(jié)果一致〔中國(guó)人：OR=0.812，95%CI(0.530～1.246)；高加索人：OR=0.991，95%CI(0.845～1.163)〕。見(jiàn)表2、圖2。

表2 CYP46A1基因rs754203多態(tài)性與AD發(fā)病相關(guān)性Meta分析結(jié)果

2.2.3隱性模型(CC vs CT+TT) 異質(zhì)性檢驗(yàn)I2= 26.2%，故采用固定效應(yīng)模型進(jìn)行分析，Meta分析結(jié)果顯示:在隱性模型下，CYP46A1基因rs754203多態(tài)性與AD的發(fā)病無(wú)明顯相關(guān)性〔OR=1.045，95%CI(0.904～1.207)〕。去除對(duì)照組基因型不符合HWE的4個(gè)研究〔9,10,12,22〕后，結(jié)果也無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義〔OR=1.125，95%CI(0.963～1.315)〕?；谌巳悍N族進(jìn)行亞組分析結(jié)果與整體分析結(jié)果一致〔中國(guó)人：OR=1.222，95%CI(0.837～1.783)；高加索人：OR=1.085，95%CI(0.912～1.292)〕。見(jiàn)表2。

2.3敏感性分析 剔除對(duì)照組基因型不符合HWE和在各個(gè)模型中對(duì)異質(zhì)性產(chǎn)生主要影響的研究后，對(duì)剩余研究重新進(jìn)行Meta分析，結(jié)果顯示各遺傳模型合并效應(yīng)量也均未發(fā)生明顯變化，說(shuō)明本次Meta分析結(jié)果比較穩(wěn)定。見(jiàn)表2。

2.4發(fā)表偏倚評(píng)估 剔除對(duì)照組基因型不符合HWE和在各個(gè)模型中對(duì)異質(zhì)性產(chǎn)生主要影響的研究后，對(duì)是否存在發(fā)表偏倚進(jìn)行評(píng)估。漏斗圖顯示，各點(diǎn)之間對(duì)稱性較好，說(shuō)明發(fā)表偏倚較??；應(yīng)用Egger線性回歸法對(duì)漏斗圖對(duì)稱性進(jìn)行定量評(píng)價(jià)，結(jié)果也提示無(wú)明顯發(fā)表偏倚(C vs T：P=0.244；CC+CT vs TT：P=0.235；CC vs CT+TT：P=0.418)。見(jiàn)圖3。

圖2 去除對(duì)照組基因型不符合HWE后，CYP46A1基因rs754203多態(tài)性與AD發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的Meta分析(CC+CT vs TT)

圖3 CYP46A1基因rs754203多態(tài)性與AD發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的漏斗圖(CC+CT vs TT)

3 討 論

AD為老年神經(jīng)變性疾病，近年來(lái)關(guān)于AD病因與發(fā)病機(jī)制及治療方面的研究取得了較大的進(jìn)步，特別是關(guān)于AD基因的研究已成為目前研究的熱點(diǎn)。Bogdanovic等〔27〕于2001年首次對(duì)CYP46A1基因與AD之間的關(guān)系進(jìn)行了研究報(bào)道。從這以后，大量的研究開(kāi)始關(guān)注CYP46A1基因在AD病因?qū)W上的重要性。

本次Meta分析結(jié)果顯示,人群AD與CYP46A1基因rs754203多態(tài)性無(wú)顯著關(guān)聯(lián)。無(wú)論是對(duì)所有研究進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析還是去除對(duì)照組基因型不符合HWE的研究進(jìn)行分析，在三種模型中均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。考慮到不同的人群種族的基因型頻率不同及不同的遺傳背景對(duì)AD的遺傳易感性不一樣，我們對(duì)不同種族中CYP46A1基因rs754203多態(tài)性位點(diǎn)與AD的相關(guān)性進(jìn)行了亞組分析。研究結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)了CYP46A1基因rs754203多態(tài)位點(diǎn)與AD發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)沒(méi)有相關(guān)性。為驗(yàn)證Meta分析檢查結(jié)果的穩(wěn)定性，本文還進(jìn)行了敏感性分析。去除對(duì)照組基因型不符合HWE和各個(gè)模型中對(duì)結(jié)果產(chǎn)生主要異質(zhì)性的研究后得到的結(jié)果與之前的結(jié)果相似。此外，對(duì)CYP46A1基因rs754203多態(tài)性的各研究是否存在發(fā)表偏倚進(jìn)行漏斗圖觀察，未見(jiàn)明顯的發(fā)表偏倚，證明結(jié)果較穩(wěn)定可靠。綜上，本次Meta分析結(jié)果具有較高的科學(xué)性。

AlzGene數(shù)據(jù)庫(kù)是對(duì)AD遺傳易感性進(jìn)行Meta分析的一個(gè)重要工具。此次Meta分析所得結(jié)果與AlzGene數(shù)據(jù)庫(kù)結(jié)果一致：CYP46A1基因rs754203多態(tài)性與AD沒(méi)有相關(guān)性。與AlzGene數(shù)據(jù)庫(kù)Meta分析的結(jié)果相比，此次結(jié)果更具有說(shuō)服力和可靠性。因?yàn)椋孩俅舜蜯eta分析納入的研究數(shù)據(jù)比AlzGene數(shù)據(jù)庫(kù)的文獻(xiàn)多3組；②此次的Meta分析對(duì)CYP46A1基因rs754203多態(tài)性與AD關(guān)系的等位基因、顯性和隱性三種模型進(jìn)行了分析，而AlzGene數(shù)據(jù)庫(kù)僅分析了等位基因模型；③此次的Meta分析對(duì)每種模型的異質(zhì)性都進(jìn)行了計(jì)算分析，并根據(jù)異質(zhì)性的大小選擇固定效應(yīng)模型或隨機(jī)效應(yīng)模型進(jìn)行統(tǒng)計(jì)量的合并，而AlzGene數(shù)據(jù)庫(kù)都采用了隨機(jī)效應(yīng)模型進(jìn)行統(tǒng)計(jì)量的合并。

Meta分析是一種可進(jìn)行全面了解、綜合分析和客觀評(píng)價(jià)的統(tǒng)計(jì)學(xué)處理方法，通過(guò)合并樣本增大樣本量，彌補(bǔ)單個(gè)研究的不足，提高統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)功效，得到更可信的結(jié)論，越來(lái)越多地應(yīng)用在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域。然而此次Meta分析亦存在一定局限性：①只納入了公開(kāi)發(fā)表的中英文文獻(xiàn)，可能存在選擇偏倚；②每篇文獻(xiàn)的對(duì)照組納入標(biāo)準(zhǔn)不完全一樣，有可能會(huì)影響分析結(jié)果；③AD是一個(gè)基因與環(huán)境共同作用的疾病，可能存在基因與環(huán)境之間的交互作用，而本研究并未闡述其交互作用。

綜上所述，基于現(xiàn)有Meta分析結(jié)果顯示，CYP46A1基因rs754203多態(tài)性可能與AD無(wú)關(guān)。