張桐，馬曉燕，秦夢(mèng)，任立群，*

（1.吉林大學(xué)藥學(xué)院，吉林 長(zhǎng)春 130021；2.長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院心病中心，吉林 長(zhǎng)春 130021）

高脂血癥（hyperlipedemia，HLP）是一種常見、多發(fā)、脂肪代謝或運(yùn)轉(zhuǎn)異常的代謝性疾病，也是動(dòng)脈粥樣硬化性冠心病、腦血管疾病發(fā)生的重要危險(xiǎn)因素之一。其中，混合型高脂血癥在臨床表現(xiàn)為總膽固醇（total cholesterol，TC）和甘油三酯（triglyceride，TG）升高[1]，以甘油三酯（triglyceride，TG）為主的高脂血癥發(fā)病人群越來越多，越來越年輕化[2]。多種研究表明，混合型高脂血癥的致病機(jī)制與遺傳[3]、飲食不節(jié)制[4]、生活方式[5]不規(guī)律等多因素關(guān)系密切。

隨著國(guó)民生活水平的不斷提高，人們對(duì)于食品的要求越來越高，不僅僅是為了飽腹，維持生存，還要求它具有調(diào)節(jié)人體生理活動(dòng)的功能，即通過日常飲食達(dá)到預(yù)防疾病、調(diào)整機(jī)體狀態(tài)的目的。因此，保健食品產(chǎn)業(yè)孕育而生[6]。降脂保健食品作為保健食品中重要的一類，能夠調(diào)節(jié)機(jī)體內(nèi)的血脂異常，防止動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生。在國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局（China Food and Drug Administration，CFDA）批準(zhǔn)注冊(cè)的降脂保健茶功能因子有羅布麻提取物（使用頻率百分比5.79%）、山楂提取物（使用頻率百分比24.64%）、決明子提取物（使用頻率百分比17.39%）[7]。

本研究通過觀察以羅布麻、山楂、決明子等原料為主要成分的輔助降脂型保健食品對(duì)高脂大鼠體重、肝重及各項(xiàng)血脂指標(biāo)的影響，初步探討羅布麻降脂膠囊的降脂功效，并通過蛋白免疫印跡試驗(yàn)對(duì)降脂膠囊產(chǎn)生有效降脂作用的機(jī)制進(jìn)行探討，為其作為降脂性功能食品及保健品的開發(fā)提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 樣品來源

羅布麻葉（20160816）、山楂（JZ20160623）、決明子（JZ20160124）：江蘇南京景竹生物科技有限公司；糊精：南京納滿生物科技有限公司；羧甲基纖維素鈉（sodium salt of caboxy methyl cellulose，CMC-Na）：上海金山化學(xué)試劑公司；2 號(hào)膠囊殼：恩信養(yǎng)生膠囊。

1.2 受試對(duì)象及高脂飼料配方

選擇健康成年SPF 級(jí)SD 雄性大鼠60 只，體重（160±20）g，由遼寧長(zhǎng)生生物技術(shù)有限公司提供，許可證號(hào)：SCXK（遼）2015-0001。經(jīng)吉林大學(xué)藥學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會(huì)批準(zhǔn)（（2017年），研審第（20170503）），飼養(yǎng)于吉林大學(xué)藥學(xué)院中藥藥理三級(jí)實(shí)驗(yàn)室。室溫為25 ℃，相對(duì)濕度為50%～70%，飼喂全價(jià)營(yíng)養(yǎng)顆粒飼料，自由飲水。

高脂飲食配方：63.6%基礎(chǔ)飼料（遼寧長(zhǎng)生生物技術(shù)股份有限公司），20%白糖（市售）、15%豬油（市售）、1.2%膽固醇（百奧生物科技有限公司）、0.2%膽酸鈉（Gibco 公司）[8]。

1.3 儀器試劑

1.3.1 儀器

BL-420F 生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)：成都泰盟軟件有限公司；TGL-16M 臺(tái)式低溫離心機(jī)：長(zhǎng)沙湘智離心機(jī)儀器有限公司；Nikon ECLIPSE 80i 正置顯微鏡：日本尼康公司；PowerPacTMHC 電泳轉(zhuǎn)移裝置：美國(guó)Bio-Rad公司；SH-20Z 純水儀：成都品成科技有限公司；SpectraMax 190 全波長(zhǎng)光吸收酶標(biāo)儀：美國(guó)MD 公司；4200化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)：上海天能科技有限公司。

1.3.2 試劑

分析純無水乙醇：天津市北聯(lián)精細(xì)化學(xué)品開發(fā)有限公司；總膽固醇（20180126）（total cholesterol，TC）、甘油三酯（20180124）（triglyceride，TG）、高密度脂蛋白膽固醇（20180125）（high-density lipoprotein cholesterol，HDL）、低密度脂蛋白膽固醇（20180124）（low-density lipoprotein cholesterol，LDL）試劑盒：南京建成生物工程有限公司；放射免疫沉淀分析裂解液（radio immunoprecipitation assay，RIPA）、 苯甲基磺酰氟（phenylmethanesulfonyl fluoride，PMSF）：北京鼎國(guó)昌盛生物技術(shù)有限公司；電化學(xué)發(fā)光底物試劑盒（electro-chemiluminescence，ECL）、聚氰基丙烯酸正丁酯法蛋白定量試劑盒（bicinchoninic acid protein assay kit，BCA）：上海碧云天生物技術(shù)研究所；Caspase-9（A10097）、Caspase-3（A11021）：武漢愛博物科技有限公司提供；山羊抗兔IgG 單克隆抗體、山羊抗小鼠IgG 單克隆抗體：北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。

1.4 方法

1.4.1 羅布麻葉降脂膠囊的工藝制備

1）羅布麻葉 30 g、山楂 60 g、決明子粉碎 60 g，糊精12.6 g，糊精過80 目篩；

2）取配方量的羅布麻葉、山楂、決明子加60%乙醇提取2 次，第一次加入10 倍量，提取2 h，第二次加8 倍量，提取2 h，分次濾過合并提取液，回收乙醇至無乙醇味，將濾液濃縮浸膏，備用；

3）將糊精加入稠膏中干燥，粉碎過80 目篩；

4）膠囊填充量：0.284 g/粒。

1.4.2 輔助降脂功能評(píng)價(jià)試驗(yàn)（動(dòng)物實(shí)驗(yàn)）

1.4.2.1 劑量選擇

受試物設(shè)3個(gè)劑量組，為低劑量組51.12 mg/kg、中劑量組102.24 mg/kg、高劑量為208.48 mg/kg（分別相當(dāng)于人體推薦 2、4、6 粒/次）。

1.4.2.2 實(shí)驗(yàn)方法

SD 大鼠60 只，適應(yīng)性飼養(yǎng)7 d 后，將大鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組、模型組、羅布麻葉降脂膠囊低、中、高劑量組。除正常組外，各組大鼠均給予高脂飲食30 d，復(fù)制大鼠高脂血癥模型。造模成功后，第31天起，以0.5%CMC-Na 溶解羅布麻葉降脂膠囊制備成混懸液，各組按劑量分別給予供試樣品，正常對(duì)照組和模型組等劑量灌胃 0.5%CMC-Na，1 次/d。

稱量大鼠初始體重后，稱量大鼠體重1 次/w。分別于造模30 d（即造模成功后）、給予羅布麻葉降脂膠囊30 d 時(shí)，將大鼠進(jìn)行乙醚麻醉，用手固定住大鼠，壓迫頸部，毛細(xì)管45°轉(zhuǎn)刺入，采集各組大鼠血樣，每只大鼠取血1 mL～1.5 mL，常規(guī)分離血清，用以測(cè)定TG、TC、HDL-C、LDL-C 等血脂指標(biāo)。給予羅布麻葉降脂膠囊45 d 時(shí)（實(shí)驗(yàn)結(jié)束后），稱取大鼠體重，乙醚麻醉，眼球取血，將其處死后，稱其肝重，計(jì)算肝重指數(shù)（hepatosomatic indices，HSI）[HSI/%=（肝臟質(zhì)量/體重）×100]。同時(shí)，切取部分胸主動(dòng)脈組織，分別進(jìn)行10%甲醛固定，其余部分進(jìn)行冰凍處理，備用。

固定組織樣本進(jìn)行制備石蠟標(biāo)本、切片，蘇木精染色10 min，流水稍洗，體積分?jǐn)?shù)1%的鹽酸酒精分化，流水沖洗數(shù)分鐘，伊紅染色5 min，流水稍洗，梯度酒精常規(guī)脫水，中性樹膠封片；于光鏡下隨機(jī)選擇清晰視野，觀察大鼠主動(dòng)脈病理變化。

冰凍組織按總蛋白提取試劑盒說明書提取各組心肌組織總蛋白，BCA 法檢測(cè)蛋白質(zhì)濃度，調(diào)整每條泳道的上樣量，進(jìn)行聚丙烯酰胺凝膠電泳（sodium dode cyl sulfate -polyacrylamide gel electrophoresis，SDS -PAGE），濕轉(zhuǎn)法轉(zhuǎn)膜至聚偏二氟乙烯膜（polyvinylidene fluoride，PVDF）膜上，封閉液封閉 1 h 后，蛋白免疫印記（Western blot）一抗稀釋液稀釋，Caspase-9（1∶2000）、Caspase-3（1∶2000）、Cleaved-Caspase3（1∶2000）。4 ℃孵育過夜，次日用Western bolt 二抗稀釋液稀釋二抗，室溫孵育搖床1 h，滴加ECL 發(fā)光工作液，化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)拍照，采用Image-J 軟件進(jìn)行灰度分析。

1.5 數(shù)據(jù)分析

采用SPSS 17.0 統(tǒng)計(jì)軟件處理數(shù)據(jù)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果以Means±SD 表示，計(jì)量資料經(jīng)正態(tài)分布和方差齊性檢驗(yàn)后，多組均數(shù)比較采用單因素方差分析（One-way ANOVA），兩兩之間比較采用 LSD 檢驗(yàn)。P＜0.05 為差異統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果與分析

2.1 羅布麻葉降脂膠囊制備

濾液合并后為2 200 mL，回收乙醇后，濾液重603 g，濃縮后制備稠膏重49 g，加入12.6 g 的糊精，干燥粉碎后重43.8 g，水分為3.04%。

2.2 輔助降脂功能

2.2.1 復(fù)制大鼠混合型高脂血癥模型及一般行為學(xué)觀察

根據(jù)國(guó)食藥監(jiān)?；痆2012]107 號(hào)文中《輔助調(diào)節(jié)血脂功能評(píng)價(jià)方法》降血脂的標(biāo)準(zhǔn)，給予高脂飼料30 d后，與正常組相比，大鼠血清中TG、TC 均升高、HDL-C顯著下降，判定模型成立，造?；旌闲透咧Y動(dòng)物模型復(fù)制成功。含量變化結(jié)果見表1。

表1 實(shí)驗(yàn)組大鼠高脂飲食30d后TG、TC、HDL-C、LDL-C含量變化（n=12，±s）Table 1 Changes of TG、TC、HDL-C and LDL-C contents in experimental group rats after 30 days of high fat diet（n=12，±s）

表1 實(shí)驗(yàn)組大鼠高脂飲食30d后TG、TC、HDL-C、LDL-C含量變化（n=12，±s）Table 1 Changes of TG、TC、HDL-C and LDL-C contents in experimental group rats after 30 days of high fat diet（n=12，±s）

注：與正常組比較 a 表示 P＜0.05，aa 表示 P＜0.01。

組別高脂飲食30 d TG TC HDL-C LDL-C正常組 0.98±0.23 1.60±0.25 1.05±0.15 0.53±0.06模型組 1.60±0.69aa 1.92±0.22a 0.86±0.14aa 0.53±0.09羅布麻葉降脂膠囊低劑量組 1.61±0.86aa 1.87±0.27a 0.84±0.13aa 0.51±0.05羅布麻葉降脂膠囊中劑量組 1.51±0.79aa 1.85±0.25a 0.90±0.13a 0.48±0.07羅布麻葉降脂膠囊高劑量組 1.61±0.77aa 1.93±0.20a 0.88±0.15a 0.52±0.05

正常組大鼠毛色潔白有光澤，反應(yīng)敏捷，活潑愛動(dòng)，食量、排泄物均正常。模型組毛色黯淡缺乏光澤，活動(dòng)明顯，排泄物較稀。給予羅布麻葉降脂膠囊各劑量外在表現(xiàn)均優(yōu)于模型組。

2.2.2 羅布麻葉降脂膠囊對(duì)大鼠的體重影響

表2列出了羅布麻葉降脂膠囊及高脂飼料對(duì)大鼠體重的影響結(jié)果。

隨著試驗(yàn)時(shí)間的延長(zhǎng)，各組大鼠體重均有所變化。經(jīng)分析各組體重在各個(gè)時(shí)期的差異。各組大鼠在實(shí)驗(yàn)前體重及一般狀態(tài)無明顯差異，觀察期間，高脂飲食第1、2、3 周時(shí)，大鼠體重各組大鼠的體重?zé)o明顯差異；第4 周時(shí)，除正常對(duì)照組外，其他各組大鼠體的體重呈現(xiàn)極顯著或顯著性增高的趨勢(shì)；同時(shí)，造模第4周時(shí)，開始給予不同劑量的羅布麻葉降脂膠囊。第5周時(shí)，相比于模型組，羅布麻葉降脂膠囊高劑量組的大鼠的體重開始變化且有明顯降低趨勢(shì)，同時(shí)延長(zhǎng)灌胃時(shí)間（第6、7、8、9 周時(shí)），其降低趨勢(shì)尤為明顯且持久；第6 周時(shí)，羅布麻葉降脂膠囊低、中劑量組大鼠體重相繼開始變化且有明顯降低的趨勢(shì)，同時(shí)延長(zhǎng)灌胃時(shí)間（第7、8、9 周時(shí)），其降低趨勢(shì)尤為明顯且持久。這說明，與羅布麻葉降脂膠囊低、中劑量相比，羅布麻葉降脂膠囊高劑量在降低高脂血癥大鼠體重方面具有起效快、作用效果持久的特點(diǎn)。

2.2.3 羅布麻葉降脂膠囊對(duì)混合型高脂血癥大鼠肝臟系數(shù)的影響

羅布麻葉降脂膠囊對(duì)混合型高脂血癥大鼠肝臟系數(shù)的影響見表3。

表2 羅布麻葉降脂膠囊對(duì)混合型高脂血癥大鼠的體重的影響（n=12，±s）Table 2 Effect of Apocynum venetum lipid-lowering capsule on body weight of rats with mixed hyperlipidemia（n=12，±s）g

表2 羅布麻葉降脂膠囊對(duì)混合型高脂血癥大鼠的體重的影響（n=12，±s）Table 2 Effect of Apocynum venetum lipid-lowering capsule on body weight of rats with mixed hyperlipidemia（n=12，±s）g

注：與正常組相比 a 表示 P＜0.05，aa 表示 P＜0.01；與模型組相比 b 表示 P＜0.05，bb 表示 P＜0.01。

飼養(yǎng)周數(shù) 正常組 模型組 羅布麻葉降脂膠囊低劑量組（51.12 mg/kg）羅布麻葉降脂膠囊中劑量組（102.24 mg/kg）羅布麻葉降脂膠囊高劑量組（208.48 mg/kg）01234567891 0 195.20±10.23 283.00±25.2 331.30±23.53 367.04±29.50 387.43±37.18 425.71±45.06 453.4±50.84 475.0±56.64 506.6±41.61 468.25±52.22 485.71±47.55 203.17±15.12 286.70±22.68 346.21±36.23 369.33±35.98 439.08±35.74bb 486.73±31.67aa 501.00±37.05a 532.71±49.06a 550.75±40.49aa 562.27±38.52aa 560.86±40.60aa 210.26±17.26 293.25±21.51 360.00±37.16 377.08±44.72 429.38±20.94b 430.33±33.48a 436.7±45.92bb 482.75±55.93b 481.27±35.51bb 498.86±47.55bb 486.73±52.87bb 204.58±13.21 288.20±13.97 338.08±20.14 363.25±20.88 438.79±36.63bb 434.69±34.63aa 489.42±37.76aa 512.00±53.37 514.45±38.72bb 508.92±40.75aabb 522.46±55.83bb 220.56±14.23 294.44±12.45 337.00±25.17 357.50±34.07 430.78±42.45bb 430.78±42,75a 486.17±47.03a 488.25±51.28b 480.83±49.54bb 487.09±42.27bb 495.00±45.56bb

表3 羅布麻葉降脂膠囊對(duì)混合型高脂血癥大鼠肝臟系數(shù)的影響（±s，n=12）Table 3 Effect of Apocynum venetum lipid-lowering Capsule on liver coefficient in rats with mixed hyperlipidemia（±s，n=12）

表3 羅布麻葉降脂膠囊對(duì)混合型高脂血癥大鼠肝臟系數(shù)的影響（±s，n=12）Table 3 Effect of Apocynum venetum lipid-lowering Capsule on liver coefficient in rats with mixed hyperlipidemia（±s，n=12）

注：與正常組相比 a 表示 P＜0.05，aa 表示 P＜0.01；與模型組相比 b 表示 P＜0.05，bb 表示 P＜0.01。

組別 肝臟系數(shù)/%正常組模型組羅布麻葉降脂膠囊低劑量組羅布麻葉降脂膠囊中劑量組羅布麻葉降脂膠囊高劑量組2.77±0.36 3.81±0.46aa 3.18±0.45aabb 3.12±0.42bb 2.97±0.36bb

給予羅布麻葉降脂膠囊后，模型組大鼠的肝臟系數(shù)顯著高于正常組，且羅布麻葉降脂膠囊低顯著高于正常組；羅布麻葉降脂膠囊中、高劑量組低于模型組；羅布麻葉降脂膠囊高劑量組降低肝臟系數(shù)的效果較好。

2.2.4 羅布麻葉降脂膠囊對(duì)大鼠高脂TG、TC、HDL-C含量的影響

經(jīng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：復(fù)制混合型高脂血癥時(shí)，與正常組比，各組的LDL-C 含量無明顯差異，因此，不對(duì)LDL-C 進(jìn)行分析。

羅布麻葉降脂膠囊對(duì)混合型高脂血癥大鼠體內(nèi)TG、TC、HDL-C 含量的影響見表4、表5、表6。

表4 羅布麻葉降脂膠囊對(duì)混合型高脂血癥大鼠體內(nèi)TG含量的影響（±s，n=12）Table 4 Effect of Apocynum venetum lipid-lowering capsule on TG content in rats with mixed hyperlipidemia（±s，n=12）mmol/L

表4 羅布麻葉降脂膠囊對(duì)混合型高脂血癥大鼠體內(nèi)TG含量的影響（±s，n=12）Table 4 Effect of Apocynum venetum lipid-lowering capsule on TG content in rats with mixed hyperlipidemia（±s，n=12）mmol/L

注：與正常組相比 a 表示 P＜0.05，aa 表示 P＜0.01；與模型組相比 b 表示 P＜0.05，bb 表示 P＜0.01。

組別羅布麻葉降脂膠囊給予天數(shù)給羅布麻葉降脂膠囊前 第30天 第45天正常組模型組羅布麻葉降脂膠囊低劑量組羅布麻葉降脂膠囊中劑量組羅布麻葉降脂膠囊高劑量組0.98±0.23 1.60±0.69aa 1.61±0.86aa 1.51±0.79aa 1.61±0.77aa 0.73±0.30 3.68±0.85aa 3.53±0.91aa 3.11±0.68aabb 2.51±0.72aabb 1.11±0.205 2.29±0.74aa 1.49±0.70bb 1.70±0.50ab 1.11±0.46bb

表5 羅布麻葉降脂膠囊對(duì)高脂混合型高脂血癥大鼠體內(nèi)TC含量的影響（±s，n=12）Table 5 Effect of Apocynum venetum lipid-lowering capsule on TC content in rats with mixed hyperlipidemia（±s，n=12）mmol/L

表5 羅布麻葉降脂膠囊對(duì)高脂混合型高脂血癥大鼠體內(nèi)TC含量的影響（±s，n=12）Table 5 Effect of Apocynum venetum lipid-lowering capsule on TC content in rats with mixed hyperlipidemia（±s，n=12）mmol/L

組別羅布麻葉降脂膠囊給予天數(shù)給羅布麻葉降脂膠囊前 第30天 第45天正常組模型組羅布麻葉降脂膠囊低劑量組1.60±0.25 1.92±0.22a 1.87±0.27a 1.55±0.34 2.19±0.0.38aa 1.95±0.259aa 1.10±0.31 1.86±0.21aa 1.86±0.62aa

續(xù)表5 羅布麻葉降脂膠囊對(duì)高脂混合型高脂血癥大鼠體內(nèi)TC含量的影響（±s，n=12）Continue table 5 Effect of Apocynum venetum lipid-lowering capsule on TC content in rats with mixed hyperlipidemia（±s，n=12）mmol/L

續(xù)表5 羅布麻葉降脂膠囊對(duì)高脂混合型高脂血癥大鼠體內(nèi)TC含量的影響（±s，n=12）Continue table 5 Effect of Apocynum venetum lipid-lowering capsule on TC content in rats with mixed hyperlipidemia（±s，n=12）mmol/L

注：與正常組相比 a 表示 P＜0.05，aa 表示 P＜0.01；與模型組相比 b 表示 P＜0.05，bb 表示 P＜0.01。

囊給予天數(shù)第45天羅布麻葉降脂膠囊高劑量組1.93±0.20a 1aab 1.86±0.19abb 1.89±0.17aa 1.89±0.50aa

表6 羅布麻葉降脂膠囊對(duì)高脂混合型高脂血癥大鼠體內(nèi)HDL-C含量的影響（±s，n=12）Table 6 Effect of Apocynum venetum lipid-lowering capsule on HDL-C content in rats with mixed hyperlipidemia（±s，n=12）mmol/L

表6 羅布麻葉降脂膠囊對(duì)高脂混合型高脂血癥大鼠體內(nèi)HDL-C含量的影響（±s，n=12）Table 6 Effect of Apocynum venetum lipid-lowering capsule on HDL-C content in rats with mixed hyperlipidemia（±s，n=12）mmol/L

注：與正常組相比 a 表示 P＜0.05，aa 表示 P＜0.01；與模型組相比 b 表示 P＜0.05，bb 表示 P＜0.01。

組別羅布麻葉降脂膠囊給予天數(shù)給羅布麻葉降脂膠囊前 第30天 第45天正常組模型組羅布麻葉降脂膠囊低劑量組羅布麻葉降脂膠囊中劑量組羅布麻葉降脂膠囊高劑量組1.05±0.15 0.86±0.14aa 0.84±0.13aa 0.90±0.13a 0.88+0.15a 1.47±0.18 0.66±0.07aa 0.71±0.11aa 0.71±0.13aa 0.78+0.04aabb 0.91±0.13 0.66±0.09aa 0.64±0.09aa 0.61±0.11aa 0.77+0.06ab

未給予羅布麻葉降脂膠囊前，各組的TG、TC 含量顯著高于CON 組，HDL-C 含量顯著低于CON 組。提示，復(fù)制混合型高脂血癥大鼠模型成功。

給予羅布麻葉降脂膠囊30 d 時(shí)（高脂飲食持續(xù)至60 d），各組的 TG、TC 含量顯著高于 CON 組，HDL-C含量顯著低于CON 組，混合型高脂血癥模型成立；與模型組相比，羅布麻葉降脂膠囊中、高劑量組可顯著降低TG、TC 含量，其高劑量可顯著提高HDL-C 含量。

給予羅布麻葉降脂膠囊45 d 時(shí)（高脂飲食持續(xù)至75 d），各組的 TG、TC 含量顯著高于 CON 組，HDL-C含量顯著低于CON 組，混合型高脂血癥模型成立；與模型組相比，羅布麻葉降脂膠囊各劑量組可顯著降低TG 含量，其高劑量可顯著提高HDL-C 含量。

2.3 羅布麻葉總黃酮對(duì)HLP大鼠主動(dòng)脈組織形態(tài)學(xué)影響

羅布麻葉降脂膠囊對(duì)混合型高脂血癥大鼠胸主動(dòng)脈組織HE 染色結(jié)果見圖1。

圖1 羅布麻葉降脂膠囊對(duì)混合型高脂血癥大鼠胸主動(dòng)脈組織HE染色（200×）Fig.1 The pathological effect of Apocynum venetum lipid-lowering capsule on thoracic aortic tissue of HLP rats（HE，× 200）

CON 組大鼠胸主動(dòng)脈內(nèi)膜、中膜和外膜分界清楚，內(nèi)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞完整，中膜可見梭形平滑肌細(xì)胞，彈力纖維層結(jié)構(gòu)清晰完整，外膜為結(jié)締組織（圖1A）；模型組大鼠胸主動(dòng)脈內(nèi)膜局部增厚，彈力纖維發(fā)生斷裂和崩解，中膜萎縮（圖1B）；羅布麻葉降脂膠囊中、高劑量組（圖1D、E）大鼠胸主動(dòng)脈病理變化較模型組有所減輕，羅布麻葉降脂膠囊中、高組改善明顯。

2.4 羅布麻葉降脂膠囊對(duì)高脂血癥大鼠的主動(dòng)脈相關(guān)蛋白水平表達(dá)的影響

羅布麻葉降脂膠囊對(duì)高脂血癥大鼠的主動(dòng)脈相關(guān)蛋白水平表達(dá)的影響見圖2。

Western-blot 結(jié)果分析表明，與正常對(duì)照組相比，高脂飲食大鼠組下調(diào)Caspase-9、Caspase-3，上調(diào)Cleaved Caspase3 蛋白表達(dá)水平。給予羅布麻葉降脂膠囊作用后，上調(diào)Caspase-9、Caspase-3 蛋白表達(dá)量，下調(diào)Cleaved Caspase3 等蛋白表達(dá)量。

3 結(jié)論與討論

目前，臨床中高脂血癥簡(jiǎn)易分為分為高膽固醇血癥、高甘油三酯血癥、低高密度脂蛋白血癥、混合型高脂血癥等[9]。文獻(xiàn)指出，混合型高脂血癥在臨床中較為常見，在成年人群中發(fā)病率較高，致病機(jī)制復(fù)雜[10]?；旌闲透咧Y表現(xiàn)為TG 或TC 顯著升高[1]。

臨床上常用的有效降脂藥物是西藥。Farnier M[11]發(fā)現(xiàn)西立伐他汀是一種安全有效，耐受性良好的降脂藥物，可顯著降低混合型高脂血癥病人體內(nèi)LDL 含量，升高TG 含量，防止動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生。Bairaktari E 等[12]發(fā)現(xiàn)小劑量阿托伐他汀和微粉化非諾貝特均可有效改善混合性高脂血癥患者的血脂水平。但是，部分的西藥具有不可逆轉(zhuǎn)的毒副作用，會(huì)出現(xiàn)嚴(yán)重的不良反應(yīng)[5]。隨著新型保健食品興起，已有研究報(bào)道，羅布麻可制成中藥組方，治療高血壓[13]，也可制成保健茶[14]，保健掛面[15]、營(yíng)養(yǎng)泡騰片[16]、具有降脂作用復(fù)方羅布麻葉固體制劑[17]，已有部分投入生產(chǎn)過程中。功能性保健食品受到人們青睞。

圖2 羅布麻葉降脂膠囊對(duì)高脂血癥大鼠Caspase-9、Caspase-3、Cleaved Caspase-3等相關(guān)蛋白水平表達(dá)的影響Fig.2 Effects of Apocynum venetum lipid-lowering capsules treatment on Caspase-9，Caspase-3，Cleaved Caspase-3 protein expression in Hyperlipedemia rat model

羅布麻葉降脂膠囊是以羅布麻葉為基礎(chǔ)，決明子、山楂優(yōu)化組方制備而成的降脂型保健食品。Ma Y X 等[18]發(fā)現(xiàn)羅布麻葉提取物可改善高脂血癥。Yang S Y[19]發(fā)現(xiàn)羅布麻葉水提取物可緩解小鼠高脂血癥。Awasthi V K 等[20]利用單次腹腔注射Triton WR-1339誘導(dǎo)高脂血癥，研究發(fā)現(xiàn)500 mg/kg 決明子種子提取物，逆轉(zhuǎn)血漿總膽固醇，磷脂，甘油三酯和肝素后，激活脂肪分解，從而發(fā)揮顯著的降脂作用。Shao F 等[21]比較了山楂果實(shí)水溶液和乙醇提取物的降脂作用，試驗(yàn)結(jié)果顯示，降脂效果的強(qiáng)弱可能取決于山楂果實(shí)在不同的萃取劑中的總酚，總酚含量越強(qiáng)，降脂效果越明顯。山楂果實(shí)乙醇提取物降脂效果優(yōu)于其水溶液。

Hao X L 等[22]發(fā)現(xiàn)金絲桃苷，作為是羅布麻主要的活性成分之一，可降低Bax、Cleaved Caspase 3 等mRNA 表達(dá)水平，升高Bcl-2 mRNA 表達(dá)水平。從而減少過氧化氫（H2O2）誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVECs）凋亡作用。Zhao X 等[23]發(fā)現(xiàn)決明子提取物上調(diào)Bax、Caspase-3 和Caspase-9 蛋白的表達(dá)，以及下調(diào)Bcl-2蛋白表達(dá)，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的凋亡，發(fā)揮抗炎、抗轉(zhuǎn)移作用。Swaminathan J K 等[24]研究發(fā)現(xiàn)山楂提取物下調(diào)促凋亡蛋白細(xì)胞色素C 和Cleaved Caspase-3 蛋白含量，從而改善可改善缺血/再灌注（I/R）所致的心肌損傷。

本研究將羅布麻葉、山楂、決明子提取物經(jīng)工藝優(yōu)化后，制備稠膏重49 g，加入12.6 g 的糊精，干燥粉碎后重43.8 g，水分為3.04%，制成羅布麻葉降脂膠囊；羅布麻葉降脂膠囊可改善高脂血癥引起的大鼠體重、肝重系數(shù)、血脂指標(biāo)及組織形態(tài)異常。同時(shí)，羅布麻葉降脂膠囊可能通過調(diào)節(jié)Caspase 家族蛋白表達(dá)水平，發(fā)揮改善混合型高脂血癥作用。