蔡勇 陳德暉 劉文寬 梁文雅 劉升 周榮 王丹瑜 蔣惠

1廣州醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院兒科（廣州510120）；2呼吸疾病國家重點實驗室，國家呼吸系統(tǒng)疾病

臨床醫(yī)學研究中心，廣州呼吸健康研究院，廣州醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院，廣州醫(yī)科大學（廣州510230）；3贛南醫(yī)學院（江西贛州341000）

人博卡病毒（human bocavirus，HBoV）是一種單鏈DNA病毒，屬細小病毒科［1］。12%肺炎患兒血清HBoV-IgG抗體4倍以上增高，且超過一半的患兒為單純HBoV感染，提示HBoV是呼吸道感染的獨立致病原［2］。HBoV是近年新發(fā)現(xiàn)病毒，迄今關于急性呼吸道感染（acute respiratory infection，ARI）患兒HBoV的流行病學報道較少，為了解廣州地區(qū)ARI住院兒童HBoV的流行病學特征、指導HBoV的防治、防范院內(nèi)交叉感染，筆者分析了1 168例ARI住院患兒HBoV的流行病學特征，現(xiàn)將結果報告如下。

1 對象與方法

1.1 研究對象2015年1月至2015年12月廣州醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院兒科住院部ARI患兒共1 168例，其中男723例，女445例；≤0.5歲216例，＞0.5歲且≤1歲310例，＞1歲且≤3歲357例，＞3歲且≤6歲174例，＞6歲111例。春季（3～5月）229例，夏季（6～8月）374例，秋季（9～11月）280例，冬季（12月～次年2月）285例。ARI診斷標準參考《諸福棠實用兒科學》第7版［3］。

1.2 標本采集及處理患兒入院當天或第2天清晨收集標本。將拭子放入無菌生理鹽水中濕潤（濕潤的拭子比干燥的拭子能沾取更多的細胞，禁止將拭子放入病毒運輸液中濕潤拭子）；由檢查者用壓舌板輔助，將咽拭子越過舌根，到達咽峽部，反復涂抹數(shù)次，取出時避免接觸舌及口腔黏膜等；將拭子投入含2.5 mL病毒運送液的15 mL管中，折斷拭桿，使拭子完全置于管中；旋緊管蓋，做好標記；采集的咽拭子保存于2～8℃病毒運輸液中，運輸至呼吸疾病國家重點實驗室。漩渦震蕩5～ 10 s；3 000 r/min離心10 min；吸取上清1.8 mL至凍存管中，-80℃保存?zhèn)溆?；重懸剩下的培養(yǎng)基及沉淀，吸取120 μL至含有480 μL A液的離心管中用于核酸提取，剩下的樣品保存于另一個凍存管中，-80℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 標本核酸提取使用ABC核酸提取試劑盒（廣州呼研所醫(yī)藥科技有限公司）提取核酸。步驟如下：在1.5 mL離心管中加入480 μL A液+120 μL樣本，充分混勻，放置5 min；加入600 μL B液，13 000 r/min離心10 min，棄上清；往沉淀中加入500 μL C液，13 000 r/min離心5 min，棄上清；室溫晾干；加入120 μL DEPC水，震蕩，充分溶解核酸。

1.4 檢測試劑準備使用熒光PCR檢測試劑盒檢測 HBoV、HMPV、infA、infB、RSV、PIV1、PIV2、PIV3、PIV4、ADV、HRV、EV、CoV（廣州呼研所醫(yī)藥科技有限公司）。根據(jù)試劑說明配制25 μL反應體系至PCR八排管中（Axygen），進行擴增反應。反應配制方法：反應液 19.3 μL，逆轉(zhuǎn)錄酶0.5 μL，Taq 0.2 μL，樣品核酸提取物5 μL，輕輕混勻后準備上機檢測。

1.5 熒光定量PCR檢測采用核酸擴增技術檢測呼吸道病毒［4］。使用ABI7500熒光定量PCR儀（Applied Biosystems）檢測，根據(jù)試劑盒說明書采用統(tǒng)一反應條件如下：48℃5 min；94℃2 min；循環(huán)條件94℃ 10 s、55℃35 s，循環(huán)數(shù)40個。根據(jù)試劑說明書判定結果。

1.6 統(tǒng)計學方法采用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件進行分析，計數(shù)資料用百分率表示，組間比較采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

本組患兒總病毒檢出率42.6%（497/1 168），HBoV檢出率2.5%（29/1 168）。HBoV與其他病毒混合檢出率44.8%（13/29），分別為HBoV+RSV5例，HBoV+EV2例、HBoV+HRV 2例，HBoV+PIV3 1例、HBoV+ADV1例，HBoV+RSV+HMPV 1例、HBoV+PIV3+HRV 1例；其中46.2%（6/13）合并RSV感染。不同年齡段患兒病毒檢出率見表1?；純翰《緳z出率大致呈現(xiàn)隨年齡增長降低的趨勢（χ2=42.965，P＜0.01）。不同年齡段患兒HBoV檢出率差異存在統(tǒng)計學意義（χ2=10.073，P＜0.05）。不同季節(jié)病毒檢出率見表2。春季病毒檢出率最高，其次為冬季，不同季節(jié)間病毒檢出率比較差異有統(tǒng)計學意義（χ2=30.471，P＜0.05）。不同季節(jié)HBoV檢出率差異無統(tǒng)計學意義（χ2=6.91，P＞0.05）。HBoV陽性的患兒中27例臨床診斷為支氣管肺炎，2例為支氣管炎。

3 討論

ARI是兒童常見病，病毒是常見病原體。本組患兒病毒檢出率42.6%，提示廣州地區(qū)ARI住院患兒常存在病毒感染。本組患兒HBoV檢出率（2.5%），較蘇州（6.19%）［5］、蘭州（8.2%）［6］、南京（8.3%）［7］、烏魯木齊（8.38%）［8］、上海（4.6%）［9］低。前述數(shù)據(jù)提示廣州ARI住院兒童HBoV感染率低，不同地區(qū)ARI住院兒童HBoV感染率不同。本組患兒HBoV與其他病毒混合檢出率44.8%，以RSV最常見（46.2%）。蘇州ARI住院兒童HBoV與其他病毒混合檢出率19.31%，以RSV最常見［5］。上海ARI住院兒童HBoV與其他病毒混合檢出率66.7%，最常見的是 ADV［9］。蘭州 ARI住院兒童HBoV與其他病毒混合檢出率69.8%［6］。南京ARI住院兒童HBoV與其他病毒混合檢出率57.6%，前2位病原體依次為MP、RSV［7］。澳大利亞ARI住院兒童HBoV與其他病毒混合檢出率55.6%，最常見的是RSV［10］。39.1%德國HBoV陽性呼吸道感染兒童合并RSV感染［11］。大部分流行病學觀察發(fā)現(xiàn)HBoV常與其他病原混合感染，以RSV最常見。

表1 不同年齡ARI住院患兒病毒分布情況Tab.1 The age distribution of viruses in hospitalized children with ARI 例（%）

表2 不同季節(jié)ARI住院患兒病毒分布情況Tab.2 The seasens distribution of viruses in hospitalized children with ARI 例（%）

ARI住院兒童HBoV檢出高峰年齡段集中在0.5 ～ 3 歲（P＜ 0.05），與文獻報道相似［5，7-8，11-13］。0.5～3歲兒童胎傳抗體降低、而自身免疫功能發(fā)育尚不成熟，故這個年齡段患兒易于感染病毒。

本組患兒HBoV呈四季散發(fā)，無明顯季節(jié)性。蘭州以4、12月檢出率高，但無明顯季節(jié)性［14］。南京除5月外其他月份都有散發(fā)，無明顯季節(jié)性［7］。蘇州全年均存在感染，以夏秋季高發(fā)［5］。烏魯木齊全年散發(fā)，以冬春季為主［8］。瑞典［1］、法國［15］HBoV感染高峰期是11月至次年3月，日本則是4～ 6月，5月陽性率最高［16］。不同國家、不同地區(qū)ARI住院患兒HBoV季節(jié)分布的差異可能與不同地區(qū)氣候環(huán)境不同有關。

綜上所述，廣州地區(qū)ARI住院患兒HBoV檢出率低，常與其他病毒混合感染，其中以RSV最多見；0.5～3歲兒童是感染重點人群，臨床醫(yī)生應重視HBoV的檢測及防治。迄今關于ARI住院患兒HBoV的流行病學報道較少，本研究分析了廣州ARI住院兒童HBoV的流行病學特征，為指導HBoV的防治、防范院內(nèi)交叉感染提供了流行病學依據(jù)。