劉振亞 嚴(yán)海璘 朱宗財(cái) 李亞鵬 張王斌

（塔里木大學(xué)植物科學(xué)學(xué)院，新疆 阿拉爾843300）

核桃（Juglans regiaL），屬于核桃科（Juglandaceae）、核桃屬（Juglans），①是世界著名的4 大堅(jiān)果之一。2015 年全疆核桃種植面積達(dá)3. 516 77×105hm2，總產(chǎn)6.008 44×108kg，居全國(guó)首位，核桃已成為促進(jìn)新疆農(nóng)村經(jīng)濟(jì)社會(huì)發(fā)展、農(nóng)民增收的支柱產(chǎn)業(yè)之一［1］。然而近年來(lái)，核桃病發(fā)生越來(lái)越嚴(yán)重，樹齡較大的核桃園一般年份發(fā)病率在50%左右，嚴(yán)重時(shí)可達(dá)90%以上，腐爛病已嚴(yán)重制約核桃產(chǎn)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展［2］。而目前對(duì)新疆核桃腐爛病的生物學(xué)特性，核桃腐爛病發(fā)生嚴(yán)重是否與防護(hù)林有關(guān)？與防護(hù)林腐爛病是否存在交互侵染？這些問(wèn)題很少有學(xué)者研究，明確這些問(wèn)題，對(duì)防治核桃腐爛病具有重要意義。邵延慧［3］研究表明柳樹腐爛病可讓楊樹和胡楊發(fā)病嚴(yán)重，也能讓棗樹、梨樹和蘋果樹發(fā)病但不產(chǎn)生分生孢子器，因此在生產(chǎn)實(shí)際中提倡在梨園、棗園和蘋果園周圍可以種植柳樹為防護(hù)林，在防護(hù)林的建設(shè)時(shí)盡量減少柳樹與胡楊和楊樹混栽。邢紅亮［4］將桃樹腐爛病接種到梨樹、蘋果樹、棗樹、楊樹、柳樹、胡楊上，發(fā)現(xiàn)均能發(fā)病且都能產(chǎn)孢。唐俊煜［5］將香梨腐爛病接種到紅棗、蘋果樹、核桃樹、柳樹、楊樹、梨樹和沙棗樹上，發(fā)現(xiàn)均能發(fā)病，但只在蘋果樹和梨樹上產(chǎn)孢。核桃與防護(hù)林之間相互接種病菌，是否能發(fā)病并產(chǎn)孢？核桃腐爛病對(duì)溫度、pH 和光照的適應(yīng)性以及對(duì)碳氮源利用情況如何？這些問(wèn)題還沒(méi)有學(xué)者進(jìn)行研究。因此，本文以此為出發(fā)點(diǎn)，研究核桃腐爛病的生物學(xué)性狀和與防護(hù)林是否存在交互侵染，為新疆南疆核桃腐爛病的防治和核桃園合理布局提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試菌種的采集和分離

從新疆阿克蘇地區(qū)采集核桃腐爛病的病皮（含健康組織）或病枝條，放于牛皮紙標(biāo)本袋中［6］。按照組織塊分離法分離病原菌，經(jīng)科赫氏法則驗(yàn)證后，獲得單菌落后保存菌種。

1.2 致病性測(cè)定

采用離體枝條接種法［7］，將核桃、柳樹和胡楊腐爛病菌接種于核桃、柳樹和胡楊枝條上，置于25 ℃將核桃、柳樹和3 d后觀察記錄枝條發(fā)病情況。

1.3 分離株培養(yǎng)性狀觀察

將接種分離株的PDA 培養(yǎng)基置于25 ℃條件下暗培養(yǎng)，從第2 d 觀察記錄菌落的顏色、形狀、氣生菌絲的疏密程度、產(chǎn)孢時(shí)間，直到菌落長(zhǎng)滿皿［8］。

1.4 不同條件對(duì)菌落生長(zhǎng)的影響

1.4.1 不同環(huán)境條件對(duì)菌落生長(zhǎng)的影響

將分離株接于不同溫度（10 ℃、15 ℃、20 ℃、25 ℃、28 ℃、30 ℃、35 ℃、40 ℃）、不同pH 值（2、3、4、5、6、7、8、9、10、11）和置于24 h 光照、12 h 光暗交替、24 h 黑暗條件下，置于25 ℃條件下，暗培養(yǎng)，每隔24 h測(cè)量菌落直徑，記錄菌落形態(tài)特征［9］。

1.4.2 不同營(yíng)養(yǎng)條件對(duì)菌落生長(zhǎng)的影響

以查彼克培養(yǎng)基（Czapek）為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，將分離株置于不同碳源種類（葡萄糖、麥芽糖、淀粉代替蔗糖和空白對(duì)照）和不同氮源種類（酵母膏、牛肉膏、蛋白胨、硫酸銨、甘氨酸和硝酸鉀代替硝酸鈉和空白對(duì)照）培養(yǎng)基上，25 ℃條件下暗培養(yǎng)，每隔24 h 測(cè)量菌落直徑和記錄形態(tài)特征［9］。

2 結(jié)果與分析

2.1 致病性測(cè)定結(jié)果

表1 不同腐爛病菌對(duì)寄主的致病性測(cè)定

由表1可知，將核桃腐爛病菌接種于柳樹和胡楊枝條上，在胡楊和柳樹枝條上均發(fā)病，但在胡楊枝條上病斑擴(kuò)展速度快于柳樹枝條，在17 d 時(shí)，在胡楊枝條上產(chǎn)孢，而在觀察期內(nèi)柳樹枝條上沒(méi)有產(chǎn)孢。將柳樹和胡楊腐爛病菌接種到核桃枝條上，發(fā)現(xiàn)在核桃枝條上均發(fā)病，都在第7 d 天產(chǎn)孢，病斑擴(kuò)展速度相近。柳樹和胡楊腐爛病相互接種，發(fā)現(xiàn)在枝條上均能發(fā)病和產(chǎn)孢。由此說(shuō)明，核桃、柳樹和胡楊存在交互侵染的可能。

2.2 分離株在PDA培養(yǎng)上的培養(yǎng)性狀

菌落正反面均為乳白色，呈羽毛狀，氣生菌絲較少，菌絲緊貼在培養(yǎng)基上，從第7 d開(kāi)始產(chǎn)生子實(shí)體。

2.3 環(huán)境條件對(duì)菌落生長(zhǎng)的影響

2.3.1 溫度對(duì)菌落生長(zhǎng)的影響

分離株病原菌在15～35 ℃溫度條件下均能正常生長(zhǎng)，在15 ℃以下和30 ℃以上，分離株生長(zhǎng)緩慢，低于10 ℃和高于40 ℃分離株不生長(zhǎng)，說(shuō)明分離株對(duì)高低溫度的抵抗力不強(qiáng)，分離株的最適生長(zhǎng)溫度在25～28 ℃之間，在此溫度范圍內(nèi)，菌落生長(zhǎng)較快，產(chǎn)生產(chǎn)孢體數(shù)量多，時(shí)間快（見(jiàn)圖1）。

圖1 溫度對(duì)核桃腐爛病菌菌落生長(zhǎng)的影響

2.3.2 pH對(duì)菌落生長(zhǎng)的影響

由圖2 可知，該菌落適合生長(zhǎng)的pH 范圍廣，在pH3～10 菌落均能生長(zhǎng)。在pH 低于4 和pH 高于8時(shí)，菌落生長(zhǎng)緩慢，產(chǎn)生的產(chǎn)孢體少；在pH 低于2 和高于11，菌落不生長(zhǎng)；在pH5～6時(shí)，菌落生長(zhǎng)速率很快，菌絲致密，菌落呈乳白色，說(shuō)明菌落適合于偏弱酸性的環(huán)境條件下生長(zhǎng)。

圖2 pH對(duì)核桃腐爛病菌菌落生長(zhǎng)的影響

2.3.3 光照條件對(duì)菌落生長(zhǎng)的影響

分離株在不同光照條件下均能生長(zhǎng)，光照條件對(duì)分離株菌落生長(zhǎng)有促進(jìn)作用，但不同光照條件對(duì)分離株菌落生長(zhǎng)的影響存在差異性。全光照和光暗交替的菌落生長(zhǎng)均快于全黑暗的菌落生長(zhǎng)，表現(xiàn)出光照條件有利于菌落的生長(zhǎng)。全光照（5 d）和光暗交替（7 d）處理產(chǎn)生產(chǎn)孢體的時(shí)間早于全黑暗（10 d）處理。全光照和光暗交替的菌落顏色為乳白色，而全黑暗處理的菌落顏色為灰白色，說(shuō)明在沒(méi)有光照條件下，菌落更容易分泌色素。

圖3 光照條件對(duì)核桃腐爛病菌菌落生長(zhǎng)的影響

2.4 營(yíng)養(yǎng)條件對(duì)菌落生長(zhǎng)的影響

2.4.1 不同氮源對(duì)菌落生長(zhǎng)的影響

分離株均可在牛肉膏、酵母膏、蛋白胨、硝酸鉀、硫酸銨、甘氨酸培養(yǎng)基以及無(wú)氮培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，但在各培養(yǎng)基上菌落生長(zhǎng)存在明顯的差異。在以牛肉膏、酵母膏、蛋白胨、硫酸銨為氮源的培養(yǎng)基上菌落生長(zhǎng)速率和產(chǎn)孢時(shí)間快，菌落直徑大，說(shuō)明這四種碳源培養(yǎng)基有利于菌落的生長(zhǎng)，但牛肉膏效果最好，其次是酵母膏、蛋白胨、硫酸銨。分離株在無(wú)氮的培養(yǎng)基、硝酸鉀和甘氨酸培養(yǎng)基上生長(zhǎng)緩慢，說(shuō)明分離株很難利用這兩種氮源。

圖4 分離株在不同氮源培養(yǎng)基上的菌落直徑

圖5 分離株在不同碳源培養(yǎng)基上的菌落直徑

2.4.2 不同碳源對(duì)菌落生長(zhǎng)的影響

從圖5 可以看出，分離株可在蔗糖、淀粉、麥芽糖和葡萄糖培養(yǎng)基以及無(wú)碳培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，但在各培養(yǎng)基上菌落生長(zhǎng)存在差異。在麥芽糖培養(yǎng)基上，分離株生長(zhǎng)最好，菌落生長(zhǎng)速率快，菌絲生長(zhǎng)密集，菌落直徑大。分離株還可以在無(wú)碳源的培養(yǎng)基上緩慢生長(zhǎng)，說(shuō)明碳源不是分離株存活的必要條件，但它是分離株正常生長(zhǎng)的重要因素。

3 討論

本文主要對(duì)核桃腐爛病菌的培養(yǎng)性狀、致病性、在不同環(huán)境條件和不同營(yíng)養(yǎng)條件下病原菌的生長(zhǎng)情況進(jìn)行研究。研究結(jié)果表明，核桃腐爛病與防護(hù)林腐爛病存在交互侵染，腐爛病能在核桃、柳樹和胡楊之間相互侵染，只是在致病力上存在一定的差異性，這是核桃腐爛病發(fā)生嚴(yán)重的一個(gè)重要因素。在研究不同營(yíng)養(yǎng)條件對(duì)菌落生長(zhǎng)的影響時(shí)，發(fā)現(xiàn)分離株可以在無(wú)碳源和氮源的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，甚至在無(wú)氮源培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)超過(guò)了在硫酸銨和甘氨酸中的生長(zhǎng)，說(shuō)明核桃腐爛病菌具有高效的碳氮營(yíng)養(yǎng)代謝途徑，這是臧睿［10］的研究結(jié)果一致。本文研究的核桃腐爛病最適溫度為28 ℃，最適pH 為5～6，研究結(jié)果與邵延慧［9］研究的柳樹腐爛病，唐俊煜［5,11］研究的棗樹和香梨腐爛病，邢紅亮［4］研究的桃樹腐爛病，這些同地區(qū)不同寄主上的腐爛病對(duì)最適溫度和pH 的適應(yīng)性相一致，與臧睿［10］和倫瑩瑩［12］對(duì)蘋果樹腐爛病研究結(jié)果也一致，說(shuō)明腐爛病對(duì)最適溫度和pH 的適應(yīng)性與不同寄主和地區(qū)無(wú)關(guān)。

4 結(jié)論

4.1 對(duì)核桃腐爛病的生物學(xué)性狀進(jìn)行研究，研究結(jié)果為核桃腐爛病菌落生長(zhǎng)的最適溫度為28 ℃；最適pH 值為5～6；最適光照條件為全光照條件；最適氮源和碳源是牛肉膏和麥芽糖。

4. 2 核桃、柳樹和胡楊腐爛病菌互相接種后發(fā)病，說(shuō)明核桃腐爛病與柳樹和胡楊腐爛病存在交互侵染。因此，在生產(chǎn)實(shí)際中防治腐爛病，一定注意對(duì)防護(hù)林的防治；在新建核桃園時(shí)，盡量避開(kāi)有胡楊和柳樹的防護(hù)林。