張祎，陳暢

(宜昌市第一人民醫(yī)院·三峽大學(xué)人民醫(yī)院，湖北宜昌443000)

我國是胃癌高發(fā)國家，每年新發(fā)病例占全世界40%以上[1]。根據(jù)組織病理學(xué)分類，可將胃癌分為腺癌、鱗癌、腺鱗癌等，其中腺癌約占95%[2]。目前，根治性手術(shù)仍是早期胃腺癌的主要治療手段。由于胃腺癌早期癥狀隱匿，大部分胃腺癌患者就診時已屬中晚期，錯過了最佳手術(shù)時機(jī)，即使可手術(shù)切除，短期也易出現(xiàn)復(fù)發(fā)。近年隨著分子生物醫(yī)學(xué)迅速發(fā)展，分子靶向治療成為中晚期惡性腫瘤的重要治療手段。但目前缺少針對胃腺癌的分子治療靶點。因此，探尋與胃腺癌發(fā)生、發(fā)展相關(guān)的分子機(jī)制，對其治療和預(yù)后具有重要意義。脯氨酸-谷氨酸-亮氨酸富集蛋白1(PELP1)基因定位于人染色體17p13.2，編碼蛋白由1 130個氨基酸殘基組成，相對分子質(zhì)量為160 kD，因其氨基酸鏈中40%以上序列為脯氨酸、谷氨酸或亮氨酸而得名[3,4]。PELP1又被稱為雌激素受體非基因組活性輔助調(diào)節(jié)因子，是一種新發(fā)現(xiàn)的甾體受體(SR)共調(diào)節(jié)分子，被認(rèn)為是雌激素受體α(ERα)的共調(diào)節(jié)分子。有研究發(fā)現(xiàn)，在ERα陰性的乳腺癌組織中PELP1高表達(dá)，其高表達(dá)可促進(jìn)腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移[3～5]。近年相繼在卵巢癌、結(jié)直腸癌、乳腺癌等組織中發(fā)現(xiàn)PELP1異常表達(dá)[6～10]。但鮮見胃腺癌組織PELP1表達(dá)的報道。本研究觀察了胃腺癌組織PELP1表達(dá)變化，并分析其表達(dá)變化與患者臨床病理特征的關(guān)系?，F(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2015年6月～2018年6月宜昌市第一人民醫(yī)院收治的初診胃腺癌患者80例。所有患者經(jīng)術(shù)后組織病理檢查明確診斷，且術(shù)前未行任何抗腫瘤治療。其中，男48例、女32例，年齡32～75歲(≤55歲41例、>55歲39例)；血清CEA水平0.14～413.52 μg/L(<5 μg/L 66例，≥5 μg/L 14例)；腫瘤最大徑0.8～7.5 cm(<5 cm 55例、≥5 cm 5例)；組織分化程度：高分化11例，中分化43例，低分化26例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者58例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者22例。本研究經(jīng)宜昌市第一人民醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)，患者或其家屬知情同意。

1.2 PELP1表達(dá)檢測 采用免疫組化法。取手術(shù)切除的胃腺癌組織及其配對的癌旁正常組織(距腫瘤組織邊緣>5 cm)，甲醛固定，常規(guī)脫水、透明，石蠟包埋，5 μm厚連續(xù)切片。切片經(jīng)脫蠟水化、抗原修復(fù)、封閉內(nèi)源性過氧化物酶后，分別加入PELP1多克隆抗體、通用型二抗孵育。DAB顯色，蘇木素復(fù)染，梯度乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封固，顯微鏡下觀察。以PBS代替一抗作為陰性對照，用已知陽性胃腺癌組織切片作為陽性對照。采用雙盲法由兩位病理科醫(yī)師獨(dú)立閱片。PELP1陽性染色定位于細(xì)胞核，呈棕黃色顆粒狀。每張切片隨機(jī)選取3個400倍視野，計數(shù)每視野陽性細(xì)胞數(shù)，計算陽性細(xì)胞比例，同時評價染色強(qiáng)度。陽性細(xì)胞比例評分：無陽性細(xì)胞為0分，陽性細(xì)胞比例≤33%為1分；陽性細(xì)胞比例>33%～66%為2分，陽性細(xì)胞比例>66%為3分。染色強(qiáng)度評分：無色為0分，淡黃色為1分，桔黃色為2分，棕黃色為3分。根據(jù)陽性細(xì)胞比例評分和染色強(qiáng)度評分綜合判定PELP1表達(dá)。二者乘積≤3為低表達(dá)、>3為高表達(dá)。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用GraphPad Prism8.0統(tǒng)計軟件。計數(shù)資料比較采用χ2檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 胃腺癌組織與癌旁正常組織PELP1表達(dá)比較 胃腺癌組織PELP1高表達(dá)37例(46.25%)、低表達(dá)43例(53.75%)，癌旁正常組織PELP1高表達(dá)6例(7.50%)、低表達(dá)74例(92.50%)。胃腺癌組織PELP1高表達(dá)率明顯高于癌旁正常組織(χ2=35.80，P<0.01)。

2.2 胃腺癌組織PELP1表達(dá)與患者臨床病理特征的關(guān)系 見表1。胃腺癌組織PELP1表達(dá)與患者血清CEA水平、腫瘤最大徑及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P均<0.05)，與患者性別、年齡、組織分化程度無關(guān)(P均>0.05)。

表1 胃腺癌組織PELP1表達(dá)與患者臨床病理特征的關(guān)系(例)

3 討論

胃腺癌是臨床常見的消化系統(tǒng)惡性腫瘤之一，其病因和發(fā)病機(jī)制尚不完全清楚。胃腺癌早期行根治性手術(shù)，患者預(yù)后較好，5年生存率90%以上。但由于胃腺癌早期癥狀不典型，易誤診或漏診，多數(shù)患者就診時已屬中晚期，錯過了最佳手術(shù)時機(jī)，即使勉強(qiáng)可以手術(shù)切除，術(shù)后也易出現(xiàn)復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，預(yù)后較差。近年隨著分子生物醫(yī)學(xué)迅速發(fā)展，分子靶向治療成為中晚期惡性腫瘤的重要治療手段。但目前缺少針對胃腺癌的分子治療靶點，可選用的靶向藥物有限[2]。因此，探討胃腺癌發(fā)病的分子機(jī)制，尋找新的治療靶點十分迫切。

PELP1最初被發(fā)現(xiàn)在ER陽性的乳腺上皮細(xì)胞中豐度較高，之后被證實是SR下游信號通路轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中的一個調(diào)節(jié)分子[11]。根據(jù)細(xì)胞類型和配體表達(dá)量差異，PELP1既能促進(jìn)SR下游信號通路轉(zhuǎn)導(dǎo)，又能抑制SR下游信號通路轉(zhuǎn)導(dǎo)。如在非小細(xì)胞肺癌A549細(xì)胞中內(nèi)源性糖皮質(zhì)激素受體表達(dá)量較高，PELP1可抑制糖皮質(zhì)激素受體介導(dǎo)的信號通路轉(zhuǎn)導(dǎo)；而在內(nèi)源性糖皮質(zhì)激素受體表達(dá)量較低的HEK293細(xì)胞中，PELP1可增強(qiáng)配體激活糖皮質(zhì)激素受體介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)[12]。PELP1可與多種SR的轉(zhuǎn)錄共激活分子結(jié)合，如CREB結(jié)合蛋白[13]；還可作為“中間人”，讓不能直接與SR結(jié)合的共調(diào)節(jié)因子與SR形成復(fù)合體，如PELP1可促進(jìn)雄激素受體和FHL家族蛋白2結(jié)合，形成轉(zhuǎn)錄復(fù)合體，調(diào)控下游基因表達(dá)[14]。PELP1主要表達(dá)于細(xì)胞核，亦可在細(xì)胞質(zhì)中表達(dá)。PELP1在細(xì)胞質(zhì)中表達(dá)時，可促進(jìn)ER與Src激酶結(jié)合，而PELP1突變則會破壞ER與Src結(jié)合，導(dǎo)致MAPK信號通路紊亂[15]。PELP1在細(xì)胞質(zhì)中過表達(dá)會造成MAPK和AKT信號通路非激素依賴性激活[14]。此外，PELP1還可募集具有組蛋白修飾作用的蛋白，使染色質(zhì)的性質(zhì)和結(jié)構(gòu)發(fā)生改變。如PELP1與組蛋白賴氨酸特異性脫甲基酶1(KDM1)或共激活因子相關(guān)精氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶1(CARM1)結(jié)合，介導(dǎo)KDM1和CARM1對基因啟動子區(qū)域組蛋白H3的表觀遺傳學(xué)修飾[16，17]。PELP1在信號轉(zhuǎn)導(dǎo)以及表觀遺傳修飾中的關(guān)鍵作用，賦予它可參與調(diào)控細(xì)胞增殖、凋亡、遷移等，使其成為一個關(guān)鍵的腫瘤相關(guān)分子。如：PELP1可通過誘導(dǎo)芳香酶合成，促進(jìn)雌激素生成，從而促進(jìn)ER依賴性的乳腺癌細(xì)胞增殖[18]；PELP1可介導(dǎo)視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤蛋白的Ser807和Ser811磷酸化，使后者激活，從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖[19]；PELP1可調(diào)控p53磷酸化，其缺失會造成p53信號通路失常，導(dǎo)致細(xì)胞凋亡功能失常[20]；PELP1還可調(diào)控miRNA表達(dá)，其中不乏與腫瘤細(xì)胞侵襲和遷移相關(guān)的miRNA，如miR-200、miR-141[21]。另外，PELP1還是一些腫瘤相關(guān)miRNA的下游靶基因，如miR-497。有研究報道，二甲雙胍可通過上調(diào)miR-497，降低PELP1表達(dá)，從而發(fā)揮抗腫瘤作用[22]。但目前鮮見胃腺癌組織PELP1表達(dá)的報道。

本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，胃腺癌組織PELP1高表達(dá)率明顯高于癌旁正常組織；胃腺癌組織PELP1表達(dá)與患者血清CEA水平、腫瘤最大徑及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，與患者性別、年齡、組織分化程度無關(guān)。提示PELP1高表達(dá)可能促進(jìn)胃腺癌進(jìn)展。

綜上所述，胃腺癌組織PELP1高表達(dá)，其表達(dá)變化與腫瘤進(jìn)展有關(guān)。PELP1有可能成為胃腺癌的分子治療靶點。