吳其國，胡葉青，李文艷

（1.安慶醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校藥學(xué)系，安徽安慶246052；2.華潤三九醫(yī)藥股份有限公司，廣東深圳518110）

黃精為百合科植物滇黃精（Polygonatum kingianum Coll.et Hemsl.）、黃精 （Polygonatum sibiricum Red.）或多花黃精（Polygonatum cyrtonema Hua）的干燥根莖［1］。安徽九華山地區(qū)的黃精品種為多花黃精，在九華山地區(qū)生長范圍較廣，陰濕山坡和溝谷處較常見，云南、貴州、浙江、山東也有此品種分布，但藥材質(zhì)量都不如九華山地區(qū)，為突出其地方特色，取名為九華黃精［2］。

隨著中藥材資源越來越匱乏，通過中藥粉碎技術(shù)，選擇合適的粉碎粒徑，使中藥有效成分充分溶出變得尤為重要。目前黃精的炮制方法常用的有清蒸和酒蒸兩種。

本文擬對九華黃精清蒸和酒蒸兩種炮制品的不同粒徑粉體進行初步的體外溶出特性考察，以期為清蒸和酒蒸九華黃精的有效利用提供支撐。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

儀器包括：1）HC-500YZ多功能粉碎機（永康市天祺盛世工貿(mào)有限公司）；2）ZRS-8GD智能溶出試驗儀（天津市天大天發(fā)科技有限公司）；3）ZNHW-500型電加熱套（上海越眾儀器有限公司）；4）SP-1920型紫外-可見分光光度儀（上海光譜儀器有限公司）；5）FA1204B型電子分析天平（上海越平科學(xué)儀器有限公司）。

1.2 試藥

試藥包括：1）九華黃精生藥材購于池州市大王洞中藥材種植專業(yè)合作社；2）蒽酮（分析純，國藥集團化學(xué)試劑有限公司，批號20170222）；3）無水乙醇（分析純，上海中泰化學(xué)試劑，批號20161108）；4）葡萄糖（分析純，天津市大茂化學(xué)試劑廠，批號20160909）；5）硫酸（分析純，國藥集團化學(xué)試劑有限公司，批號20170508）；6）黃酒（浙江塔牌紹興酒有限公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 清蒸和酒蒸九華黃精的制備

取九華黃精生藥材，除去雜質(zhì)，洗凈，蒸至透心，切厚片，干燥，即得清蒸九華黃精；取凈九華黃精，加黃酒（每100 kg九華黃精，用黃酒20 kg）拌勻、潤透，再于鍋內(nèi)蒸透，取出，稍晾，拌回蒸液，再涼至六成干，切厚片，干燥，即得酒蒸九華黃精。

2.2 清蒸和酒蒸九華黃精不同粒徑粉的制備

分別取一定量的干燥清蒸和酒蒸九華黃精炮制品，置于高速萬能粉碎機中，粉碎3～5 min，分級過篩，分別得到清蒸九華黃精不同粒徑粉：100目粉（過100目篩），200目粉（過200目篩），300目粉（過300目篩）；酒蒸九華黃精不同粒徑粉：100目粉（過100目篩），200目粉（過200目篩），300目粉（過300目篩）。

2.3 清蒸和酒蒸九華黃精總多糖含量測定

2.3.1 對照品溶液的制備

精密稱取干燥至恒重的無水葡萄糖對照品12 mg，加入蒸餾水制成每毫升含0.136 1 mg的葡萄糖溶液，作為對照品溶液。

2.3.2 供試品溶液的制備

取清蒸和酒蒸九華黃精粉末（過2號篩）各1 g，精密稱定，加入純化水100 mL，稱定重量，加熱回流1 h（保持微沸），放冷，用水補足減失的重量，濾過，精密量取續(xù)濾液5 mL，加入無水乙醇30 mL，靜置1 h，5 000 r/min離心15 min，沉淀加熱水溶解，定容至25 mL，作為供試品溶液，備用。

2.3.3 標準曲線的繪制

精密吸取無水葡萄糖對照品溶液0.4、0.6、0.8、1.0、1.2 mL，分別置于10 mL具塞試管中，各管加水稀釋至2 ml，精密加入硫酸-蒽酮溶液（精密稱取0.2 g蒽酮，加80%濃硫酸溶解搖勻，即得。現(xiàn)配現(xiàn)用）5 mL，靜置10 min，再于沸水浴反應(yīng)10 min，取出，置冰水浴中冷卻至室溫，以水2 mL為空白，照2015年版《中國藥典》（四部）通則0401紫外-可見分光光度法［3］，在582 nm處測定吸光度A，以吸光度為縱坐標，葡萄糖質(zhì)量為橫坐標，得線性回歸方程為

2.3.4 精密度試驗

精密吸取無水葡萄糖對照品溶液0.5 ml，共6份，分別置于10 mL具塞試管中，按2.3.3項下自“各管加水稀釋至2 mL”起開始操作，在582 nm處測定吸光度A，計算RSD=1.7%（n=6），結(jié)果表明儀器精密度良好。

2.3.5 重復(fù)性試驗

稱取清蒸九華黃精藥材粗粉6份（每份約1 g），精密稱定，按2.3.2項下制備供試品溶液，精密吸取供試品溶液2 mL分別置于10 mL具塞試管中，自“精密加入硫酸-蒽酮溶液”起開始操作，在582 nm處測定吸光度A，計算RSD=2.5%（n=6），結(jié)果表明該方法重復(fù)性良好。

2.3.6 穩(wěn)定性試驗

精密量取清蒸九華黃精供試品溶液2.0 mL，置于10 mL具塞試管中，按2.3.3項下自“精密加入硫酸-蒽酮溶液”起開始操作，室溫放置，分別在 0、30、60、90，120、150 min 測定其 582 nm 處吸光度 A，計算RSD=1.4%（n=6），結(jié)果表明供試品溶液在2.5 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.3.7 加樣回收率試驗

精密稱定已知總多糖含量的清蒸九華黃精藥材粗粉1 g，共6份，分別精密加入無水葡萄糖對照品50 mg，按2.3.2項下方法制備供試品溶液，精密吸取供試品溶液2 mL，置10 mL具塞試管中，按2.3.3項下“精密加入硫酸-蒽酮溶液”起開始操作，平均加樣回收率為98.62%，計算RSD=2.8%（n=6），結(jié)果表明回收率良好。

2.4 清蒸和酒蒸九華黃精粉的體外溶出度測定

2.4.1 溶出度樣品的制備

分別取不同粒徑的清蒸和酒蒸九華黃精粉約2 g，精密稱定，投入溶出儀中，按2015年版《中國藥典》（四部）通則0931溶出度和釋放度測定法（槳法）［3］進行測定，以已超聲脫氣的500 mL水為溶出介質(zhì)，轉(zhuǎn)速 100 r/min，溫度（37.0 ± 0.5）℃，分別于 5、10、15、30、45、60 min 取樣 10 mL，同時向溶出杯中補充相同溫度和體積的介質(zhì)，取出的樣品溶液于5 000 r/min離心10 min，精密量取離心后的上清液5 mL，加入無水乙醇30 mL，搖勻，靜置沉淀1 h，10 000 r/min離心8 min，傾去上清液，沉淀用少量熱水溶解，放冷，定容至10 mL，搖勻，作為樣品溶液，備用。

2.4.2 溶出度的測定

精密量取上述樣品溶液2 mL，置于10 mL具塞試管中，再按照2.3.3項條件項下自“精密加入硫酸-蒽酮溶液”起開始操作，在582 nm處測定吸光度A，每種粉末樣品平行測定3份，測得不同時間清蒸九華黃精100目粉、200目粉、300目粉和酒蒸九華黃精100目粉、200目粉、300目粉中總多糖溶出量，取平均值，計算累積溶出率。結(jié)果如圖1與2所示。

圖1 清蒸九華黃精不同粒徑粉的水介質(zhì)體外溶出曲線

圖2 酒蒸九華黃精不同粒徑粉的水介質(zhì)體外溶出曲線

3 討論與總結(jié)

由圖1可知，其不同粒徑粉的累積溶出率由大到小的順序分別為100目粉、200目粉、300目粉。由圖2可知，其不同粒徑粉的累積溶出率由大到小的順序分別為200目粉、300目粉、100目粉。同一種九華黃精粉的不同粒徑粉累積溶出率有較大差別，并不是粒徑最小的300目粉累積溶出率最高，很早就有研究認為藥材有效成分的溶出并不是隨著粒徑減小而無限增加［4］，而是存在一個臨界粒徑，不僅每味藥材的臨界粒徑不同，而且每種成分的臨界粒徑也存在差異［5］。

另外，黃精的炮制方法主要是清蒸和酒蒸兩種，本研究分別制備了清蒸九華黃精和酒蒸九華黃精，從其外觀形態(tài)來看，兩種炮制品的表面和外觀顏色、斷面形態(tài)和氣味均有顯著差別，這些物理特性的差別也有可能會影響九華黃精在水中的溶出特性。清蒸和酒蒸九華黃精的最大累積溶出率分別是100目粉和200目粉，炮制方法不同，會影響中藥材產(chǎn)品的質(zhì)量，清蒸和酒蒸兩種炮制方法對黃精多糖的含量影響是不一樣的［6］，炮制的各種因素會影響其含量變化，甚至?xí)绊懫淙艹鎏匦灾档眠M一步研究。

總之，中藥材的粉碎并不是越細越好，而應(yīng)控制在一定的范圍內(nèi)，尤其是微粉操作，這可能是因為一方面超微粉體比表面積大、表面能增加，使顆粒處于非穩(wěn)定狀態(tài)，因而有強烈的相互吸引而達到穩(wěn)定的趨向，這種傾向使粒子產(chǎn)生團聚而影響其溶出效果［7］；另一方面粉末在溶出過程中存在溶出與吸附平衡，微粉溶出雖然稍多，但藥材超微粉碎粒度過小，藥材表面積急劇增大而使其表面能增加，藥物粉體對多糖這類極性成分的吸附力增大，從而使其不易溶出［8-9］。而且高粉碎需要的能耗高、成本高，所以在醫(yī)藥工業(yè)生產(chǎn)中，偏高粉碎度的要求尤其要慎重選擇［10］。