易松 潘燕 陳左平

336000江西省宜春市人民醫(yī)院

臨床中，部分心臟病及卒中患者在服用阿司匹林后仍然會(huì)發(fā)生缺血性血管事件，即阿司匹林抵抗。值得注意的是，臨床對(duì)阿司匹林抵抗的原因及其作用機(jī)制尚無(wú)明確結(jié)論，有研究顯示，其發(fā)生與藥物劑量不足、藥物相互作用、患者年齡、吸煙以及血小板GP基因多態(tài)性等情況有關(guān)[1]。2018年1-11月收治老年冠心病患者200例，對(duì)血小板膜GPⅢa受體基因多態(tài)性與阿司匹林抵抗的相關(guān)性進(jìn)行研究。

資料與方法

2018年1-11月收治老年冠心病患者200 例，均符合缺血性心臟病穩(wěn)定性心絞痛疾病診斷標(biāo)準(zhǔn)，臨床給予100 mg/d 阿司匹林口服治療，需連續(xù)服用7 d。其中男103 例，女97 例；年齡62～84 歲，平均(69.8±4.6)歲；合并糖尿病79 例，原發(fā)性高血壓73 例，脂代謝異常57 例。

排除標(biāo)準(zhǔn)：存在家族或個(gè)人出血史情況患者；入院前1 周進(jìn)行重大手術(shù)治療患者；存在骨髓增生異常綜合征以及異性蛋白血癥患者；近期使用鹽酸噻氯匹定及雙嘧達(dá)莫或者是其他非甾體類(lèi)抗炎藥物、注射肝素或低分子肝素、華法林等藥物患者[2]。

方法：臨床采用二磷酸腺苷與花生四烯酸作誘導(dǎo)劑對(duì)其血小板聚集功能進(jìn)行檢測(cè)，采用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性核酸內(nèi)切法(PCR-RFLP)對(duì)血小板膜GPⅢa 受體基因多態(tài)性進(jìn)行檢測(cè)分析。檢測(cè)使用儀器包括FT-630G 型微機(jī)多探頭γ 計(jì)數(shù)器和SYSMEX KX-21N 血細(xì)胞分析儀、LG-KOALA 智能血液凝聚儀等，具體檢測(cè)分析方法：對(duì)患者血小板聚集率測(cè)定，通過(guò)抽取患者空腹靜脈血3 mL，采用3.2%枸櫞酸鈉抗凝保存后，以二磷酸腺苷以及花生四烯酸作為誘導(dǎo)劑進(jìn)行血小板聚集率檢測(cè)，并對(duì)其最大血小板聚集率進(jìn)行記錄，以對(duì)患者阿司匹林抵抗情況進(jìn)行判斷。其中，將患者口服100 mg/d 阿司匹林、連續(xù)服用7 d 后以二磷酸腺苷和花生四烯酸作為誘導(dǎo)劑進(jìn)行檢測(cè)，其平均血小板聚集率為≥70%和≥20%的情況，判斷阿司匹林抵抗；將滿足其中任意一種條件的情況，判斷為阿司匹林半抵抗；其余情況為阿司匹林敏感[3]。對(duì)患者血小板膜GPⅢa受體基因多態(tài)性檢測(cè)，采用酚-三氯甲烷核酸抽提法進(jìn)行患者外周血白細(xì)胞基因組DNA提取后，采用PCR-RFLP 進(jìn)行基因分型判斷。其中，反應(yīng)體系終體積50 μL，包含引物各0.3 μmol/L，氯 化 鎂 溶 液2.0 mmol/L，dNTP Mixture 0.2 mmol/L，Taq DNA 聚合酶2.0 U，基因組DNA模板0.1～1.0 μg，將PCR 反應(yīng)的各種溶液成分在冰上進(jìn)行配置，然后在94 ℃溫度條件下進(jìn)行預(yù)變性約5 min，按照溫度94 ℃、時(shí)間60 s和溫度57 ℃、時(shí)間60 s，溫度72 ℃、時(shí)間60 s 的循環(huán)參數(shù)條件共進(jìn)行35 個(gè)循環(huán)反應(yīng)，以完成PCR 擴(kuò)增反應(yīng)。對(duì)PCR 反應(yīng)和酶切后的產(chǎn)物，采用2.0%的瓊脂糖凝膠進(jìn)行電泳30 min 后，使用溴化乙啶染色處理，然后在紫外燈下進(jìn)行觀察以對(duì)其基因型進(jìn)行判定。

統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS 21.0 進(jìn)行數(shù)據(jù)分析處理，其中，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，以%表示；計(jì)量資料采用t 檢驗(yàn)，以(±s)表示。P＜0.05 表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

200 例患者中，阿司匹林抵抗率23.0%(46例)，半抵抗率17.0%(34例)，對(duì)阿司匹林敏感率60.0%(120 例)；此外，存在阿司匹林抵抗患者的GPⅢa 受體等位基因出現(xiàn)頻率12.5%，與阿司匹林敏感患者相比其GPⅢa 受體等位基因出現(xiàn)頻率明顯較高(P＜0.05)。阿司匹林抵抗與敏感患者的血小板聚集率和基因型頻率分布結(jié)果，見(jiàn)表1和表2。

討 論

臨床中，阿司匹林是心臟病與卒中患者預(yù)防應(yīng)用最為廣泛的藥物，且臨床研究證實(shí)，阿司匹林在降低高危型心源性猝死、腦卒中、心肌梗死等疾病患者病癥危險(xiǎn)性方面具有十分顯著的作用效果[4]。但是，值得注意的是，阿司匹林在對(duì)心臟病及卒中患者治療中，還存在部分患者服用阿司匹林后其再發(fā)血栓，血小板活性仍然比較高，導(dǎo)致患者再發(fā)血管事件的危險(xiǎn)性較大，也就是說(shuō)服用阿司匹林后患者仍然會(huì)發(fā)生缺血性血管事件，這種情況被稱(chēng)為阿司匹林抵抗。對(duì)阿司匹林抵抗的原因及其作用機(jī)制尚無(wú)明確結(jié)論，有研究顯示，其發(fā)生與藥物劑量不足、藥物相互作用、患者年齡、吸煙以及血小板GP 基因多態(tài)性等情況有關(guān)[5]。

表1 阿司匹林抵抗與敏感患者的血小板聚集率檢測(cè)結(jié)果比較(±s，%)

表1 阿司匹林抵抗與敏感患者的血小板聚集率檢測(cè)結(jié)果比較(±s，%)

組別 二磷酸腺苷誘導(dǎo) 花生四烯酸誘導(dǎo)阿司匹林抵抗(n=80) 74.1±21.4 32.4±22.5阿司匹林敏感(n=120) 45.2±15.6 17.8±5.6 t 11.287 7.156 P＜0.05 ＜0.05

表2 阿司匹林抵抗與敏感患者基因型頻率分布比較(n)

上文中，對(duì)收治的連續(xù)服用阿司匹林治療老年冠心病患者200 例的血小板聚集率以及GPⅢa PLA 基因多態(tài)性分布進(jìn)行檢測(cè)分析顯示，阿司匹林抵抗率23.0%(46 例)，半 抵 抗 率17.0%(34 例)，阿司匹林敏感率60.0%(120 例)；此外，阿司匹林抵抗與敏感患者的GPⅢa PLA 基因多態(tài)性分布中等位基因頻率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，阿司匹林抵抗患者的GPⅢa 受體等位基因出現(xiàn)頻率12.5%，明顯高于阿司匹林敏感患者。由此可見(jiàn)，血小板膜GPⅢa 受體基因多態(tài)性與冠心病患者阿司匹林抵抗之間存在一定關(guān)聯(lián)。

總之，血小板膜GPⅢa 受體基因多態(tài)性與冠心病患者阿司匹林抵抗之間存在一定關(guān)聯(lián)，可以作為冠心病患者阿司匹林抵抗發(fā)生的一種基因標(biāo)志進(jìn)行研究應(yīng)用。