摘要：目的：探究不同濃度枸杞多糖（Lycium Barbarum Polysaccharides，LBP）對腎上皮細胞間質(zhì)腎纖維化時TGF-β1表達的影響，探討與分析其對腎纖維化的保護機制。方法：通過單側(cè)輸尿管結(jié)扎手術(shù)（UUO）對40只12周齡雄性大鼠建立腎間質(zhì)纖維化模型，將其隨機分為LBP高劑量（800mg/kg）組、中劑量組（650mg/kg）、低劑量組（450mg/kg）和實驗組，每組各10只。實驗組采用LBP（空白組用生理鹽水）連續(xù)灌胃三周。取左腎切片應(yīng)用HE染色法和Masson三色染色觀察組織學(xué)變化，取血清用免疫組化法檢測各組TGF-β1分布水平。結(jié)果：1.實驗組腎間質(zhì)中炎性浸潤及腎小管損傷明顯，造模成功。2.顯示TGF-β1在各腎組織中與對照組相比均下降，以實驗組中高劑量組明顯。結(jié)論：LBP能夠降低大鼠血清中TGF-β1的水平，且一定范圍內(nèi)較高者濃度表現(xiàn)明顯，故推測LPB可能由此抑制腎間質(zhì)纖維化進展，對腎纖維化起一定保護作用。

關(guān)鍵詞：枸杞多糖;腎間質(zhì)纖維化;TGF-β1

枸杞的主要有效成分為枸杞多糖，其主要功效為滋補肝腎、益精明日^[1]，在臨床中主要用于腎虛所致的衰老、生殖功能障礙以及機體免疫力低下^[2]。研究證表明LBP還可通過改善腎微循環(huán)延緩腎臟衰老改善腎結(jié)構(gòu)，能顯著改善衰老腎臟血液循環(huán)和腎組織形態(tài)，對腎臟具有保護作用^[3]。枸杞多糖在臨床中預(yù)防和治療慢性腎臟病有重大意義。

近年來慢性腎臟病的發(fā)病率越來越高，普遍認為腎間質(zhì)細胞的纖維化造成的腎臟實質(zhì)性損傷是導(dǎo)致慢性腎臟病的常見治病因素。Lan等^[4]表明TGF-β1是導(dǎo)致進展性腎小管間質(zhì)纖維化的關(guān)鍵通路。有研究表明，TGF-β1可誘導(dǎo)肌成纖維細胞激活并導(dǎo)致細胞外基質(zhì)生成，進而導(dǎo)致腎纖維化和腎小管萎縮^[5]。同時TGF-β1蛋白可以直接激活一些間質(zhì)細胞相關(guān)基因如波形蛋白、纖連蛋白和膠原蛋白的表達^[6～7]。TGF-β1、smad蛋白介導(dǎo)腎上皮間質(zhì)細胞的發(fā)生和發(fā)展，調(diào)控腎間質(zhì)纖維化的進程^[8]，導(dǎo)致腎纖維化引起慢性腎疾病。

1材料與方法

1.1動物處理及標本制作

選取SPF12周雄性SD大鼠40只，隨機分為一個對照組和三個實驗組，每組各10只;實驗組高劑量組每天灌胃枸杞多糖800mg/kg/d、中劑量組每天灌胃枸杞多糖650mg/kg/d、低劑量組每天灌胃枸杞多糖450mg/kg/d，對照組灌胃0.9%的生理鹽水，維持21d，收集各組大鼠血清取及對各組大鼠左側(cè)腎臟切片。

1.2 HE染色和Masson三色染色形態(tài)學(xué)觀察

取大鼠左側(cè)腎臟進行石蠟標的本制作：腎臟組織經(jīng)4%多聚甲醛固定后沖洗，再常規(guī)梯度酒精脫水、二甲苯透明、浸蠟、石蠟包埋。

1.3血清中TGF-β1的測定

用TGF-β1檢測試劑盒用于定量檢測血清中TGF-β1的含量，取血清離心20分鐘（2000-3000轉(zhuǎn)/分），收集上清液，每只大鼠血清做5張涂片，在40 倍物鏡下隨機取10 個不同視野，用Motic Images Advanced 3.2 圖像分析系統(tǒng)，測定TGF-β1蛋白陽性反應(yīng)物相對含量的平均光密度值。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理

計量資料用均數(shù)±標準差（x ± s）表示，用SPSS17.0 統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析，計量資料進行正態(tài)性檢驗后進行方差分析，Plt;0.05 認為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1組織學(xué)觀察

對照組、實驗低劑量組和中劑量組腎小管明顯擴張，部分萎縮，間質(zhì)基質(zhì)沉淀，實驗高劑量組腎小管稍有擴張，部分萎縮，間質(zhì)基質(zhì)可見少許沉淀。

2.2血清中TGF-β1測定結(jié)果

高中低劑量組中大鼠血清TGF-β1在對照組中均呈陽性反應(yīng)，尤其以高劑量組為強陽性反應(yīng)（Plt;0.05），將其進行平均光密度統(tǒng)計分析，具體見表1。

表1大鼠血清TGF-β1陽性反應(yīng)的平均光密度（x ± s）

*高劑量組與對照組中其他細胞比較，Plt;0.05

3討論

目前隨著慢性腎病的發(fā)病率越來越高，研究者對腎纖維化的保護處于熱門討論話題。腎纖維化的發(fā)病機制復(fù)雜，與多種治病因素有關(guān)，作為腎小管纖維化的關(guān)鍵通道TGF-β1，其能誘導(dǎo)細胞因子促進細胞外基質(zhì)的大量堆積形成腎間質(zhì)纖維化，最終引起慢性腎衰竭^[9-10]。本次研究通過單側(cè)輸尿管結(jié)扎建立腎纖維化模型，用HE染色法和Masson三色染色常規(guī)觀察LBP干預(yù)后腎臟組織的變化，通過對各組檢測TGF-β1的表達進行檢測分析.每組均相應(yīng)的有所下降，尤其以高濃度組為較明顯;而從組織學(xué)觀察來看，高濃度組的腎纖維化相比其他組有明顯減輕。故此可推測，LBP在干預(yù)腎纖維化對其起到保護作用時，很可能是通過對TGF-β1的表達從來對其起到保護作用。

綜上所述，LBP能減輕UUO模型對大鼠腎間質(zhì)纖維化的影響，其中LBP高劑量的作用效果優(yōu)于LBP低、中劑量組，且在TGF-β1的陽性表現(xiàn)來看，高濃度組的陽性反應(yīng)較為強，LBP可調(diào)控TGF-β1蛋白在上皮細胞間質(zhì)轉(zhuǎn)化中的作用，緩解腎間質(zhì)纖維化的進程，從而為臨床預(yù)防和治療慢性腎臟病提供新的科學(xué)參考依據(jù)。

參考文獻：

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