陳香，許新微，張朝陽，趙明1，*

（1.江蘇大學(xué)藥學(xué)院，江蘇 鎮(zhèn)江212013；2.鎮(zhèn)江市食品藥品監(jiān)督檢驗中心，江蘇 鎮(zhèn)江212050；3.江蘇大學(xué)醫(yī)學(xué)院，江蘇 鎮(zhèn)江212013；4.太倉市中醫(yī)醫(yī)院檢驗科，江蘇 蘇州215400）

炎癥性腸病（inflammatory bowel disease，IBD）是一組由環(huán)境、遺傳、感染以及免疫等因素相互作用導(dǎo)致的腸道黏膜免疫系統(tǒng)異常反應(yīng)的疾病，主要包括潰瘍性結(jié)腸炎（uclerative colitis，UC）和克羅恩病。IBD的病變多發(fā)生于直腸和乙狀結(jié)腸，并可遷延至結(jié)腸，進而導(dǎo)致整個結(jié)腸病變，臨床癥狀主要以腹瀉、黏液膿血便、腹痛及里急后重為主，以結(jié)腸黏膜慢性炎癥和潰瘍形成為病理特點［1］。近年來，因發(fā)病率不斷升高、難以徹底治愈且長期遷延不愈易誘發(fā)腫瘤等特點，IBD已成為消化病研究的熱點和難點之一。目前臨床上治療IBD的主要方法有傳統(tǒng)藥物及免疫抑制劑治療、生物制劑治療、微生態(tài)制劑治療、抗生素治療以及手術(shù)治療等。但是，上述藥物均具有一定的不足之處。尋找高效、安全的治療IBD的新型藥物已成為一項迫切任務(wù)。白藜蘆醇是一種具有抗炎、抗氧化作用的天然二苯乙烯類活性物質(zhì)［2］。近年來的研究顯示，白藜蘆醇具有治療IBD的作用［3］。本文就白藜蘆醇對IBD治療作用的研究進展進行綜述，并展望白藜蘆醇治療IBD的發(fā)展前景。

1 白藜蘆醇的理化性質(zhì)

白藜蘆醇又稱芪三酚，化學(xué)名稱是3，5，4’-三羥基苯二烯，分子式是C14H12O3，結(jié)構(gòu)式見圖1，相對分子量為228.24，呈無味、灰白色或白色粉末，較難溶于水，易溶于有機溶劑。在低溫、避光條件下白藜蘆醇較為穩(wěn)定，堿性環(huán)境中不穩(wěn)定［4］。白藜蘆醇以順式-／反式游離態(tài)和順式-／反式糖苷結(jié)合態(tài)等形式存在，是一種具有天然活性的多酚類單體化合物。

圖1 白藜蘆醇結(jié)構(gòu)式

2 白藜蘆醇對免疫細胞的調(diào)節(jié)作用

2.1 白藜蘆醇對T細胞的免疫調(diào)節(jié)作用

Gao等［5］的實驗顯示，25μmol／L白藜蘆醇對經(jīng)有絲分裂原／抗原激活的T細胞增殖的抑制率達90%。Falchetti等［6］的研究顯示，白藜蘆醇對T細胞的免疫調(diào)節(jié)作用具有劑量依賴性，低濃度（0.625～0.25μg／mL）的白藜蘆醇可刺激CD4+／CD8+T細胞中細胞因子IL-2、IL-4以及核轉(zhuǎn)錄因子（INFγ）的表達和分泌，高濃度（10μg／mL）時則能抑制CD4+／CD8+T細胞分泌細胞因子；同樣，低濃度的白藜蘆醇能夠激活細胞毒性T細胞的細胞毒活性，而高濃度則具有抑制作用。此外，白藜蘆醇對CD8+T細胞分泌細胞因子的抑制效果比對CD4+T細胞的抑制更好。Radkar等［7］的研究顯示，當(dāng)白藜蘆醇濃度≥25μmol／L時會激發(fā)細胞毒性T細胞的特異性殺傷潛能。Feng等［8］研究顯示，低劑量白藜蘆醇能增強T細胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)。Sharma等［9］也報道了白藜蘆醇能夠抑制T細胞活性的實驗結(jié)果。

2.2 白藜蘆醇對外周血單個核細胞（PBMC）的免疫調(diào)節(jié)作用

Seyyedebrahimi等［10］每天使用800 mg白藜蘆醇對48例2型糖尿病患者連續(xù)8周進行口服治療，結(jié)果顯示，白藜蘆醇在患者PBMC中具有抗氧化劑的作用。Boscolo等［11］的研究顯示，高濃度白藜蘆醇能顯著抑制植物血凝素刺激引起的PBMC增殖，并且PBMC分泌的細胞因子INF-γ和TNF-α量亦受到顯著抑制。但是，當(dāng)白藜蘆醇濃度低至10～100 nmol／L時，對細胞增殖的抑制作用消失。Capeleto等［12］研究顯示，白藜蘆醇通過Ala16Val-SOD2 SNP途徑活化人PBMC。但也有研究顯示白藜蘆醇可促進某些炎性因子的表達。Gualdoni等［13］研究顯示，白藜蘆醇可顯著提高PBMC表達細胞因子TNF-α。

2.3 白藜蘆醇對B細胞的免疫調(diào)節(jié)作用

Jhou等［14］的研究顯示，白藜蘆醇通過上調(diào)B細胞中FcγRIIB的表達從而選擇性地降低B細胞數(shù)量，緩解狼瘡性腎炎。Zunino等［15］使用不同濃度白藜蘆醇處理經(jīng)有絲分裂原作用的B細胞，結(jié)果顯示低濃度白藜蘆醇（2和5 nmol／L）能促進B細胞增殖，而高濃度白藜蘆醇（10 nmol／L）抑制B細胞的增殖，但是B細胞中Bcl-2和caspase-3的表達水平隨白藜蘆醇濃度的增加而升高，呈一定的劑量依賴性。Wang等［16］從系統(tǒng)性紅斑狼瘡模型建立第2天起給予建模小鼠白藜蘆醇口服，連續(xù)7個月，結(jié)果顯示白藜蘆醇對B細胞的增殖以及抗體的產(chǎn)生等均具有抑制作用。此外，Sharma等［9］也報道了白藜蘆醇具有抑制B細胞活性的作用。

2.4 白藜蘆醇對巨噬細胞的免疫調(diào)節(jié)作用

Ma等［17］使用白藜蘆醇作用于經(jīng)脂多糖刺激的RAW264.7小鼠巨噬細胞，結(jié)果顯示白藜蘆醇能下調(diào)誘導(dǎo)型一氧化氮合酶（iNOS）和IL-6的表達，而且，以劑量依賴的形式抑制NO的產(chǎn)生和IL-6的分泌。白藜蘆醇也抑制HMGB1從胞核向胞質(zhì)轉(zhuǎn)運以及核轉(zhuǎn)錄因子κB（NF-κB）p65從胞質(zhì)入核，抑制了IκBα的磷酸化。白藜蘆醇對巨噬細胞的上述作用均是通過抑制STAT-1和STAT-3的磷酸化實現(xiàn)的［17］。Wang等［18］的研究顯示，白藜蘆醇能降低巨噬細胞TNF-α的表達水平以及主要的前炎癥因子的分泌，增加M2型巨噬細胞相關(guān)基因信使RNA的表達。Yang等［19］的研究顯示，白藜蘆醇可抑制肺泡巨噬細胞的凋亡并降低其細胞因子的表達。

2.5 白藜蘆醇對樹突狀細胞（DC）的免疫調(diào)節(jié)作用

Kim等［20］的研究顯示，白藜蘆醇顯著抑制骨髓來源的DC細胞表達共刺激分子CD80和CD86、MHC-I和MHC-II。白藜蘆醇也明顯抑制了脂多糖刺激的DC細胞產(chǎn)生胞內(nèi)IL-12 p40／p70和分泌IL-12 p70的能力。白藜蘆醇處理的DC細胞通過甘露糖受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用高效捕獲抗原。此外，白藜蘆醇可抑制DC細胞對單純異基因T細胞增殖的刺激作用，并在反應(yīng)性T細胞中誘導(dǎo)低水平的IL-2分泌。Buttari等［21］的研究顯示，白藜蘆醇可阻止DC細胞在糖基化過程中成熟。Svajger等［22］的研究顯示，白藜蘆醇誘導(dǎo)DC細胞介導(dǎo)的免疫耐受，尤其是在DC細胞分化過程中使用白藜蘆醇處理效果更好。白藜蘆醇可使DC細胞的共刺激分子CD40、CD80和CD86表達下調(diào)，誘導(dǎo)ILT3和ILT4的表達，但不影響HLA-G的表達。經(jīng)白藜蘆醇處理的DC細胞活化后失去產(chǎn)生IL-12p70的能力，但是產(chǎn)生IL-10的能力增強。

此外，白藜蘆醇還對NK 細胞具有調(diào)節(jié)作用［23］。上述的國內(nèi)外研究闡明了白藜蘆醇對免疫細胞的調(diào)節(jié)作用以及可能機制。下面將進一步綜述白藜蘆醇對由免疫細胞參與炎癥反應(yīng)的IBD的作用以及可能的機制。

3 白藜蘆醇對IBD的作用及其機制

3.1 白藜蘆醇對IBD的作用

近年來的研究顯示，白藜蘆醇能夠有效緩解不同動物IBD模型的癥狀。Abdallah等［24］使用白藜蘆醇（2和10 mg／kg體重）連續(xù)7 d通過口服處理三硝基苯磺酸（trinitrobenzene sulfonic acid，TNBS）誘導(dǎo)的IBD Wistar大鼠，結(jié)果顯示白藜蘆醇處理組大鼠較陽性組大鼠的潰瘍區(qū)域面積明顯減小，結(jié)腸質(zhì)量指數(shù)下降，結(jié)腸組織髓過氧化物酶（myeloperoxidase，MPO）活性下降，GSH、丙二醛和NO水平降低，結(jié)腸組織和血清中ICAM-1和VCAM-1的表達水平降低。Yildiz等［25］將白藜蘆醇（10 mg／kg體重）通過腹腔注射的給藥方式處理TNBS誘導(dǎo)的IBD Wistar大鼠，結(jié)果顯示，與陽性組大鼠相比，白藜蘆醇處理組大鼠的結(jié)腸鏡檢評分下降，結(jié)腸丙二醛水平降低，但MPO、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）和過氧化氫酶的活性無明顯變化，結(jié)腸GPX活性升高。Arslan等［26］采用甲氨蝶呤誘導(dǎo)Wistar大鼠構(gòu)建IBD模型，將白藜蘆醇（25 mg／kg體重）通過口服給藥方式連續(xù)30 d處理模型組大鼠，結(jié)果顯示，白藜蘆醇處理組大鼠十二指腸和空腸丙二醛、GSH和8-OH／Gua水平比陽性組大鼠顯著降低，而且MPO mRNA表達水平也明顯下降。Abdin等［27］將白藜蘆醇（10 mg／kg體重）通過口服給藥的方式連續(xù)14 d處理惡唑酮誘導(dǎo)的Wistar大鼠構(gòu)建UC模型，結(jié)果顯示，白藜蘆醇處理組大鼠的DAI指數(shù)下降，結(jié)腸SphK1表達水平降低，結(jié)腸MPO活性以及組織病理學(xué)損傷分數(shù)下降。Larrosa等［28］使用葡萄糖硫酸鈉（dextran sulfate sodium，DSS）誘導(dǎo)Fischer F344大鼠構(gòu)建克羅恩病模型，將劑量為1 mg／kg體重的白藜蘆醇以口服方式連續(xù)處理模型組大鼠25 d，結(jié)果顯示，與陽性組大鼠相比，經(jīng)過白藜蘆醇處理的大鼠結(jié)腸長度縮短，結(jié)腸組織病理學(xué)損傷分數(shù)減小，結(jié)腸中COX-2、前列腺素E2（prostaglandin E2，PGE2）以及NO的蛋白表達降低。Rahal等［29］采用肽聚糖-多糖誘導(dǎo)Lewis大鼠構(gòu)建克羅恩病模型，將40或100 mg／kg體重劑量的白藜蘆醇以灌服方式連續(xù)處理大鼠28 d，結(jié)果顯示白藜蘆醇處理的大鼠盲腸組織IL-1β的mRNA表達水平比陽性組大鼠明顯降低，而盲腸中IL-6、TNF-α和TGF-β1的表達水平顯著升高。

Sharma等［30］采用DSS誘導(dǎo)C57BL／6小鼠構(gòu)建IBD模型，將100 mg／kg體重的白藜蘆醇以隔天灌服的方式連續(xù)10 d處理IBD小鼠，結(jié)果顯示，與陽性組相比，經(jīng)白藜蘆醇處理的小鼠結(jié)腸更長，結(jié)腸中TNF-α轉(zhuǎn)化酶（TNF-α converting enzyme，TACE）mRNA表達水平下降，TIMP3和沉默信息調(diào)節(jié)因子2相關(guān)酶1（Silent mating type information regulation-1，SIRT1）mRNA表達水平升高。Yao等［31］采用DSS誘導(dǎo)BALB／c小鼠，構(gòu)建IBD小鼠模型，將30或60 mg／kg體重的白藜蘆醇以口服的方式連續(xù)14 d處理IBD小鼠，結(jié)果顯示，與陽性組小鼠相比，經(jīng)白藜蘆醇處理的小鼠結(jié)腸組織學(xué)疾病評分下降，結(jié)腸丙二醛水平和MPO、SOD和GPX活性降低，IL-8、TNF-α和IFN-γ的mRNA及蛋白表達水平下降。Youn等［32］以口服的方式連續(xù)7 d將10 mg／kg體重的白藜蘆醇處理經(jīng)DSS誘導(dǎo)的IBD ICR模型小鼠，結(jié)果顯示，經(jīng)白藜蘆醇處理的小鼠結(jié)直腸長度伸長，結(jié)腸中iNOS含量下降，NF-κB和IκB表達水平降低，而ERK和STAT3的磷酸化水平下降。Altamemi等［33］以口服的方式連續(xù)5周將100 mg／kg體重的白藜蘆醇處理經(jīng)DSS誘導(dǎo)的IBD ApcMin／+模型小鼠，結(jié)果顯示白藜蘆醇處理的小鼠結(jié)腸息肉大小和數(shù)量下降，BrdU和PCNA陽性結(jié)腸細胞數(shù)減少；結(jié)腸COX-2和IL-6的mRNA表達降低，TNF-α表達水平降低，T細胞、B細胞、MDSC以及NK細胞數(shù)量下降，腸道黏膜中microRNA-455和microRNA-101b的表達升高。

目前有關(guān)白藜蘆醇對IBD治療作用的臨床試驗較少。最近，一項隨機、雙盲、安慰劑對照臨床試驗評估了白藜蘆醇對炎癥生物標(biāo)志物和UC患者生活質(zhì)量的影響。在該研究中，患者每天服用白藜蘆醇0.5 g，連續(xù)6周后，血漿C-反應(yīng)蛋白、TNF-α和NF-κB p65水平降低?；颊呱钯|(zhì)量得到改善，臨床結(jié)腸炎活動指數(shù)顯著降低［34］。此外，在輕至中度UC患者體內(nèi)，SOD活性和總抗氧化能力提高，但服用白藜蘆醇的患者丙二醛水平降低［35］。

3.2 白藜蘆醇對IBD的作用機制

3.2.1 白藜蘆醇抗炎作用的機制 IBD患者腸道組織中均存在炎癥反應(yīng)。參與炎癥反應(yīng)的免疫細胞會分泌多種促炎因子，破壞腸道組織的正常結(jié)構(gòu)，影響腸道功能。NF-κB是能與多種免疫球蛋白輕鏈基因啟動子κB序列特異性結(jié)合并促進其轉(zhuǎn)錄的一類蛋白質(zhì)。NF-κB可調(diào)節(jié)多種促炎因子的表達，進而影響炎癥的發(fā)生與發(fā)展［36］。因此，通過下調(diào)NF-κB的活性抑制炎癥反應(yīng)也就成為治療IBD的重要手段。Youn等［32］的實驗顯示，在DSS誘導(dǎo)的小鼠IBD模型中，口服白藜蘆醇能抑制NF-κB的活化，減少NF-κB下游促炎因子的產(chǎn)生，進而減輕炎癥對腸道組織的損傷。體外細胞實驗也證實了白藜蘆醇可以劑量依賴的方式降低NF-κB活性，進而降低COX-2基因表達水平［37］。白藜蘆醇能通過抑制NF-κB磷酸化及其降解的途徑來降低炎性因子TNF-α、IL-6以及COX-2等的表達［38］。SIRT1可與NF-κB蛋白質(zhì)分子中的RelA／p65亞基結(jié)合，導(dǎo)致SIRT1在Lys310位點去乙酰化進而抑制NF-κB的轉(zhuǎn)錄活性［39］。這也說明NF-κB的活性受SIRT1去乙?；饔玫恼{(diào)控。那么白藜蘆醇可否通過誘導(dǎo)SIRT1的活化并上調(diào)其活性、下調(diào)NF-κB活性這一途徑發(fā)揮抗炎作用？Singh等［40］的研究顯示，白藜蘆醇可通過上調(diào)結(jié)腸免疫細胞中作為NF-κB激活和炎癥的逆向調(diào)節(jié)器的SIRT1預(yù)防結(jié)腸炎。Dong等［41］的研究顯示，白藜蘆醇以iNOS-NO依賴方式通過SIRT1-NF-κB途徑減輕腸道亞急性缺血再灌注（ischemia-reperfusion，I／R）損傷。

以L-精氨酸為底物，NOS可通過3種形式合成NO。在3種同工酶亞型中，iNOS在炎癥反應(yīng)的調(diào)控中起著重要作用。越來越多的證據(jù)表明，白藜蘆醇能夠通過NO-依賴性的方式緩解由I／R導(dǎo)致的腸系膜動脈等組織損傷［41］。那么白藜蘆醇是否可通過調(diào)控NO的表達實現(xiàn)其在IBD中的抗炎作用呢？1999年Tsai等［42］報道，在經(jīng)脂多糖激活的RAW 264.7細胞中，白藜蘆醇可能通過下調(diào)NF-κB的結(jié)合活性來抑制炎癥中增強的iNOS表達，進而顯著抑制NO的產(chǎn)生。此后，相繼有不同的研究支持上述結(jié)果［43-45］。Youn等［32］以口服白藜蘆醇的給藥方式處理經(jīng)DSS誘導(dǎo)的IBD模型，實驗結(jié)果顯示白藜蘆醇可下調(diào)iNOS的表達水平并減弱NF-κB、STAT3以及ERK的活化，減輕由DSS引起的結(jié)腸組織損傷。Serra等［46］采用白藜蘆醇體外作用于腸上皮來源的HT-29細胞系，結(jié)果顯示白藜蘆醇可顯著降低經(jīng)細胞因子誘導(dǎo)產(chǎn)生的NO、PGE2、iNOS和COX-2的表達以及活性氧的形成，從而緩解炎癥引起的腸道組織損傷。

3.2.2 白藜蘆醇的抗氧化作用 血液中丙二醛含量反映組織細胞受自由基攻擊的嚴重程度，而SOD活力則反映機體清除氧自由基的能力。近年研究顯示，白藜蘆醇能通過清除活性氧簇進而發(fā)揮抗氧化作用，減輕腸道組織損傷。Jang等［47］的研究顯示，白藜蘆醇在小鼠巨噬細胞系Raw 264.7細胞、人單核細胞和中性粒細胞中是一種有效的活性氧生成抑制劑。Yildiz等［48］的研究顯示，白藜蘆醇可減輕I／R誘導(dǎo)的大鼠小腸氧化損傷。Ozkan等［49］的研究也顯示，白藜蘆醇能通過降低丙二醛、NO以及MPO水平，恢復(fù)SOD活性，減輕由I／R引起的腸損傷。Jha等［50］采用靜脈注射20 mg／kg或口服50 mg／kg白藜蘆醇的方式處理腸I／R模型大鼠，結(jié)果顯示白藜蘆醇均能有效緩解機體SOD水平的下降以及丙二醛水平的升高。Dong等［41］等也報道了白藜蘆醇可明顯提高大鼠腸I／R后黏膜上皮細胞內(nèi)細胞色素的氧化酶活力，降低氧自由基的產(chǎn)生，提高SOD水平及活性，減少血液中丙二醛，明顯減輕由I／R導(dǎo)致的腸道黏膜組織損傷。近年來的臨床試驗也證實了白藜蘆醇這一作用。2015年，Samsami-Kor等［34］對每日服用1粒白藜蘆醇膠囊且連續(xù)服用6周的患者進行研究，結(jié)果顯示白藜蘆醇可降低丙二醛和MPO的表達，進而抑制組織的氧化損傷和凋亡，起到減輕炎癥的作用。

3.2.3 白藜蘆醇抑制腸道纖維化的作用 當(dāng)外界抗原等異物引起腸道炎癥反應(yīng)，腸道組織被持續(xù)破壞，腸道間質(zhì)細胞活化并過度增殖，過多的間質(zhì)細胞外基質(zhì)在腸壁沉積，導(dǎo)致腸壁發(fā)生纖維化［51］。而在臨床上，腸壁纖維化、腸腔狹窄為克羅恩病常見并發(fā)癥。到目前為止，有關(guān)白藜蘆醇抑制腸道纖維化作用的報道較少。Rahal等［52］的研究顯示，白藜蘆醇能顯著減少肽聚糖-多糖構(gòu)建的Lewis大鼠克羅恩病模型炎性細胞因子和TGF-β1的含量，降低Ⅰ型、Ⅲ型前膠原和IGF-1 mRNA的表達，抑制組織纖維化，說明白藜蘆醇具有抑制纖維化的作用。Garcia等［53］也報道了類似的研究結(jié)果。Li等［54］的研究也顯示，白藜蘆醇可能通過激活SIRT1或抑制IGF-Ⅰ受體途徑抑制膠原I的合成，從而抑制IGF-1誘導(dǎo)的腸道纖維化。最新的研究結(jié)果顯示，SIRT1通過減少炎癥和纖維化的進程來預(yù)防肺纖維化［55］。白藜蘆醇在IBD中的作用除了抗炎、抗氧化以及抑制纖維化之外，還有抑制腸道上皮細胞凋亡等作用［34］。

綜上所述，同類型實驗動物模型以及臨床研究均顯示了白藜蘆醇主要是通過抗炎、抗氧化、抑制腸道纖維化及抑制腸道細胞凋亡等方式緩解IBD。但是具體作用機制尚不清晰。全面深入研究白藜蘆醇治療IBD的作用及其機制，將為其在IBD臨床治療中提供理論基礎(chǔ)和實驗依據(jù)，并為開發(fā)與白藜蘆醇相關(guān)的新型藥物提供思路。