崔彭華，李志艷，張玉娟，劉莉

（承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院1.婦科，2.檢驗(yàn)科，河北 承德067000）

卵巢癌死亡率在婦科惡性腫瘤中高居首位［1］；晚期卵巢癌5年生存率低于30%，而早期高于75%，所以卵巢癌的早期診斷是提高5年生存率的關(guān)鍵［2］。由于當(dāng)前還沒(méi)有成熟的診斷措施，大部分卵巢癌發(fā)現(xiàn)時(shí)已處于晚期，治療效果差［3］。研究發(fā)現(xiàn)，大部分腫瘤的發(fā)生和發(fā)展與機(jī)體的免疫功能狀態(tài)高度相關(guān)［4］。有學(xué)者發(fā)現(xiàn)，較多腫瘤中存在Th1細(xì)胞亞群向Th2細(xì)胞亞群偏移的現(xiàn)象［5］。Treg細(xì)胞是具有免疫調(diào)節(jié)作用的抑制性細(xì)胞亞群，對(duì)腫瘤免疫應(yīng)答起到抑制作用，能夠介導(dǎo)腫瘤的免疫逃逸［6］。本研究主要探討卵巢癌患者外周血中Treg細(xì)胞占T細(xì)胞的百分比以及Th1細(xì)胞和Th2細(xì)胞因子的表達(dá)水平，分析其與臨床及病理特征的關(guān)系。

1 對(duì)象與方法

1.1 一般資料

選擇2016年9月至2017年9月我院婦科收治的經(jīng)腹腔鏡卵巢癌根治切除手術(shù)治療并經(jīng)病理確診的卵巢癌患者60例，設(shè)為惡性組，平均年齡（54.75±5.23）歲。FICO分期：Ⅰ期12例，Ⅱ期10例，Ⅲ期33例，Ⅳ期5例。另選擇同期醫(yī)院收治的卵巢良性疾患60例設(shè)為良性組，年齡為（52.98±5.35）歲；其中，子宮肌瘤35例，卵巢囊腫16例，子宮內(nèi)膜異位癥4例，良性畸胎瘤5例。另選取同期健康體檢婦女60例作為對(duì)照組，平均年齡為（53.48±5.73）歲。3組一般資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，具有可比性。該研究符合倫理學(xué)的相關(guān)規(guī)定，同時(shí)在釆集標(biāo)本前獲得受試者的知情同意。

患者納入標(biāo)準(zhǔn)：年齡20～75歲；經(jīng)過(guò)病理學(xué)檢查初次確診為卵巢癌或卵巢良性腫瘤；資料完整；簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：接受過(guò)卵巢癌放療、化療或外科手術(shù)治療；卵巢癌為非原發(fā)瘤或合并其他腫瘤；合并感染；合并免疫系統(tǒng)疾??；合并嚴(yán)重肝、腎疾病。

1.2 樣本收集及檢測(cè)

采集受試者清晨空腹外周靜脈血3 mL，置于肝素鈉抗凝管中。采用三色法測(cè)定Th1、Th2及Treg細(xì)胞數(shù)，具體方法步驟參照王麗華等［7］的測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)：取全血，4℃行6 000 r／min離心10 min，取血清；采用人Th1／Th2／Th17細(xì)胞因子試劑盒（購(gòu)自上海研卉生物科技有限公司）測(cè)定IL-2、INF-γ、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、IL-4及IL-10，具體實(shí)驗(yàn)步驟參照試劑盒說(shuō)明書。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 3組外周血Th1和Th2類細(xì)胞因子含量和Treg細(xì)胞比例比較

對(duì)照組和良性組IL-2、IL-4、IL-10、INF-γ、TNF-α以及Treg細(xì)胞占外周血CD4+T細(xì)胞比例間的差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＞0.05）。惡性組IL-2、INFγ、TNF-α水平明顯低于對(duì)照組和良性組，而IL-4、IL-10以及Treg細(xì)胞比例均明顯高于對(duì)照組和良性組（P均＜0.05）。見(jiàn)表1。

表1 各組外周血Th1和Th2類細(xì)胞因子含量和Treg細(xì)胞比較 n＝60，±s

表1 各組外周血Th1和Th2類細(xì)胞因子含量和Treg細(xì)胞比較 n＝60，±s

a：P＜0.05，與對(duì)照組比較；b：P＜0.05，與良性組比較

組別 IL-2（pg／mL） IL-4（pg／mL） IL-10（pg／mL） INF-γ（pg／mL） TNF-α（pg／mL） Treg細(xì)胞（%）對(duì)照組 2.46±0.76 6.42±2.36 3.16±1.35 19.31±9.98 3.40±1.48 10.48±2.64良性組 2.53±0.86 6.29±1.27 3.25±1.20 19.21±10.38 3.21±0.59 11.97±3.12惡性組 1.13±0.76a，b 8.93±3.13a，b 7.55±2.30a，b 14.21±6.66a，b 2.26±1.38a，b 20.88±5.66a，b F值133.66 38.74 158.81 5.30 26.77 157.51 P值0.00 0.00 0.00 0.04 0.00 0.00

2.2 不同臨床分期Th1、Th2細(xì)胞因子和Treg細(xì)胞的變化

如表2所示，隨著惡性卵巢癌臨床分期提高，INF-γ、TNF-α細(xì)胞因子水平逐漸降低（P＜0.05）；IL-2水平呈下降趨勢(shì)，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；IL-4（除Ⅱ期外）和IL-10表達(dá)水平以及Treg細(xì)胞所占的比例逐漸升高（P＜0.05）。

表2 不同臨床分期Th1、Th2細(xì)胞因子含量和Treg細(xì)胞比例比較 ±s

表2 不同臨床分期Th1、Th2細(xì)胞因子含量和Treg細(xì)胞比例比較 ±s

a：P＜0.05，與Ⅰ期比較；b：P＜0.05，與Ⅱ期比較；c：P＜0.05，與Ⅲ期比較

臨床分期 n Treg細(xì)胞（%） IL-2（pg／mL） IL-4（pg／mL） IL-10（pg／mL） INF-γ（pg／mL） TNF-α（pg／mL）Ⅰ期 12 11.84±2.86 1.16±0.76 7.81±3.41 3.36±3.11 18.86±7.69 2.90±1.18Ⅱ期 10 16.67±6.35a 1.08±0.72 7.98±2.73 5.78±2.19a 16.86±7.73a 2.79±0.52Ⅲ期 33 20.63±2.97a，b 0.97±0.58 8.73±2.50a，b 7.77±2.46a，b 14.54±1.68a，b 2.42±1.09a，bⅣ期 5 22.13±4.46a，b，c 0.96±0.48 9.56±1.58a，b，c 8.22±2.17a，b，c 12.64±3.45a，b，c 2.03±0.17a，b，c F值37.29 0.33 3.81 11.68 4.97 4.17 P值0.00 0.81 0.02 0.00 0.004 0.01

2.3 不同病理特征下Th1、Th2細(xì)胞因子濃度和Treg細(xì)胞比例的變化

如表3所示，與黏液性和其他組織學(xué)分型相比，漿液性卵巢癌IL-4、IL-10及TNF-α水平明顯升高（P均＜0.05）；黏液性與其他組織學(xué)分型上述指標(biāo)間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＞0.05）；不同組織學(xué)分型卵巢癌的Treg細(xì)胞比例差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

表3 不同組織學(xué)分型Th1、Th2細(xì)胞因子含量和Treg細(xì)胞比例比較 ±s

表3 不同組織學(xué)分型Th1、Th2細(xì)胞因子含量和Treg細(xì)胞比例比較 ±s

a：P＜0.05，與漿液性比較

組織學(xué)分型 n Treg細(xì)胞（%）IL-2（pg／mL）IL-4（pg／mL）IL-10（pg／mL）INF-γ（pg／mL）TNF-α（pg／mL）漿液性 37 20.87±5.02 1.15±0.58 12.18±1.38 10.37±2.98 14.80±2.69 4.18±1.53黏液性 18 20.66±5.35 1.19±0.73 7.08±0.73a 5.78±1.19a 14.36±5.76 1.89±0.33a其他 5 20.23±4.13 1.07±0.20 6.74±1.12a 5.41±0.79a 14.17±3.87 1.71±0.53a F值2.07 0.743 42.25 56.34 0.42 25.68 P值0.22 0.737 0.00 0.00 0.71 0.00

3 討論

Treg細(xì)胞在腫瘤免疫應(yīng)答中發(fā)揮重要作用，正常生理狀態(tài)下維持機(jī)體自身的穩(wěn)定，病理狀態(tài)下可促進(jìn)腫瘤發(fā)生發(fā)展。Th1、Th2細(xì)胞因分泌的主要細(xì)胞因子不同，在腫瘤免疫中發(fā)揮著不同作用［2，8-9］。本研究結(jié)果顯示，卵巢癌患者Treg細(xì)胞占CD4+T淋巴細(xì)胞百分比明顯高于健康者和卵巢良性疾患者，Th1和Th2細(xì)胞因子均有異常表達(dá)；此外，Treg細(xì)胞比例、Th1和Th2細(xì)胞因子濃度與臨床分期、組織學(xué)分型有關(guān)。Th1細(xì)胞所誘導(dǎo)的免疫應(yīng)答能夠抑制惡性腫瘤的增殖，且其可通過(guò)分泌IL-2、IFN-γ、TNF-α等因子，介導(dǎo)細(xì)胞毒性T細(xì)胞，同時(shí)可激活巨噬細(xì)胞，影響B(tài)細(xì)胞功能［10］。若腫瘤患者體內(nèi)Th1細(xì)胞少于Th2細(xì)胞，機(jī)體細(xì)胞免疫功能就會(huì)受到影響，從而促進(jìn)腫瘤的發(fā)生發(fā)展。Th2細(xì)胞主要分泌IL-4、IL-10等因子，可一定程度抑制機(jī)體的抗腫瘤免疫能力［11］。本研究結(jié)果顯示，對(duì)照組和良性組Th1、Th2細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子水平無(wú)明顯差異，但惡性組Th1細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子IL-2、INF-γ、TNFα水平較對(duì)照組和良性組明顯降低，而Th2細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子IL-4、IL-10較對(duì)照組和良性明顯增高；由此表明，惡性卵巢癌的發(fā)生與Th1和Th2細(xì)胞因子的分泌量相關(guān)，與以往研究一致［12］。此外，臨床分期越高，IL-2、INF-γ、TNF-α水平降低，IL-4和IL-10含量升高，且漿液卵巢癌上皮腫瘤TNF-α、IL-4和IL-10含量也升高；符婕等［13］研究發(fā)現(xiàn)，漿液性腺癌患者IL-10及TNF-α表達(dá)水明顯高于其他組織分型患者；本研究結(jié)果與其相似。

研究顯示，在喉癌、膀胱癌、肺癌等腫瘤患者的外周血中，存在CD4+T細(xì)胞各亞群失衡現(xiàn)象［10，14］。CD4+T淋巴細(xì)胞包括Th1、Th2及Treg細(xì)胞等，這些細(xì)胞亞群有可塑性，能夠利用細(xì)胞因子之間的相互影響、制約來(lái)維持動(dòng)態(tài)平衡［15］。Treg細(xì)胞是具有免疫調(diào)節(jié)功能的抑制性細(xì)胞亞群，占CD4+T淋巴細(xì)胞5%～15%，在天然免疫和獲得性免疫反應(yīng)中都起到重要的調(diào)節(jié)效應(yīng)。本研究發(fā)現(xiàn)，對(duì)照組和良性組間Treg細(xì)胞占比差異不明顯，而惡性組明顯高于對(duì)照組和良性組；對(duì)照組和良性組各指標(biāo)水平比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。Treg細(xì)胞在抗腫瘤免疫應(yīng)答中發(fā)揮抑制效應(yīng)，介導(dǎo)腫瘤免疫逃逸［16］。以上結(jié)果表明，Treg細(xì)胞數(shù)量上升和Th1／Th2細(xì)胞因子失衡與卵巢癌的發(fā)生密切相關(guān)，并與以往研究一致［17］。另外，不同臨床分期Treg細(xì)胞比例不同，其可能的原因是臨床分期越高，腫瘤細(xì)胞增殖越快，Treg細(xì)胞的比例也會(huì)越高。

綜上所述，本研究提示Th1、Th2細(xì)胞因子和Treg細(xì)胞在卵巢癌的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮重要作用，可應(yīng)用于卵巢癌的早期診斷及病情監(jiān)測(cè)。Treg細(xì)胞與Th1、Th2細(xì)胞因子之間如何相互協(xié)調(diào)，進(jìn)而影響卵巢癌的發(fā)展有待于后續(xù)進(jìn)一步研究。