陳小華，李偉

宜賓市第二人民醫(yī)院病理科，四川宜賓644000

目前，肺癌是全球腫瘤致死的首要原因，發(fā)病率和病死率均較高，是威脅人類健康的重要疾病，已成為全球的公共健康問題。肺癌的種類繁多，包括小細(xì)胞肺癌、肺腺癌、肺鱗癌等多種病理類型，其中，非小細(xì)胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）的發(fā)病率約占肺癌發(fā)病總數(shù)的80%，是肺癌的主要病理類型[1]。隨著醫(yī)學(xué)技術(shù)的飛速發(fā)展，雖然以手術(shù)為主的綜合治療取得了很好的療效，但是，NSCLC患者的5年生存率仍不足20%，處于較低水平[2]。因此，如何有效地預(yù)測NSCLC患者的生存情況一直是臨床工作關(guān)注的重點之一。CAPZ是一種肌動蛋白結(jié)合蛋白，可結(jié)合于肌動蛋白絲的正極，與肌動蛋白絲的動態(tài)裝配和細(xì)胞運動狀態(tài)有關(guān)。CAPZ由α和β兩個亞基組成，CAPZA1是CAPZ的α1亞基[3]。有研究顯示，CAPZA1在肝癌、胃癌、食管癌等多種類型腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程中發(fā)揮著重要的作用，且腫瘤病理分級與患者的預(yù)后密切相關(guān)[3-5]，但是，目前仍缺乏關(guān)于CAPZA1在NSCLC中的預(yù)測作用的相關(guān)研究。因此，本研究探討了CAPZA1在NSCLC的表達(dá)情況及其對NSCLC患者預(yù)后的預(yù)測作用，旨在為臨床治療NSCLC提供參考，現(xiàn)報道如下。

1 對象與方法

1.1 研究對象

選取2013年1月至2014年1月于宜賓市第二人民醫(yī)院接受手術(shù)治療的NSCLC患者。納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)細(xì)胞學(xué)或組織病理學(xué)確診為NSCLC[6-7]；②有可供檢測的腫瘤組織標(biāo)本；③臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：①既往接受過放療、化療和生物細(xì)胞免疫治療；②存在意識或精神障礙；③合并心、肝、腎等器官功能不全；④合并血液系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)等其他系統(tǒng)疾病。根據(jù)納入和排除標(biāo)準(zhǔn)，本研究共納入52例NSCLC患者，其中，男37例，女15例；年齡46～75歲，平均年齡（63.1±11.4）歲；腫瘤直徑（0.8～11.8）cm，平均腫瘤直徑（6.3±2.9）cm；TNM分期：Ⅰ期8例，Ⅱ期14例，Ⅲ期18例，Ⅳ期12例；發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移34例，未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移18例；發(fā)生脈管侵犯21例，未發(fā)生脈管侵犯31例。收集52例NSCLC患者的NSCLC組織標(biāo)本及其癌旁正常組織（距離腫瘤組織2 cm以上）標(biāo)本41例。

1.2 免疫組織化學(xué)染色方法

所有病理標(biāo)本均于術(shù)中取材，標(biāo)本獲得后立即置于4%中性甲醛液中固定，經(jīng)石蠟包埋，蠟塊切片后，篩選出腫瘤細(xì)胞成分＞80%的切片進(jìn)行檢測。環(huán)保脫蠟液（購于中國博士得生物科技有限公司）脫蠟，高溫修復(fù)抗原，3%H2O2處理10 min，10%山羊血清室溫封閉1 h；Ki-67抗體（購于美國Proteintech公司）、兔CAPZA1多克隆抗體（購于美國Proteintech公司）4℃孵育過夜。采用抗鼠/兔通用型免疫組織化學(xué)檢測試劑盒（購于美國Proteintech公司）檢測Ki-67、CAPZA1抗體的結(jié)合情況并顯色，蘇木素復(fù)染2 min后進(jìn)行脫水處理，中性樹脂封片。Ki-67染色結(jié)果由兩位病理科醫(yī)師根據(jù)NSCLC陽性細(xì)胞所占百分比進(jìn)行判定：＜50%判定為Ki-67指數(shù)低，≥50%判定為Ki-67指數(shù)高；Ki-67指數(shù)越高代表腫瘤細(xì)胞增殖越活躍。CAPZA1染色結(jié)果由兩位病理科醫(yī)師根據(jù)NSCLC陽性細(xì)胞所占百分比進(jìn)行判定：1%～24%為弱陽性（+），25%～49%為陽性（++），50%～74%為中等陽性（+++），75%～100%為強(qiáng)陽性（+++++）；將“+”的免疫組織化學(xué)結(jié)果定義為CAPZA1低表達(dá)，將“++～+++++”的免疫組織化學(xué)結(jié)果定義為CAPZA1高表達(dá)。

1.3 觀察指標(biāo)及隨訪

觀察CAPZA1在NSCLC組織和癌旁正常組織中的表達(dá)情況，分析CAPZA1表達(dá)情況與NSCLC患者臨床特征的關(guān)系。術(shù)后均對患者進(jìn)行了隨訪，隨訪方式為門診配合電話隨訪，隨訪時間為1～48個月，以死亡、腫瘤復(fù)發(fā)為隨訪終點。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 17.0軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析。計數(shù)資料以例數(shù)和率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗或秩和檢驗。采用Kaplan-Meier法繪制CAPZA1高、低表達(dá)患者的生存曲線，采用Log-rank法比較CAPZA1高、低表達(dá)患者的生存情況。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同組織中CAPZA 1表達(dá)情況的比較

52例NSCLC患者的NSCLC組織中，CAPZA1高表達(dá)者20例（38.5%），低表達(dá)者32例（61.5%）；41例癌旁正常組織中，CAPZA1高表達(dá)者27例（65.9%），低表達(dá)者14例（34.1%）。在NSCLC組織中，CAPZA1低表達(dá)的比例明顯高于癌旁正常組織，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=6.881，P＜0.01）。

2.2 不同臨床特征NSCLC患者CAPZA 1表達(dá)情況的比較

不同年齡、性別、吸煙史、腫瘤直徑、病理類型NSCLC患者NSCLC組織中CAPZA1表達(dá)情況比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。不同TNM分期、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、脈管侵犯情況、Ki-67指數(shù)的NSCLC患者NSCLC組織中CAPZA1的表達(dá)情況比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。（表1）

2.3 CAPZA 1表達(dá)情況與NSCLC患者預(yù)后的關(guān)系

表1 不同臨床特征NSCLC患者NSCLC組織中CAPZA 1的表達(dá)情況

CAPZA1低表達(dá)患者的中位生存時間為22個月（95%CI：10.183～33.817），CAPZA1高表達(dá)患者的中位生存時間為31個月（95%CI：22.806～39.194）。Log-rank檢驗結(jié)果顯示，CAPZA1高表達(dá)NSCLC患者的生存情況優(yōu)于CAPZA1低表達(dá)NSCLC患者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=3.978，P＜0.05）。（圖1）

3 討論

圖1 CAPZA 1高表達(dá)（n=20）和低表達(dá)（n=32）NSCLC患者的生存曲線

近年來，與NSCLC細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移有關(guān)的蛋白逐漸被發(fā)現(xiàn)，其對預(yù)測預(yù)后和評估腫瘤病理分級的重要意義逐漸被認(rèn)可，因此，與NSCLC病理分級和預(yù)后預(yù)測有關(guān)的蛋白是近年來NSCLC研究領(lǐng)域的熱點[1-2]。研究表明，CAPZ是肌動蛋白結(jié)合蛋白，由α和β兩個亞基組成，最初是從棘阿米巴蟲和牛腦組織中分離得到。既往對CAPZ的研究主要集中在肌動蛋白絲與心肌肥厚的關(guān)系方面，認(rèn)為CAPZ與心肌肥厚有關(guān)[3]。近年來，CAPZ在腫瘤中的作用逐漸受到學(xué)者的重視。研究表明，CAPZ可作為肝細(xì)胞癌和食管鱗癌的診斷標(biāo)志物[4-5]。本研究結(jié)果顯示，在NSCLC組織中，CAPZA1低表達(dá)的比例明顯高于癌旁正常組織（P＜0.01），表明在NSCLC組織中，CAPZA1的表達(dá)水平較低。

NSCLC的TNM分期和分化程度與其惡性程度和疾病的進(jìn)展密切相關(guān)，對于預(yù)測NSCLC的預(yù)后具有重要的價值，同時能夠為治療方案的選擇提供參考[6-7]。本研究表明，不同TNM分期、腫瘤分化程度NSCLC患者NSCLC組織中CAPZA1的表達(dá)情況比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），提示CAPZA1可能與NSCLC的惡性程度及相關(guān)生物學(xué)行為有關(guān)。本研究證實，CAPZA1低表達(dá)的NSCLC患者更有可能發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與脈管侵犯，推測其原因可能是CAPZA1參與了NSCLC的惡性轉(zhuǎn)化和侵襲過程。另外，在Ki-67指數(shù)高的NSCLC患者中，CAPZA1低表達(dá)的比例大于Ki-67指數(shù)低的NSCLC患者（P＜0.05），提示CAPZA1可能對NSCLC細(xì)胞的增殖具有影響。但是，不同腫瘤直徑NSCLC患者的CAPZA1表達(dá)情況比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），這可能是由于影響腫瘤直徑的因素較多，而不是僅僅與腫瘤細(xì)胞的增殖能力有關(guān)。因此，CAPZA1對NSCLC細(xì)胞增殖的影響仍有待進(jìn)一步探討。由此可以推測，CAPZA1表達(dá)水平可能對判斷NSCLC的分化程度、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、脈管侵犯、Ki-67指數(shù)等具有一定的參考價值。但是，目前CAPZA1參與影響NSCLC病理特征的具體機(jī)制尚不明確。既往在關(guān)于肝癌的研究中發(fā)現(xiàn)，CAPZA1可通過調(diào)控細(xì)胞骨架蛋白的表達(dá)調(diào)控肝癌細(xì)胞的上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化（epithelial-mesenchymal transition，EMT），進(jìn)而影響肝癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲[3,8]。但是，CAPZA1在NSCLC中的作用的相關(guān)研究仍較缺乏，CAPZA1是否通過相同的機(jī)制調(diào)控NSCLC的發(fā)生、發(fā)展仍有待進(jìn)一步深入探討。另外，本研究發(fā)現(xiàn)，CAPZA1高表達(dá)NSCLC患者的生存情況優(yōu)于CAPZA1低表達(dá)NSCLC患者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），表明CAPZA1的表達(dá)與患者的預(yù)后有關(guān)。其可能的機(jī)制是CAPZA1參與調(diào)控NSCLC細(xì)胞的分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、脈管侵犯和Ki-67指數(shù)，這亦提示，CAPZA1可以作為臨床預(yù)測NSCLC患者預(yù)后的重要指標(biāo)。

綜上所述，在NSCLC組織中，CAPZA1的表達(dá)水平較低，且其表達(dá)可能與NSCLC的分化程度、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、脈管侵犯和Ki-67指數(shù)有關(guān)，參與NSCLC的發(fā)生、發(fā)展，并通過生存曲線推測其對NSCLC診治及預(yù)后評估具有一定的參考價值。