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        結(jié)直腸腺癌、腺瘤組織及正常組織中黑色素瘤缺乏因子2表達差異的研究

        2019-04-23 01:31:22陳名明漆家康李佶松
        實用醫(yī)院臨床雜志 2019年2期
        關(guān)鍵詞:腺瘤腺癌免疫組化

        陳名明,漆家康,羅 斌,李佶松,王 康,

        (1.西南醫(yī)科大學(xué),四川 瀘州 646000;2.四川醫(yī)學(xué)科學(xué)院·四川省人民醫(yī)院普外科,四川 成都 610072)

        編碼黑色素瘤缺乏因子2(Absent in melanoma2,AIM2)的基因最初是在人類黑色素瘤細胞中發(fā)現(xiàn)[1],AIM2作為一種內(nèi)源性免疫受體,研究發(fā)現(xiàn)AIM2在結(jié)腸癌[1~3]、前列腺癌[4]中表達降低,而在鼻咽癌[5,6]、口腔鱗狀細胞癌[7]和肺腺癌[8]中表達增加。AIM2在一系列腫瘤組織中的差異表達表明它可能在不同類型的癌癥中具有獨特的作用。AIM2在結(jié)直腸癌中可發(fā)揮抑制腫瘤發(fā)生發(fā)展的作用[2,3]。已經(jīng)在結(jié)直腸癌患者的腫瘤組織中觀察到AIM2的表達減少和頻移的微衛(wèi)星不穩(wěn)定性[9]。與那些AIM2表達水平較高的大腸癌患者相比,AIM2表達水平降低的大腸癌患者的預(yù)后較差[9]。繼往兩項研究證明AIM2獨立于炎癥小體來預(yù)防結(jié)直腸癌[2,3]。這兩項研究都發(fā)現(xiàn)Aim2-/-小鼠在給予氧化偶氮甲烷(azoxymethane,AOM)和葡萄糖硫酸鈉(dextran sodium sulfate,DSS)后會出現(xiàn)嚴重的結(jié)腸炎、息肉和更高的腫瘤負荷[2,3]。

        結(jié)直腸腺瘤是臨床上常見的良性腫瘤,據(jù)報道有超過95%的結(jié)直腸癌是通過腺瘤-癌轉(zhuǎn)變而來[11]。最新專家共識已經(jīng)將結(jié)直腸腺瘤定義為癌前病變[12]。目前對于AIM2基因在結(jié)直腸腺瘤的研究很少,而結(jié)直腸正常組織-腺瘤-癌轉(zhuǎn)變過程的具體機理仍不明確。本研究通過檢測AIM2在結(jié)直腸癌患者的正常組織、癌組織、腺瘤組織及單純結(jié)直腸腺瘤患者的腺瘤組織中的表達情況,探究AIM2是否是結(jié)直腸腺瘤的發(fā)生以及發(fā)展為結(jié)直腸癌的抑制因子。

        1 資料與方法

        1.1一般資料納入2016年11月至2017年9月四川省人民醫(yī)院收治的52例結(jié)直腸腺癌同時合并腺瘤的患者,獲取手術(shù)切除標本中的癌組織、腺瘤組織及癌旁正常組織標本各52份,納入2016~2018年78例結(jié)直腸腺瘤患者,獲取手術(shù)或內(nèi)鏡切除的腺瘤標本78例。

        1.2方法將獲取組織的標本石蠟塊烘烤后通過二甲苯中脫蠟,再將載玻片依次放置于不同濃度梯度的酒精里水化。然后放置于含有檸檬酸鈉抗原修復(fù)液的壓力鍋中修復(fù)抗原。冷卻后將玻片放置于3%過氧化氫溶液中,然后放置于蘇木素復(fù)染液中進行復(fù)染,復(fù)染后滴加第一抗體(AIM2∶抗體稀釋液=1∶1200),放置于4 ℃的恒溫箱中過夜。之后滴加EnVision二抗后將切片放置于37 ℃的恒溫箱中約30 min。滴入二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色劑5~10 min后蒸餾水充分沖洗。將玻片按照酒精濃度梯度依次放入酒精瓶中脫水。取出后用風(fēng)干玻片,中性樹脂封片膠封片后顯微鏡下觀察。

        1.3判讀標準通過放大10×40倍的電子顯微鏡下隨機取5個視野,每個視野將染色分為4個等級并分別計分(0分=無染色,1分=弱染色,2分=適度染色,3分=強染色),此外將每個視野的陽性細胞百分比分為5類(0分為<5%,1分為5~25%,2分為25%~50%,3分為50%~75%,4分為75%~100%),然后將兩項得分相乘得出最終染色強度得分。0分=陰性(-),1~4分=低表達(+),5~8分=中表達(++),9~12分=高表達(+++)。

        1.4統(tǒng)計學(xué)方法采用SPSS 17.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行數(shù)據(jù)處理。本研究等級資料的兩個樣本(或多個樣本)比較運用秩和檢驗(染色結(jié)果用0=“-”,1=“+”,2=“++”,3=“+++”進行編號后計算),相關(guān)性分析運用Spearman秩相關(guān)分析法,采用雙側(cè)檢驗,α=0.05,P< 0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。三組組織進行兩兩比較,為控制多重比較會增大犯Ⅰ型錯誤概率采用Bonferroni法調(diào)整α水準,調(diào)整后α’=0.05/3=0.017,P< 0.017視為有統(tǒng)計學(xué)意義。

        2 結(jié)果

        2.1AIM2在四種組織中表達情況AIM2主要在結(jié)直腸黏膜上皮細胞的胞質(zhì)中表達,特異性免疫組化染色后呈淡黃色、棕黃色、棕褐色。如圖1。

        圖1 幾種不同組織中AIM2的表達情況 a:結(jié)直腸癌患者的正常組織中AIM2高表達(×400倍);b:單純腺瘤組織中AIM2低表達(×400倍);c:結(jié)直腸癌患者的癌組織中AIM2無表達(×400倍)

        2.2四種組織AIM2表達情況的比較結(jié)直腸癌患者的癌組織、腺瘤組織、癌旁正常組織及單純結(jié)直腸腺瘤患者腺瘤組織的AIM2免疫組化染色評分比較,見表1。

        表1 四組組織樣本中黑色素瘤缺乏因子2(AIM2)免疫組化染色結(jié)果 (n)

        2.3四種組織中AIM2免疫組化染色具體比較四種組織中AIM2免疫組化染色評分比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(Z=26.048,P< 0.01)。免疫組化結(jié)果提示AIM2的表達,結(jié)直腸癌患者的正常組織>結(jié)直腸腺瘤患者的腺瘤組織>結(jié)直腸癌患者的腺瘤組織>結(jié)直腸癌患者的癌旁組織。

        3 討論

        本研究通過對結(jié)直腸癌患者的正常組織、癌組織、腺瘤組織及單純結(jié)直腸腺瘤患者的腺瘤組織中AIM2基因的表達進行研究,發(fā)現(xiàn)AIM2在正常組織中表達水平最高,癌組織中表達水平最低,腺瘤組織中表達水平介于兩者之間,和繼往AIM2在結(jié)直腸癌組織中的表達水平明顯低于癌旁正常組織的研究一致[13]。值得注意的是,由于樣本量有限,單純腺瘤組織與結(jié)直腸癌患者的腺瘤組織中AIM2表達水平雖無統(tǒng)計學(xué)差異,但前者AIM2表達豐度仍有高于后者的趨勢。大量研究發(fā)現(xiàn)AIM2基因可抑制結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展[2,3],但在結(jié)直腸腺瘤中研究很少,本研究提示AIM2基因還可能抑制結(jié)直腸癌的癌前病變,即腺瘤的發(fā)生及其向腺癌的發(fā)展,個中機制尚不清楚。研究發(fā)現(xiàn)多種慢性炎癥,包括感染性和非感染性(或特發(fā)性)炎癥都可參與結(jié)直腸腫瘤的發(fā)生[15]。腺瘤性結(jié)腸息肉病(adenomatous polyposis coli,APC)基因發(fā)生突變可伴隨結(jié)直腸粘膜細胞的極性和細胞間的緊密連接丟失,腸道菌群入侵導(dǎo)致粘膜細胞持續(xù)損傷并合成炎性細胞因子IL-23/IL-17前體,促進結(jié)直腸腺瘤的形成。局部持續(xù)炎癥使KRAS,TP53基因更易突變,結(jié)直腸腺瘤進一步發(fā)展為腺癌[14]。AIM2是識別微生物或宿主來源的雙鏈DNA的細胞質(zhì)傳感器。在與DNA結(jié)合后,AIM2組裝成蛋白復(fù)合體即AIM2炎性小體,激活半胱天冬酶-1(Caspase-1),導(dǎo)致細胞的炎癥壞死(細胞焦亡),并促進炎性細胞因子前體pro-IL-1β和pro-IL-18合成[2]。黏膜屏障受損導(dǎo)致的慢性炎癥是腫瘤干細胞轉(zhuǎn)化為腫瘤的始動和持續(xù)促進因素。慢性炎癥可導(dǎo)致基因不穩(wěn)定和基因突變,均可導(dǎo)致腫瘤發(fā)生[16]。我們推測AIM2可能參與結(jié)直腸炎癥反應(yīng)的調(diào)節(jié)抑制結(jié)直腸腺瘤及腺癌的發(fā)生,具體機制仍需深入研究。

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