戴 璐 張懷榮 霍文嚴(yán) 祁 鵬 張黎光 喬 婷 劉 愚 李峻志*

（1陜西省微生物研究所，陜西西安710043；2寧強(qiáng)縣真菌研究所，陜西寧強(qiáng)724400）

目前陜南秦巴山區(qū)的香菇代料栽培大多采用春植秋冬出菇模式（簡(jiǎn)稱春栽模式），該模式下的菌筒在越夏過程中，一方面容易染菌腐爛，另一方面其營(yíng)養(yǎng)成分會(huì)有所消耗（大約消耗10%～20%），因而利用該模式生產(chǎn)的香菇的產(chǎn)量及品質(zhì)相對(duì)較低。因此，選育出適宜陜南秦巴山區(qū)的，短菌齡、高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)、抗逆性強(qiáng)的秋栽香菇新菌株，已是迫在眉睫的工作。迄今為止，雜交育種仍是香菇新品種選育及品種改良較為常用和有效的育種方法。此法是通過單×單雜交或單×雙雜交使得雙親的優(yōu)良性狀互補(bǔ)或是借助一親本的優(yōu)良性狀克服另一親本劣勢(shì)性狀，達(dá)到選育出優(yōu)良品種的目的。

1 材料與方法

1.1 親本菌株

按育種目標(biāo)收集綜合性狀優(yōu)良、差異性狀互補(bǔ)的8個(gè)袋栽香菇品種（菌株）作為雜交親本，其編號(hào)分別為238、276、378、395、482、574、672、808，并適時(shí)栽培出菇，供孢子采集用。

1.2 培養(yǎng)基

PDA培養(yǎng)基：馬鈴薯200 g，瓊脂20 g，葡萄糖20 g，蒸餾水1000 mL；栽培種培養(yǎng)基：雜木屑80%，麩皮20%，另加營(yíng)養(yǎng)素0.15%；栽培袋培養(yǎng)基：雜木屑80%，麩皮17%，玉米面3%，另加營(yíng)養(yǎng)素0.15%。

1.3 方法與步驟

1.3.1 技術(shù)路線

孢子采集→單孢分離與萌發(fā)→單核菌絲鏡檢→雜交配對(duì)→異核體鏡檢→拮抗試驗(yàn)→初選→復(fù)選→入選品系產(chǎn)鑒→品種鑒定。

1.3.2 孢子采集

采集尚未彈射孢子的香菇預(yù)選親本個(gè)體（八成熟），置于鐘罩式孢子采集器中。在22～24℃的空間溫度，50%～70%的空間相對(duì)濕度的條件下，培養(yǎng)1～2 d。待孢子彈射后，取出載有孢子的濾紙片并置于無菌試管中，在4℃冰箱中進(jìn)行短期保存。

1.3.3 孢子萌發(fā)與單核菌絲鏡檢

將收集的孢子進(jìn)行梯度稀釋后，將稀釋好的孢子在裝有PDA培養(yǎng)基的試管斜面上進(jìn)行劃線，并置于23℃恒溫箱中培養(yǎng)。待孢子開始萌發(fā)后，挑取星芒狀的單菌落轉(zhuǎn)接至PDA試管斜面培養(yǎng)基中繼續(xù)進(jìn)行培養(yǎng)。隨時(shí)觀察菌絲的生長(zhǎng)狀態(tài)，并對(duì)每個(gè)菌落的菌絲進(jìn)行鏡檢，檢驗(yàn)有無鎖狀聯(lián)合；將無鎖狀聯(lián)合的菌絲挑選出來，視為單核菌絲。

1.3.4 雜交配對(duì)

分別挑取雙親單核菌絲，隨機(jī)選擇，交叉配對(duì)，將雙親單核菌絲各一塊置于PDA培養(yǎng)基中，菌塊相距2 cm，當(dāng)兩親本單核菌絲愈合后，挑取中間部位的頂端粗壯且分枝明顯的結(jié)合菌絲進(jìn)行培養(yǎng)、鏡檢，并觀察鎖狀聯(lián)合。將具有鎖狀聯(lián)合的結(jié)合菌絲進(jìn)行編號(hào)、登記，轉(zhuǎn)管培養(yǎng)，保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.5 拮抗試驗(yàn)

拮抗試驗(yàn)采用PDA培養(yǎng)基。將兩親本菌絲與結(jié)合菌絲同時(shí)接入裝有PDA培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中培養(yǎng)，呈三角形接種。觀察結(jié)合菌絲與親本菌絲相遇后是否產(chǎn)生拮抗線。與親本產(chǎn)生明顯拮抗線的結(jié)合菌絲，視為異核菌絲體，簡(jiǎn)稱異核體，保留其菌絲體和編號(hào)。

1.3.6 異核體菌株初選

圖1 森立17出菇狀態(tài)及子實(shí)體形態(tài)

異核體菌株初選試驗(yàn)采用栽培種培養(yǎng)基，在23℃的條件下培養(yǎng)，測(cè)定菌絲的生長(zhǎng)速度及茁壯程度，以香菇菌株209（引自華中農(nóng)業(yè)大學(xué)菌種實(shí)驗(yàn)中心）為對(duì)照菌株。選擇菌絲生長(zhǎng)速度和茁壯程度優(yōu)于對(duì)照菌株的異核體菌株用于后續(xù)的異核體菌株復(fù)選試驗(yàn)及生產(chǎn)鑒定。

1.3.7 異核體菌株復(fù)選及生產(chǎn)鑒定試驗(yàn)

將初選后保留的異核體菌株及對(duì)照菌株209，進(jìn)行產(chǎn)量、質(zhì)量比較及生產(chǎn)鑒定試驗(yàn)。試驗(yàn)采用栽培袋培養(yǎng)基，從中篩選出抗逆性強(qiáng)，產(chǎn)量高，質(zhì)量佳，菌齡短的香菇菌株。

2 結(jié)果與分析

2.1 親本單核菌絲體分離

12份親本個(gè)體被使用，分離挑取單孢菌落246份，并從中鏡檢挑選出132份單核菌絲。

2.2 雜交配對(duì)及異核體挑選

共雜交配對(duì)578組，經(jīng)鏡檢和拮抗試驗(yàn)，共檢出126份異核體。

2.3 異核體初選試驗(yàn)結(jié)果

126份異核體菌株，經(jīng)過菌絲生長(zhǎng)速度測(cè)定試驗(yàn)，結(jié)果顯示0017號(hào)菌株（森立17）等7個(gè)菌株的菌絲生長(zhǎng)速度高于對(duì)照菌株，將其列入異核體菌株復(fù)選及生產(chǎn)鑒定試驗(yàn)。詳見表1。

2.4 異核體菌株復(fù)選及生產(chǎn)鑒定試驗(yàn)結(jié)果

在異核體菌株復(fù)選及生產(chǎn)鑒定試驗(yàn)中，0017號(hào)菌株（森立17）出菇早，菌齡短，出菇溫度范圍廣，菇形圓正，柄短葉大，產(chǎn)量高，綜合評(píng)價(jià)高。其早熟性比較突出，比對(duì)照菌株209早出菇24 d。詳見表2、表3、表4、表5、圖1。

表2 森立17農(nóng)藝性狀

表3 森立17菌株子實(shí)體個(gè)體形態(tài)

表4 森立17菌株鮮菇產(chǎn)量（袋產(chǎn)量）

表5 森立17菇質(zhì)綜合評(píng)價(jià)

3 小結(jié)

采用單孢雜交技術(shù)，并通過挑選菌絲生長(zhǎng)速度及茁壯程度優(yōu)異的菌株進(jìn)行初篩，再經(jīng)復(fù)篩的技術(shù)路線是切實(shí)可行的。培育出的新菌株（森立17）具有以下特點(diǎn)：（1）在相同的溫度條件下，森立17的菌絲生長(zhǎng)速度及菌絲的茁壯程度明顯優(yōu)于對(duì)照品種209；（2）森立17菌絲生命力強(qiáng)，菌齡短（60～70 d），出菇快，出菇適宜溫度廣，是陜南秦巴山區(qū)理想的袋栽香菇秋栽菌株；（3）該菌株首次出菇整齊，菇體圓正、厚實(shí)、肥大、柄短，菇潮一致，生物轉(zhuǎn)化率可達(dá)86.7%；同時(shí)菇質(zhì)緊密，折干率高，鮮菇貨架期長(zhǎng)，既適合鮮銷，又適合加工為干品，是收益理想的袋栽香菇品種。