郭佳寶 陳炳霖 朱 毅 宋 歌 彭夢思 陳佩杰△ 王雪強(qiáng)△

（1上海體育學(xué)院運(yùn)動科學(xué)學(xué)院，上海200438; 2徐州醫(yī)科大學(xué)醫(yī)學(xué)技術(shù)學(xué)院，徐州 221004; 3鄭州大學(xué)附屬第五醫(yī)院肌骨疼痛康復(fù)科，鄭州470000）

神經(jīng)病理性疼痛(neuropathic pain,NP)是由軀體感覺神經(jīng)系統(tǒng)的損傷或疾病而直接造成的疼痛，常見病因包括代謝性疾?。ㄈ缣悄虿。?、病毒感染（如帶狀皰疹病毒）、神經(jīng)毒性藥物的使用（如化療藥物）和外傷等。據(jù)一項流行病研究的系統(tǒng)評價顯示，一般人群中NP的患病率約為7%～10%[1]。主要表現(xiàn)為自發(fā)性疼痛、痛覺超敏、痛覺過敏和繼發(fā)性痛覺過敏，此外，還可能伴有疼痛部位的感覺缺失、自主神經(jīng)功能紊亂等癥狀。與生理性疼痛相比，NP在損傷痊愈或病灶去除后，疼痛仍可能持續(xù)，甚至轉(zhuǎn)化為慢性疼痛。NP頑固性的特點顯著降低了病人的生活質(zhì)量（如睡眠、工作、社交和休閑娛樂），并使其出現(xiàn)焦慮和抑郁的情緒問題[2]。然而現(xiàn)有的治療方式還不能完全有效控制NP誘發(fā)的疼痛，故NP的管理仍然是一項挑戰(zhàn)，這在一定程度上是由于目前NP相關(guān)分子機(jī)制尚未完全闡明。近年來，已在基礎(chǔ)研究中發(fā)現(xiàn)微小RNA (microRNA,miRNA)參與了NP的發(fā)生和發(fā)展[3]。miRNA在細(xì)胞中具有特定的調(diào)控功能，可以抑制同源靶基因的表達(dá)，這提示了miRNA可能通過調(diào)控疼痛相關(guān)靶基因從而實現(xiàn)在NP中的作用。故本文將圍繞外周神經(jīng)損傷所致NP的miRNA調(diào)控作用及可能機(jī)制進(jìn)行闡述，以期為NP管理提供新的研究思路。

一、miRNA的概述

miRNA是內(nèi)源性非編碼微小RNA，長度約23個核苷酸，它是由一個帶有發(fā)夾形二級結(jié)構(gòu)的長RNA轉(zhuǎn)錄物經(jīng)過兩步剪切反應(yīng)而產(chǎn)生[4]。第一步是釋放柄環(huán)，稱為miRNA前體，第二步由miRNA前體加工為成熟的miRNA。柄環(huán)有3'端和5'端兩條臂，能各自產(chǎn)生功能性的miRNA，miRNA-3p和miRNA-5p的命名就是根據(jù)其是從miRNA前體的3'端臂還是5'端臂加工而來的。隨后miRNA功能的實現(xiàn)是通過與靶信使RNA (mRNA) 3'端非編碼區(qū)(untranslated region,UTR)的不精確堿基互補(bǔ)配對引起靶mRNA的降解或抑制其翻譯。1993年，Lee等[5]在研究線蟲時序性發(fā)育時發(fā)現(xiàn)了第一個miRNA基因lin-4。隨后2001年Science上發(fā)表關(guān)于miRNA系列研究，證明miRNA廣泛存在于動植物細(xì)胞中，如蠕蟲、蠅類、植物和哺乳動物[6,7]。據(jù)估計在人類基因中，超過三分之一的基因表達(dá)都受到miRNA的調(diào)控，miRNA參與人體內(nèi)重要生物調(diào)節(jié)過程，如細(xì)胞的增殖、分化、凋亡等[8]。miRNA在各物種間具有高度保守性，脊椎動物中已發(fā)現(xiàn)的miRNA有一半具有同源性[9]。Li等[10]比較慢性坐骨神經(jīng)壓迫模型(sciatic chronic constriction injury,CCI)大鼠與假手術(shù)大鼠背根神經(jīng)節(jié)(dorsal root ganglion,DRG)、脊髓、海馬和前扣帶皮層miR-203的表達(dá)差異，發(fā)現(xiàn)僅在脊髓中miR-203顯著下調(diào)。綜上，miRNA具有時序性、高度保守性和組織特異性的特點。此外，miRNA作為表觀遺傳機(jī)制的重要參與者，與DNA甲基化、組蛋白修飾存在密切關(guān)系。一方面，DNA甲基化和組蛋白修飾可影響miRNA的成熟過程；另一方面miRNA可通過調(diào)控DNA甲基轉(zhuǎn)移酶的表達(dá)或改變組蛋白修飾等途徑來調(diào)節(jié)表觀遺傳[11]。

二、NP病理生理機(jī)制

NP的病理生理機(jī)制極為復(fù)雜，目前主要涉及外周水平、脊髓水平和腦水平，疼痛傳遞路徑見圖1[12]。在外周水平，外周敏化是重要機(jī)制。傷害性刺激（如熱、冷、化學(xué)物質(zhì)、壓力刺激）侵襲外周傷害性感受器，傳入由DRG神經(jīng)元發(fā)出的有髓鞘Aβ纖維、Aδ纖維或無髓鞘C纖維中，經(jīng)DRG胞體投射到脊髓背角。其中外周神經(jīng)損傷后炎性介質(zhì)，如P物質(zhì)、組織胺、前列腺素等能作用于傷害性感受器，使傳入神經(jīng)興奮性升高，放大其傳入的疼痛信號，引起外周敏化。在脊髓及腦水平，中樞敏化是主要機(jī)制。外周傳入神經(jīng)元長時間或過度的超興奮觸發(fā)了脊髓背角前、后突觸易化，導(dǎo)致突觸傳遞效率的長時程增強(qiáng)，正?；蜷撓麓碳ひ材芤饎幼麟娢?，并向脊髓上水平傳遞，形成中樞敏化[13]。脊髓背角是中樞神經(jīng)系統(tǒng)接收疼痛傳入信號的第一站，經(jīng)初步整合后上傳至丘腦，丘腦核團(tuán)組成投射系統(tǒng)將信息進(jìn)一步傳遞到大腦皮層引起痛覺。其中脊髓丘腦側(cè)束和前束接收脊髓感覺信息后上傳至丘腦腹后外側(cè)核，負(fù)責(zé)處理感知和疼痛的辨別；脊髓腦橋臂旁束接受信息后上傳至邊緣系統(tǒng)，負(fù)責(zé)疼痛的情感。

三、NP誘導(dǎo)miRNA在神經(jīng)系統(tǒng)各部位的表達(dá)

為使分析簡明，本文選取CCI、坐骨神經(jīng)分支選擇性損傷(spared nerve injury,SNI)和脊神經(jīng)結(jié)扎(spinal nerve ligation,SNL)這三種模型進(jìn)行討論。檢索PubMed、EMBASE、Web of Science、Ebsco數(shù)據(jù)庫，檢索日期為建庫至2018年5月。檢索式為("MicroRNA*" OR "mir*" OR "micro RNAs" OR "micro RNA" OR "micro-RNAs" OR "micro-RNA")and("sciatica*" OR "chronic constriction injury" OR "CCI"OR "spinal nerve ligation" OR "SNL" OR "spared nerve injury" OR "SNI")。經(jīng)過系統(tǒng)檢索后，對這三種NP模型中miRNA在DRG、脊髓和腦中的表達(dá)變化進(jìn)行分類闡述，已被驗證性實驗證明的miRNA結(jié)果見表1。

1.DRG

圖1 神經(jīng)病理性疼痛的主要傳遞路徑

表1 NP模型中miRNA的差異性表達(dá)

DRG是NP研究的主要外周神經(jīng)組織，內(nèi)有接受軀體、四肢傷害性刺激傳入的初級感覺神經(jīng)元。在芯片技術(shù)檢測中，Chang等[48]采用SNL模型的大鼠，檢測發(fā)現(xiàn)損傷后DRG中上調(diào)的miRNAs有14個，下調(diào)的有20個。隨后NP誘導(dǎo)DRG中miRNA表達(dá)的改變在實驗中得到驗證，如已驗證了miR-132-3p、miR-21表達(dá)的上調(diào)[18,21]，miR-96、miR-141、miR-206、miR-183、miR-30b、miR-126、miR-182、miR-7a、miR-143和miR-142-3p表達(dá)的下調(diào)[3,14～17,19,20,22～28]。其中較多研究的是miR-183及miR-96，它們同屬miR-183家族。miR-183家族是高度保守的基因簇，最先被報道參與外胚層細(xì)胞和器官的功能，對脊椎動物神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育和功能至關(guān)重要[49]。Aldrich等的研究發(fā)現(xiàn)DRG中富含miR-96和miR-183，且在SNI模型中miR-96和miR-183明顯下調(diào)[22]。2017年6月Science期刊報道[3]，miR-183家族能調(diào)節(jié)NP誘導(dǎo)的基因網(wǎng)絡(luò)中80%的疼痛基因。與對照組小鼠比較，SNI所致NP模型小鼠的DRG神經(jīng)元中miR-183家族表達(dá)下調(diào)，敲除miR-183家族會讓SNI模型小鼠對機(jī)械刺激和觸摸的敏感性提高近一倍，在成年小鼠中急性下調(diào)50%的miR-183家族表達(dá)量會顯著提高其對疼痛的敏感性。該實驗證明了miR-183家族能控制小鼠的病理性機(jī)械痛覺。

2.脊髓

檢索發(fā)現(xiàn)在外周神經(jīng)損傷所致NP的基礎(chǔ)研究中，最多關(guān)注的部位是脊髓。2012年Brandenburger等[50]使用微陣列芯片技術(shù)檢測CCI大鼠脊髓中miRNA的表達(dá)變化，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在脊髓中6個miRNAs下調(diào)，分別是miR-30b、miR-100、miR-10a、miR-99a、miR-582-3p和miR-720。隨著芯片技術(shù)的逐漸成熟，近年來越來越多研究使用低密度陣列(TaqMan Low Density Array,TLDA)或微陣列芯片技術(shù)檢測CCI大鼠脊髓背角中miRNA的表達(dá)變化[51,52]。其中Li等[10]不僅進(jìn)行了TLDA檢測，而且選取了其中表達(dá)下調(diào)的miR-203進(jìn)行了定量實時聚合酶鏈反應(yīng)(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)驗證，結(jié)果證實了miR-203在脊髓背角中的下調(diào)。脊髓背角在疼痛信號上行傳遞過程中發(fā)揮重要作用，目前較多研究在文章中能明確檢測部位為脊髓背角，但還有部分研究提到的是脊髓，原因可能與實驗設(shè)計或技術(shù)成熟度有關(guān)。

3.腦

關(guān)于NP在腦水平miRNA的研究，學(xué)者們較多關(guān)注海馬及邊緣系統(tǒng)中的前扣帶皮層。Arai等[53]采用低密度陣列檢測CCI大鼠海馬組織miRNA表達(dá)譜的變化，結(jié)果確定了20個下調(diào)的miRNAs及2個上調(diào)的miRNAs，進(jìn)一步通過qRT-PCR檢測miR-132、miR-125b在損傷后7d和15d的表達(dá)變化，結(jié)果發(fā)現(xiàn)miR-132的表達(dá)先下降后穩(wěn)定，而miR-125b先下降后上升。這不僅證實了miR-132、miR-125b在CCI誘導(dǎo)NP過程中差異性表達(dá)，也說明miRNA的表達(dá)具有時間依懶性。Ding等[47]同樣采用CCI誘導(dǎo)的NP模型檢測前扣帶皮層miRNA的表達(dá)變化，微陣列芯片技術(shù)發(fā)現(xiàn)9個miRNAs上調(diào)，12個下調(diào)。對其中一個下調(diào)的miR-539進(jìn)行qRTPCR檢驗，結(jié)果發(fā)現(xiàn)較假手術(shù)組，CCI組在造模后7d和14d時，miR-539在雙側(cè)前扣帶皮層中的表達(dá)均顯著下降，其靶基因N-甲基-D-天冬氨酸型受體亞型-2B (N-methyl-D-aspartate receptor,NMDA)-subunit 2B (NR2B)則相應(yīng)顯著上調(diào)。該實驗提示前扣帶皮層的miR-539可能通過影響NR2B的表達(dá)來調(diào)節(jié)NP。

四、miRNA參與NP的可能機(jī)制

miRNA與NP的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。認(rèn)識miRNA在NP中的作用機(jī)制關(guān)鍵是明確miRNA及其靶基因的作用關(guān)系。目前神經(jīng)炎癥反應(yīng)、突觸可塑性、神經(jīng)元興奮性和DNA甲基化作用是主要研究方向。

1.神經(jīng)炎癥反應(yīng)

早在1998年，Wagner等[54]就證實對CCI大鼠進(jìn)行抗炎治療可以緩解其熱痛覺過敏，因此推測炎癥反應(yīng)是NP發(fā)展過程的重要組成部分。外周神經(jīng)炎癥反應(yīng)后激活了免疫細(xì)胞（如巨噬細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞和肥大細(xì)胞）和膠質(zhì)細(xì)胞（如星形膠質(zhì)細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞），這些活化的免疫細(xì)胞和膠質(zhì)細(xì)胞釋放炎性介質(zhì)來參與疼痛信號傳遞，如P物質(zhì)、白介素(Interleukin,IL)1、IL-6、神經(jīng)營養(yǎng)因子和一些神經(jīng)遞質(zhì)。高遷移率族蛋白B1 (High-mobility group box-1 protein,HMGB1)是一種對DNA修復(fù)十分重要的核蛋白，損傷后可釋放到細(xì)胞質(zhì)中。研究發(fā)現(xiàn)由神經(jīng)元釋放的HMGB1在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中作為內(nèi)源性炎性介質(zhì)可影響相鄰的神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)[55]。近年來有證據(jù)顯示HMGB1在NP的發(fā)展中有重要作用，NP模型大鼠的DRG神經(jīng)元和衛(wèi)星細(xì)胞、脊神經(jīng)的施萬細(xì)胞中都出現(xiàn)上調(diào)的HMGB1，持續(xù)的HMGB1釋放能引起NP模型大鼠機(jī)械性痛覺超敏和機(jī)械性痛覺過敏現(xiàn)象[56,57]。為證實miR-141是通過直接調(diào)控DRG神經(jīng)元中的HMGB1來影響NP神經(jīng)炎癥反應(yīng)，Zhang等[15]研究人員首先通過雙熒光素酶實驗檢測驗證了miR-141與HMGB1的3'URT相互作用，然后使用RT-qPCR檢測分別注射miR-381激動劑和抑制劑后HMGB1的表達(dá)變化，結(jié)果證實了他們的假設(shè)。隨后脊髓背角中小膠質(zhì)細(xì)胞的miR-381通過直接調(diào)控HMGB1表達(dá)影響脊髓炎癥反應(yīng)也得到研究證實[41]。信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活蛋白（signal transducer and activator of transcription 3,STAT3）廣泛表達(dá)于神經(jīng)系統(tǒng)，并在神經(jīng)損傷后被激活，激活的STAT3參與神經(jīng)炎癥反應(yīng)。Yan等[36]發(fā)現(xiàn)CCI模型大鼠中miR-93的過表達(dá)能顯著減少炎癥因子的表達(dá)，如IL-1β、腫瘤壞死因子和IL-6。此外，通過雙熒光素酶報告發(fā)現(xiàn)STAT3是miR-93的靶基因，miR-93直接作用于STAT3的3' UTR，STAT3的過表達(dá)能逆轉(zhuǎn)由于miR-93過表達(dá)誘導(dǎo)的對神經(jīng)炎癥反應(yīng)的抑制效應(yīng)。Jin等[40]推測X染色體失活特異轉(zhuǎn)錄因子(X-inactive specific transcript,XIST) /miR-544/ STAT3軸對NP的發(fā)展具有重要作用。經(jīng)證實屬于長非編碼RNA的XIST與miR-544呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)的關(guān)系；miR-544能緩解CCI誘導(dǎo)的NP發(fā)展，而XIST過表達(dá)能逆轉(zhuǎn)這種影響；生物信息學(xué)預(yù)測及實驗又證實了STAT3是miR-544的靶基因。作者通過以上系列研究證實了XIST/miR-544 / STAT3軸在NP中的影響，并指出NP治療新的靶點。細(xì)胞因子信號抑制因子(Suppressor of cytokine signaling,SOCS)是炎癥信號的負(fù)反饋調(diào)節(jié)者，SOCS的缺失會使機(jī)體出現(xiàn)高炎癥反應(yīng)。已有基礎(chǔ)研究發(fā)現(xiàn)SOCS蛋白的過表達(dá)能阻斷Janus Kinase激酶/ STAT3信號通路，進(jìn)而緩解外周神經(jīng)損傷后脊髓炎癥反應(yīng)和機(jī)械性痛覺超敏[58]。在NP的miRNA研究中發(fā)現(xiàn)SOCS1是miR-19a、miR-155和miR-221的共同靶基因，實驗結(jié)果表明這三個miRNAs均能通過直接調(diào)控SOCS1影響神經(jīng)炎癥反應(yīng)和NP的發(fā)展[29,30,32]。Li等[31]研究發(fā)現(xiàn)miR-218能直接作用于SOCS3的3' URT，體內(nèi)外實驗均顯示miR-218抑制劑能顯著促進(jìn)SOCS3表達(dá)，抑制STAT3及其下游促炎癥基因的激活。這提示外周神經(jīng)損傷后上調(diào)的miR-218能通過抑制SOCS3激活STAT3 信號通路，進(jìn)而促進(jìn)神經(jīng)炎癥反應(yīng)和NP發(fā)展。

2.突觸可塑性

神經(jīng)元與神經(jīng)元之間的突觸連接隨神經(jīng)元活性的變化而改變，外周傳入神經(jīng)元長時間或過度的超興奮可持續(xù)改變突觸的結(jié)構(gòu)和功能，具體表現(xiàn)為突觸傳遞的長時程增強(qiáng)，該現(xiàn)象是突觸可塑性變化的主要形式之一。突觸傳遞快速興奮性由谷氨酸(Glutamic acid,Glu)介導(dǎo)，突觸前膜興奮釋放Glu，與突觸后膜上的Glu離子型受體結(jié)合，如α- 氨基-3-羥基-5- 甲基-4- 異惡唑丙酸(α-amino-3-hydroxy-5-methyl-4- isoxazole-propionic acid receptor,AMPA)受體、NMDA受體，介導(dǎo)信號傳遞，產(chǎn)生興奮性突觸后電位。GluA1和GluA2是AMPA受體的兩個亞型，Toyoda 等[59]的研究發(fā)現(xiàn)GluA1能增強(qiáng)ACC中突觸傳遞效率的長時程，激活細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)，其中ERK的激活被認(rèn)為是中樞敏化形成的標(biāo)志。此外，有研究報道[18]，與正常人比較，NP病人白細(xì)胞中miR-132-3p顯著增多。隨后在SNI大鼠模型中進(jìn)行驗證，與假手術(shù)組大鼠相比，SNI模型使得大鼠脊髓背角中miR-132-3p表達(dá)顯著增加，在10d時達(dá)到高峰。在SNI模型大鼠脊髓中注射miR-132-3p抑制劑，13d后發(fā)現(xiàn)可顯著減少DRG中miR-132-3p的表達(dá)，最終改善痛覺過敏。經(jīng)熒光素酶檢測發(fā)現(xiàn)GluA1是miR-132-3p的靶基因，外源性注射miR-132-3p模擬物可減少GluA1的表達(dá)。這表明miR-132-3p可能通過下調(diào)GluA1影響突觸可塑性，進(jìn)而緩解NP引起的痛覺過敏。NR2B是NMDA受體的亞基，NR2B磷酸化可減弱NMDA受體活性，從而提高疼痛閾值。Ding等[47]研究發(fā)現(xiàn)CCI模型大鼠前扣帶皮層中miR-539的表達(dá)明顯減少，伴隨NR2B表達(dá)顯著增加。這提示miR-539可能通過調(diào)節(jié)NR2B影響NMDA受體活性，進(jìn)而改變興奮性突觸后電位的釋放參與NP的發(fā)生與發(fā)展。在神經(jīng)元中，Ras家族蛋白質(zhì)及其下游信號通路，如絲裂原激活蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases,MAPK)等對神經(jīng)元的病理生理發(fā)揮重要作用。RAS相關(guān)蛋白Rap-1a (Rap1a)是Ras家族蛋白質(zhì)的成員之一，在突觸可塑性的分子機(jī)制中扮演著關(guān)鍵的角色。Li等[10]發(fā)現(xiàn)CCI大鼠模型脊髓背角中miR-203表達(dá)顯著下降，miR-203能直接作用于Rap1a的3' URT，提示miR-203可能通過調(diào)節(jié)靶基因Rap1a及其下游信號通路ERK激酶(MEK) / ERK來影響NP的發(fā)展。

3.神經(jīng)元興奮性

外周神經(jīng)系統(tǒng)損傷后，傷害性刺激轉(zhuǎn)化為神經(jīng)沖動經(jīng)由傳入神經(jīng)纖維到達(dá)DRG胞體，DRG神經(jīng)元出現(xiàn)超興奮性，進(jìn)而產(chǎn)生異位放電，這種異位放電可能是NP產(chǎn)生和維持的基礎(chǔ)之一。電壓門控離子通道是神經(jīng)元中動作電位產(chǎn)生和傳導(dǎo)的分子基礎(chǔ)，當(dāng)細(xì)胞膜去極化時，鈉離子通道開放使離子內(nèi)流，引發(fā)動作電位的起始，復(fù)極化時鈉離子通道開始關(guān)閉，鉀離子通道緩慢開放使離子外流，兩個離子通道相互協(xié)作結(jié)束一次動作電位。Nav1.3是河豚素敏感型(Tetrodotoxin-sensitive,TTX-S)的電壓門控鈉離子通道，在哺乳動物胚胎時期的中樞神經(jīng)系統(tǒng)和外周神經(jīng)系統(tǒng)中有較高表達(dá)，成年后幾乎檢測不到[60]。但在神經(jīng)損傷后，Nav1.3在受損的DRG中明顯上調(diào)[14,23,26]。Nav1.3表達(dá)的增多及其快速激活、快速從失活中恢復(fù)的生物物理特點使其成為異位放電產(chǎn)生和維持的主要研究對象。研究發(fā)現(xiàn)Nav1.3與NP的miRNA調(diào)控關(guān)系密切[14,23,26]。以往有學(xué)者證實Nav1.3是miR-96、miR-183和miR-30b共同調(diào)控的靶基因，如Chen等[14]在CCI模型大鼠的DRG中注射miR-96模擬物以上調(diào)miR-96的表達(dá)，結(jié)果抑制了Nav1.3表達(dá)的上調(diào)，進(jìn)而緩解了CCI誘導(dǎo)的NP。這說明miR-96、miR-183和miR-30b可能通過負(fù)向調(diào)控Nav1.3的表達(dá)，進(jìn)而微調(diào)傷害性刺激向中樞神經(jīng)系統(tǒng)傳遞的信號。另一種TTX-S型的鈉離子通道Nav1.7也被證實是miR-30b的靶基因，SNI模型大鼠DRG中miR-30b的過表達(dá)或敲低可以引起Nav1.7表達(dá)相應(yīng)的降低或增多，進(jìn)而影響疼痛[19]。T型鈣離子通道是一種低電壓門控離子通道，研究發(fā)現(xiàn)它是NP治療的新靶點[61]。Favereaux等[45]的研究發(fā)現(xiàn)在SNL誘導(dǎo)的NP狀態(tài)下，大鼠脊髓miR-103表達(dá)的下調(diào)能夠使Cav1.2-LTC (Cav1.2-comprising L-type calcium channel)的三種亞型Cav1.2-α1,Cav1.2-α2δ1和Cav1.2-β1的表達(dá)出現(xiàn)上調(diào)，這三種亞型分別由Cacna1c,Cacna2d1 and Cacnb1編碼而成。這證明了大鼠脊髓的Cav1.2-LTC參與了神經(jīng)元超興奮調(diào)控，miR-103在脊髓中過表達(dá)可以通過抑制Cav1.2-LTC上調(diào)緩解NP引起的疼痛。

4.DNA甲基化

DNA甲基化是基因表觀遺傳修飾方法，一般情況下，DNA甲基化可關(guān)閉基因活性，去甲基化則可誘導(dǎo)基因的重新活化或表達(dá)。王英等[62]研究發(fā)現(xiàn)CCI大鼠脊髓中的DNA甲基化水平明顯上調(diào)，并伴隨DNA甲基轉(zhuǎn)移酶（DNA methyltransferase，DNMT1、DNMT3a、DNMT3b和甲基化CPG結(jié)合蛋白2 (methyl CpG binding protein 2,MeCP2)的上升。其中DNMT家族是催化DNA甲基化的重要酶類，而MeCP2是MeCP家族成員之一，可通過特異性結(jié)合甲基化CpG位點的蛋白抑制基因表達(dá)[63]。研究發(fā)現(xiàn)miRNA與DNA甲基化密切相關(guān)，DNA甲基化可影響miRNA成熟過程，miRNA也可通過調(diào)控DNMT的表達(dá)來調(diào)節(jié)表觀遺傳。因此，DNA甲基化機(jī)制很有可能參與miRNA調(diào)控NP的過程中。Manners等[20]研究發(fā)現(xiàn)神經(jīng)損傷后小鼠DRG中的MeCP2表達(dá)顯著上升，MeCP2表達(dá)的上調(diào)可抑制miR-126的表達(dá)，下調(diào)的miR-126又能使DNMT1和血管內(nèi)皮生長因子A表達(dá)增多。這表明MeCP2能通過抑制miR-126激活DNMT1和Vegfa的表達(dá)，該研究也使我們更好地理解NP中表觀遺傳調(diào)控誘導(dǎo)分子水平變化的分子基礎(chǔ)。Xu等[27]在SNL誘導(dǎo)的NP模型中證實miR-143是DNMT3a的負(fù)向調(diào)節(jié)器，且通過在DRG內(nèi)注射DNMT3a抑制劑發(fā)現(xiàn)阿片類受體MOR和KOR的表達(dá)增加，這進(jìn)一步表明外周神經(jīng)損傷后DNMT3a的增多會抑制MOR和KOR的表達(dá)，進(jìn)而加速NP發(fā)展。

五、小結(jié)

本文對miRNA及其靶基因在CCI、SNI及SNL這三種NP模型中的表達(dá)、調(diào)控關(guān)系及可能作用機(jī)制進(jìn)行了闡述，明確了miRNA在外周神經(jīng)損傷所致NP發(fā)生發(fā)展過程中起著極為重要的作用。但是目前miRNA在NP發(fā)生發(fā)展不同階段的參與情況尚不清楚，今后在基礎(chǔ)研究中還需進(jìn)一步探索。miRNA及其靶基因有望作為預(yù)防和治療外周神經(jīng)損傷所致NP的潛在生物標(biāo)記和治療新策略。目前已知基礎(chǔ)實驗的機(jī)制探索選取了背根神經(jīng)節(jié)、脊髓和腦等重要神經(jīng)組織，但在NP生物標(biāo)記物的臨床研究中，標(biāo)本較多集中在病人的外周血液、腓腸神經(jīng)和皮膚等。如Leinders等[64]已發(fā)現(xiàn)在慢性NP病人外周血液白細(xì)胞及活檢的腓腸神經(jīng)中miR-132-3p表達(dá)均顯著高于健康人。體液中的miRNA表達(dá)穩(wěn)定，可能是一種理想的非侵入性的NP生物標(biāo)記物。目前已有不少疾病使用血液中的miRNA作為生物標(biāo)記物，如2型糖尿病腎病、腫瘤[65,66]。近年來有關(guān)miRNA與NP的臨床研究逐漸增多，希望未來能將這些發(fā)現(xiàn)應(yīng)用于NP的臨床診療工作中。