劉訓(xùn)德，劉錦平△

(1.遵義醫(yī)學(xué)院，貴州 遵義 563000；2.四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院·四川省人民醫(yī)院乳腺科，四川 成都 610072)

全球癌癥數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)顯示，乳腺癌已成為女性最常見的惡性腫瘤，并且是女性死亡的第二大原因[1]。其發(fā)病率在全球呈逐年上升趨勢，尤其是在發(fā)展中國家。國內(nèi)外針對乳腺癌的發(fā)病因素進(jìn)行了大量研究工作，但病因尚未完全闡明。研究表明，基因突變、絕經(jīng)狀態(tài)、家族史、生育能力、飲酒、吸煙、雌激素暴露等是女性乳腺癌的危險(xiǎn)因素，而雌激素在乳腺癌的發(fā)病和進(jìn)展中發(fā)揮重要作用[2]。在乳房中，雌激素與具有高親和力的特定受體結(jié)合，觸發(fā)DNA合成、促使細(xì)胞分裂和乳腺上皮細(xì)胞增殖[3]。目前已經(jīng)確定的兩種雌激素受體(ER)類型是ERα和ERβ[4]，ERα主要存在于子宮內(nèi)膜、卵巢基質(zhì)、乳腺癌細(xì)胞中，是乳腺上皮細(xì)胞中表達(dá)最多的ER[5]。ERα基因中最具代表性的兩個(gè)位點(diǎn)是XbaⅠ和PvuⅡ，兩者存在強(qiáng)烈的連鎖失衡，并與激素改變和乳腺癌的風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)。近年來，ERα基因XbaⅠ和PvuⅡ多態(tài)性在許多臨床研究中都被研究過，已成為腫瘤易感性研究的熱點(diǎn)之一，二者的多態(tài)性可能與乳腺癌易感性有關(guān)，但目前尚無共識，本文就其相關(guān)進(jìn)展作一綜述。

1 ERα基因結(jié)構(gòu)

ERα基因固定于人類染色體6q25.1，由595個(gè)氨基酸組成，蛋白質(zhì)分子量為66KD，包括7個(gè)內(nèi)含子和8個(gè)外顯子。ERα與其他類固醇激素受體功能區(qū)結(jié)構(gòu)相似，含有五個(gè)功能結(jié)構(gòu)域，從氨基端到羧基端：①氨基末端A/B區(qū)是轉(zhuǎn)錄激活的AF-1區(qū)，具有激活某些啟動(dòng)子的非配體依賴性功能，這是最小的保守區(qū)。②C區(qū)為DBD區(qū)，也稱為DNA結(jié)合區(qū)。③D區(qū)為鉸鏈區(qū)，主要與三維結(jié)構(gòu)中受體的變形有關(guān)，確保受體以最佳構(gòu)型與配體結(jié)合，是受體結(jié)構(gòu)修飾的關(guān)鍵區(qū)域。④E區(qū)是配體負(fù)載最重要的區(qū)域，它直接影響配體-復(fù)合物的生物活性，是內(nèi)分泌藥物發(fā)揮作用以及轉(zhuǎn)錄激活的重要組成部分。⑤F區(qū)是受體的第二個(gè)激活功能區(qū)(AF-2)[6]。

2 ERα基因多態(tài)性

基因多態(tài)性也叫遺傳多態(tài)性，是指在生物群體中兩種或更多種離散變異型或等位基因的同時(shí)或頻繁存在。DNA片段長度多態(tài)性(FLP)、DNA重復(fù)序列多態(tài)性(RSP)、單核苷酸多態(tài)性(SNP)為三種最常見的形式。人類ERα基因的序列分析顯示ERα基因中存在大量的等位基因單核苷酸多態(tài)性。①ERα基因外顯子的多態(tài)性包括：rs2077647、rs746432、rs10566781、rs4986934、rs1801132、rs22 28480等。②在限制性內(nèi)切酶XbaⅠ和PvuⅡ的識別位點(diǎn)上，是ERα基因的內(nèi)含子1中兩處常發(fā)生的點(diǎn)突變，其中定位于外顯子2上游0.4kb處是限制性片段長度多態(tài)性PvuⅡ，是內(nèi)含子1中T→C點(diǎn)突變所致；XbaⅠ的多態(tài)性則是發(fā)生在距PvuⅡ下游50bp處G→A的置換。XbaⅠ和PvuⅡ是到目前為止研究最熱最多的兩個(gè)多態(tài)位點(diǎn)(分別以X與x和P與p表示)。它與多種疾病有關(guān)，包括乳腺癌、子宮內(nèi)膜癌、前列腺癌、阿爾茨海默病和多發(fā)性硬化癥[7，8]。

3 ERα作用機(jī)制

雌激素通過幾種不同的機(jī)制誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生變化。這些機(jī)制的核心是雌激素與ER結(jié)合相關(guān)的蛋白質(zhì)。在雌激素作用的“經(jīng)典”機(jī)制中，雌激素?cái)U(kuò)散到細(xì)胞中并與位于細(xì)胞核中的ER結(jié)合。這種核雌激素-ER復(fù)合物通過與蛋白質(zhì)相互作用，該蛋白質(zhì)在雌激素反應(yīng)基因啟動(dòng)子區(qū)域激活蛋白1(AP1)或SP1，直接或間接的與雌激素反應(yīng)元件序列組合。導(dǎo)致向啟動(dòng)子補(bǔ)充相關(guān)調(diào)節(jié)蛋白(輔活化因子或阻遏物)，增加或減少mRNA水平和相關(guān)蛋白的產(chǎn)生。這種“經(jīng)典”機(jī)制通常在數(shù)小時(shí)內(nèi)發(fā)生。相比之下，雌激素也可以通過“非基因組”機(jī)制更快地(在幾秒或幾分種內(nèi))工作，其主要通過位于質(zhì)膜內(nèi)或靠近質(zhì)膜的ER，或通過其他非質(zhì)膜相關(guān)的雌激素結(jié)合蛋白，導(dǎo)致細(xì)胞反應(yīng)，如增加或者降低Ca2+的水平，以及激酶的激活。與之相對應(yīng)的是兩種作用模型，在“經(jīng)典”途徑中，配體依賴性轉(zhuǎn)錄因子是通過結(jié)合雌激素反應(yīng)元件(目標(biāo)基因序列和招募蛋白等輔活化因子)來調(diào)節(jié)目標(biāo)基因的轉(zhuǎn)錄；“非基因組”效應(yīng)可能通過位于質(zhì)膜上或鄰近質(zhì)膜的ER發(fā)生，這需要“適配器”蛋白的存在，“適配器”蛋白促使雌激素與膜ER結(jié)合，導(dǎo)致細(xì)胞信號分子的快速變化和激酶活性的激活，進(jìn)而影響轉(zhuǎn)錄。

ERα對DNA修復(fù)蛋白的表達(dá)具有負(fù)調(diào)控作用，增加了DNA損傷。同時(shí)，ERα通過干擾目標(biāo)基因p53蛋白的轉(zhuǎn)錄阻止細(xì)胞凋亡[9]。雖然在ERα基因內(nèi)含子1中的多態(tài)位點(diǎn)XbaⅠ和PvuⅡ不位于基因的編碼區(qū)，但可以通過影響mRNA的轉(zhuǎn)錄和剪接或影響鄰近區(qū)域的其他基因，從而對生長因子和信號通路的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)產(chǎn)生影響。

4 ERα基因多態(tài)性與乳腺癌

XbaⅠ和PvuⅡ并不直接參與ERα基因轉(zhuǎn)錄翻譯過程。Maruyama等[10]將1.3kbpERα基因序列插入熒光素酶報(bào)告基因載體(pGL3)中，發(fā)現(xiàn)x等位基因的熒光素酶活性高于X等位基因。Herrington等[11]發(fā)現(xiàn)P等位基因與暴露于ERα早幼粒細(xì)胞(B-myb)轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)有關(guān)，后者增加了下游外顯子區(qū)轉(zhuǎn)錄活性。

在國內(nèi)外研究報(bào)告中，正常中國漢族人群中ERα的XbaⅠ和PvuⅡ等位基因頻率為X：28.9%，P：39.6%，與已報(bào)道的其他亞洲人群的基因頻率相似：中國上海人群為X：26%，P：39.7%[12]，韓國人群為X：29.7%，P：40.2%[13]。XX和PP基因型頻率在中國人群中分別是4.3%和15.0%，與韓國人群相似，而大大低于瑞典人群(分別為10.2%和29.9%)[14]。巴西人群的一項(xiàng)研究表明，ERα的基因型分布為：PvuⅡERα-397 C/T：32.3%TT，47.5%TC，20%CC；XbaⅠERα-351 A/G：46.3%AA，41.7%AG，12.0% GG。ERα單倍體基因型分布為53.5%PX，14.3%Px，0.3%pX，32%px，這與世界范圍內(nèi)以前發(fā)表的大多數(shù)報(bào)告有顯著差異[15]。這些結(jié)果表明，不同地區(qū)不同種族之間XbaⅠ和PvuⅡ基因多態(tài)性分布存在顯著差異。

大量臨床研究證實(shí)ERα基因XbaⅠ(rs9340799)和PvuⅡ(rs2234693)多態(tài)性與乳腺癌危險(xiǎn)性有關(guān)。但許多研究結(jié)果卻不一致，經(jīng)過分析觀察不同人群的研究結(jié)果顯示關(guān)于ERα基因XbaⅠ(rs9340799)和PvuⅡ(rs2234693)多態(tài)性與乳腺癌的關(guān)系主要分為以下幾種情況：

首先，ERα的PvuⅡ基因多態(tài)性影響女性患乳腺癌的風(fēng)險(xiǎn)，而XbaⅠ基因多態(tài)性沒有顯著影響。其相關(guān)研究有：Li等[16]和Zhang等[17]的研究發(fā)現(xiàn)，攜帶ERα基因PvuⅡ CC基因型或C等位基因者乳腺癌易感性顯著降低。來自巴西人[18]群中的一項(xiàng)研究顯示攜帶P等位基因者發(fā)生乳腺癌的相對風(fēng)險(xiǎn)比非攜帶者增加了5.14倍。Zhang等[19]納入了26項(xiàng)研究對PvuⅡ與乳腺癌的相關(guān)性進(jìn)行meta分析，發(fā)現(xiàn)ERα基因PvuⅡ多態(tài)性與乳腺癌風(fēng)險(xiǎn)降低顯著相關(guān)。還有Hu等[20]納入了44項(xiàng)研究的meta分析發(fā)現(xiàn)PvuⅡ中TT+TC或TT基因型的個(gè)體比CC基因型的個(gè)體患乳腺癌的風(fēng)險(xiǎn)更高。除此之外還有來自非洲印度北部[21]和突尼斯[22]人群的研究均得到了相似的結(jié)論。另一方面在中國人群中的多項(xiàng)研究報(bào)道中提示PvuⅡ的C等位基因?yàn)楦呶５任换騕23～25]。在PvuⅡ多態(tài)性方面，研究表明，p等位基因?qū)е铝艘粋€(gè)潛在的Myb轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)，這可能會(huì)增強(qiáng)p等位基因攜帶者的ERα轉(zhuǎn)錄。然而，目前還不清楚ERα基因的高轉(zhuǎn)錄是如何影響ERα蛋白的，因?yàn)轭~外的Myb結(jié)合位點(diǎn)既可以放大該基因的轉(zhuǎn)錄，也可以產(chǎn)生具有不同性質(zhì)的ERα亞型。

其次，ERα的XbaⅠ基因多態(tài)性影響女性患乳腺的風(fēng)險(xiǎn)，而PvuⅡ基因多態(tài)性沒有顯著影響。其相關(guān)研究有：張珍連等[26]在新疆維吾爾族人群中的通過PCR-RFLP方法鑒定190例乳腺癌患者和194例健康女性的ERα的XbaⅠ和PvuⅡ基因多態(tài)性，結(jié)果顯示，與xx基因型相比，XX基因型和Xx基因型的OR值分別為16.500(95%CI：4.634～58.755)和5.029(95%CI：3.21～7.899)，患乳腺癌的危險(xiǎn)性顯著增加。而在各種基因模型中均未見PvuII多態(tài)性與乳腺的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的相關(guān)性。在歐洲[27]以絕經(jīng)后ER陽性乳腺癌患者為研究對象的一項(xiàng)研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)XbaⅠ基因型AA或AG與降低乳腺癌風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)，且與遠(yuǎn)處復(fù)發(fā)的相關(guān)性更強(qiáng)。這些都與之前Weiderpass等[14]在瑞典人群中的研究結(jié)論相似。

此外，還有部分研究發(fā)現(xiàn)ERα基因XbaⅠ(rs9340799)和PvuⅡ(rs2234693)多態(tài)性與乳腺癌易感性具有協(xié)同作用。例如：一項(xiàng)針對葡萄牙[28]人群的研究發(fā)現(xiàn)，含有x等位基因者患乳腺癌風(fēng)險(xiǎn)顯著降低，并且與PvuⅡ基因多態(tài)性無關(guān)。然而，對XbaⅠ(rs9340799)和PvuⅡ(rs2234693)基因多態(tài)性聯(lián)合分析顯示同時(shí)攜帶pp和xx等位基因型的乳腺癌風(fēng)險(xiǎn)顯著降低。曹青蘭等[29]在對四川婦女的一項(xiàng)研究中，發(fā)現(xiàn)在絕經(jīng)前婦女中同時(shí)攜帶X和p等位基因者能降低乳腺癌風(fēng)險(xiǎn)。最近一項(xiàng)在約旦[30]人群中對XbaⅠ(rs9340799)和PvuⅡ(rs2234693)多態(tài)性聯(lián)合分析顯示，Pp/Xx和pp/xx基因型具有協(xié)同作用，可顯著降低乳腺癌風(fēng)險(xiǎn)。這些報(bào)道都說明XbaI和PvuⅡ基因多態(tài)性存在著協(xié)同作用。

目前研究表明，ERα基因XbaⅠ(rs9340799)和PvuⅡ(rs2234693)多態(tài)性與乳腺癌易感性有關(guān)，但許多研究結(jié)論不一致，可能與基因分型錯(cuò)誤，人口之間的種族差異或環(huán)境差異、年齡和絕經(jīng)狀況的差異，病例對照研究中選擇偏倚等有關(guān)。

綜上所述，ERα作為雌激素依賴性的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子在乳腺癌的發(fā)生發(fā)展中起著重要作用。關(guān)于ERα基因多態(tài)性的報(bào)道很多，但XbaⅠ和PvuⅡ基因多態(tài)性仍然是最熱門的。大量研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)了其基因多態(tài)性與乳腺癌有關(guān)，雖然存在結(jié)論不一致，但是也已基本找到原因所在。因此，有必要在今后對更大量的樣本進(jìn)行多態(tài)性研究。更重要的是，這兩個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)需要與更多已知的乳腺癌危險(xiǎn)因素(如生活方式、遺傳、生理生育狀況、激素水平、BMI、電離輻射等)組合并加以分析，也許是更好地揭示ERα基因XbaⅠ和PvuⅡ多態(tài)性與乳腺癌之間關(guān)系的唯一方法。準(zhǔn)確識別這些SNP或相關(guān)位點(diǎn)對基因表達(dá)的影響，將增加現(xiàn)有的對活性生物學(xué)通路的認(rèn)識，有助于制定預(yù)防，早期診斷和有效治療乳腺癌的新策略。它還將為今后研究與乳腺癌風(fēng)險(xiǎn)有關(guān)的篩查模型提供重要數(shù)據(jù)。