田江川

(四川大學(xué)華西廣安醫(yī)院檢驗(yàn)科，四川 廣安 638000)

肝細(xì)胞癌(HCC)為消化系統(tǒng)常見惡性腫瘤，其早期診斷與治療難度大，疾病進(jìn)展快，死亡率高，而乙型肝炎病毒(HBV)感染是我國(guó)HCC發(fā)病的最常見原因[1]。甲胎蛋白(AFP)為診斷肝癌常用腫瘤標(biāo)志物，但其靈敏度與特異度有待提高，而異常凝血酶原(DCP)為維生素K缺乏或拮抗劑Ⅱ誘導(dǎo)的蛋白質(zhì)，是伴隨HCC特異產(chǎn)生的異常凝血酶原，磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(GPC3)則是蛋白聚糖家族成員，在細(xì)胞生長(zhǎng)、分化及遷移方面發(fā)揮重要作用，其蛋白水平在大多數(shù)HCC組織中呈高表達(dá)[2，3]。然而單項(xiàng)血清標(biāo)志物檢測(cè)極易出現(xiàn)假陽(yáng)性及假陰性，使靈敏度、特異度偏低，因此常聯(lián)合檢測(cè)多項(xiàng)血清標(biāo)志物提高疾病檢出率[4，5]。本文分析血清DCP、GPC3、AFP聯(lián)合檢測(cè)在診斷HBV相關(guān)HCV中的臨床價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料2017年1月至2018年6月我院收治的80例HBV相關(guān)HCC患者(HBV+HCC組)，另選擇同期無HBV感染或攜帶史的HCC患者40例(HCC組)及30例健康體檢者(對(duì)照組)，納入標(biāo)準(zhǔn)：①所有肝癌患者均符合2017年版《原發(fā)性肝癌診療規(guī)范》[6]中HBV相關(guān)HCC診斷標(biāo)準(zhǔn)，有明確的HBV感染病史，抗丙型肝炎病毒(HCV)陰性，肝硬化患者也經(jīng)臨床診斷及影像學(xué)確診；②健康體檢者心、肺、肝、腎功能正常，無腫瘤或腫瘤家族史；③所有患者均在告知本研究后簽署知情同意書，自愿配合參與本研究。排除標(biāo)準(zhǔn)：①肝癌患者發(fā)生全身轉(zhuǎn)移或伴惡液質(zhì)；②肝癌患者或肝硬化患者抗HCV陽(yáng)性，臨床資料記錄不完整；③有重要臟器功能異常、腫瘤家族史的健康體檢者。HBV+HCC組男52例，女28例；年齡28～63歲[(45.18±4.63)歲]；Child肝功能分級(jí)：A級(jí)43例，B級(jí)37例，HCC組男27例，女13例；年齡29～62歲[(45.14±4.68)歲]；Child肝功能分級(jí)：A級(jí)21例，B級(jí)19例，對(duì)照組男16例，女14例；年齡27～63歲[(45.06±4.71)歲]，三組性別、年齡等基線資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P> 0.05)，HBV+HCC組、HCC組的Child肝功能分級(jí)比較差異也無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P> 0.05)，有可比性。

1.2方法均在入院后清晨取空腹靜脈血4 ml，于4 ℃、3000 r/min速率下離心10 min，分離得血清，保存于-20 ℃冰箱待檢。以酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)測(cè)定血清DCP、GPC3水平，試劑盒分別由上海通蔚試劑公司、武漢優(yōu)爾生科技股份有限公司提供，檢驗(yàn)方法：準(zhǔn)備試劑、樣品及標(biāo)準(zhǔn)品，加入準(zhǔn)備好的樣品與標(biāo)準(zhǔn)品，在37 ℃反應(yīng)30 min，后洗板5次，加入酶標(biāo)試劑，37 ℃反應(yīng)30 min，再次洗板5次，加入顯色液A、B，37 ℃反應(yīng)30 min，加入終止液，15 min內(nèi)讀取OD值，計(jì)算出DCP、GPC3含量。采用羅氏E601電化學(xué)發(fā)光檢測(cè)系統(tǒng)與配套試劑測(cè)定AFP水平，具體檢驗(yàn)方法參照試劑盒說明書進(jìn)行，試劑盒內(nèi)有質(zhì)控血清及質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)品，所有操作嚴(yán)格依據(jù)說明書進(jìn)行。正常參考值：GPC3≤0.3 μg/L，DCP≤40 mAU/ml，AFP≤7 ng/ml，超出相應(yīng)范圍均記為陽(yáng)性。

1.3觀察指標(biāo)三組血清DCP、GPC3、AFP水平及陽(yáng)性率；以病理結(jié)果為準(zhǔn)，應(yīng)用受試者工作特征曲線(ROC)分析血清DCP、GPC3、AFP聯(lián)合檢測(cè)診斷HBV相關(guān)HCC的價(jià)值，計(jì)算約登指數(shù)(約登指數(shù)=靈敏度+特異度-1)；依據(jù)6個(gè)月后預(yù)后情況分為存活組、死亡組，比較其入院時(shí)的血清DCP、GPC3、AFP水平。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 19.0軟件處理數(shù)據(jù)。計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)，計(jì)量資料比較采用方差分析及LSD-t檢驗(yàn)，應(yīng)用ROC曲線、kappa一致性檢驗(yàn)分析血清DCP、GPC3、AFP聯(lián)合檢測(cè)診斷HBV相關(guān)HCC的價(jià)值。P< 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1三組血清DCP、GPC3、AFP水平比較HBV+HCC組血清DCP、GPC3、AFP水平高于HCC組和對(duì)照組，HCC組高于對(duì)照組(P< 0.05)。見表1。

表1 三組血清DCP、GPC3、AFP水平比較

*與對(duì)照組比較，P< 0.05；#與HCC組比較，P< 0.05

2.2三組血清DCP、GPC3、AFP陽(yáng)性率比較HBV+HCC組血清DCP、GPC3、AFP陽(yáng)性率高于HCC組和對(duì)照組，HCC組血清DCP、GPC3陽(yáng)性率高于對(duì)照組(P< 0.05)，兩組血清AFP陽(yáng)性率比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P> 0.05)。見表2。

表2 三組血清DCP、GPC3、AFP陽(yáng)性率比較 [n(%)]

*與對(duì)照組比較，P< 0.05；#與HCC組比較，P< 0.05

2.3血清DCP、GPC3、AFP單項(xiàng)、兩項(xiàng)及三項(xiàng)聯(lián)合檢測(cè)的診斷價(jià)值血清DCP、GPC3、AFP單獨(dú)診斷HBV相關(guān)HCC時(shí)，以GPC3診斷靈敏度、特異度、準(zhǔn)確度最高。三項(xiàng)聯(lián)合檢測(cè)診斷靈敏度高于AFP、DCP+AFP診斷，特異度高于DCP、AFP診斷，準(zhǔn)確度高于DCP、AFP、DCP+AFP診斷(P< 0.05)，三項(xiàng)聯(lián)合診斷時(shí)kappa值、約登指數(shù)、曲線下面積(AUC)分別為0.675、0.700、0.843。見表3、表4、圖1。

表3 血清DCP、GPC3、AFP單項(xiàng)、兩項(xiàng)及三項(xiàng)聯(lián)合檢測(cè)診斷結(jié)果

圖1 血清DCP、GPC3、AFP單項(xiàng)、兩項(xiàng)及三項(xiàng)聯(lián)合檢測(cè)的ROC曲線

2.4血清DCP、GPC3、AFP對(duì)HBV相關(guān)HCC預(yù)后的評(píng)估價(jià)值HBV相關(guān)HCC患者中6個(gè)月后死亡20例，存活60例，死亡組入院時(shí)的血清DCP、GPC3、AFP水平高于存活組(P< 0.05)。見表5。

表4 診斷效能分析

*與DCP+GPC3+AFP比較，P< 0.05

表5 血清DCP、GPC3、AFP對(duì)HBV相關(guān)HCC預(yù)后的評(píng)估價(jià)值

3 討論

HCC發(fā)病率位居所有腫瘤第五位，其癌癥相關(guān)死亡率居于第三位，而研究表明，80%原發(fā)性肝癌患者有HBV感染或肝硬化疾病基礎(chǔ)，HCC惡性程度高，病程進(jìn)展快，早發(fā)現(xiàn)及治療對(duì)延長(zhǎng)患者生命與改善生活質(zhì)量有重要意義，肝硬化患者的定期篩查有利于原發(fā)性肝癌的早期診斷[7]。對(duì)于HCC高危人群，最常用的監(jiān)測(cè)方法是定期檢測(cè)血清AFP水平及影像學(xué)手段如腹部彩超等，但敏感性與特異性不佳，近年來隨蛋白組學(xué)技術(shù)發(fā)展，篩選新的腫瘤標(biāo)志物成為可能，各種有希望的腫瘤標(biāo)志物相繼發(fā)現(xiàn)[8]，其中DCP已失去正常凝血酶原功能，可產(chǎn)生與肝臟惡性癌變相關(guān)的生物學(xué)效應(yīng)，而GPC3是在胎盤及胎肝等組織高表達(dá)的蛋白聚糖，而在正常成人肝組織中基本無表達(dá)[9]，因此考慮DCP、GPC3、AFP聯(lián)合檢測(cè)在HBV相關(guān)HCC中有較一定診斷價(jià)值。

本研究結(jié)果顯示，HBV+HCC組的血清DCP、GPC3、AFP水平明顯高于HCC組、對(duì)照組，且HCC組、對(duì)照組血清DCP、GPC3、AFP水平也存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，這與費(fèi)樂學(xué)等[10]的研究結(jié)果相近，表明DCP、GPC3、AFP參與HBV相關(guān)HCC的發(fā)生發(fā)展，DCP為近年來研究較熱的肝癌腫瘤標(biāo)志物，其表達(dá)水平主要與肝細(xì)胞缺氧及低維生素K濃度引起凝血酶原合成異常有關(guān)，與正常凝血酶原相比，DCP結(jié)構(gòu)特點(diǎn)為谷氨酸區(qū)中一個(gè)或多個(gè)谷氨酸殘基無法被羧化為γ羧基谷氨酸，繼而失去凝血功能，可促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞異常增殖及遷移[11]，因此在HBV相關(guān)HCC中患者中DCP出現(xiàn)異常升高，GPC3則是1996年P(guān)ilia等在研究過度生長(zhǎng)綜合征中發(fā)現(xiàn)的膜性硫酸乙酰肝素糖蛋白，可結(jié)合多種生長(zhǎng)因子并調(diào)節(jié)其活性，影響多種生物效應(yīng)分子，在細(xì)胞生長(zhǎng)發(fā)育與癌變過程中起著關(guān)鍵作用[12]。AFP雖然是檢測(cè)HCC常用腫瘤標(biāo)志物，但在分化程度好或退行發(fā)育的HCC中可能僅有輕度或沒有AFP升高，對(duì)于腫瘤直徑小的微小病灶檢出率仍不高，而良性或特殊疾病等情況下AFP也可為陽(yáng)性，本研究中發(fā)現(xiàn)，HBV+HCC組血清DCP、GPC3、AFP陽(yáng)性率明顯高于HCC組、對(duì)照組，HCC組血清DCP、GPC3陽(yáng)性率也較對(duì)照組高，而HCC組、對(duì)照組的AFP陽(yáng)性率對(duì)比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，因此在常規(guī)AFP基礎(chǔ)上，聯(lián)合DCP及GPC3可能有助于提高HBV相關(guān)HCC檢出率，陳妙等[13]的研究也發(fā)現(xiàn)，血清DCP、GPC3檢測(cè)可提高對(duì)AFP陰性的原發(fā)性肝癌檢出率。盧凌鵬等[14]的研究顯示，AFP、GPC3、DCP及血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)四項(xiàng)聯(lián)合診斷原發(fā)性肝癌的靈敏度、特異度、AUC分別為0.852、0.800、0.818，均高于任何一種標(biāo)志物單獨(dú)檢測(cè)。本研究中kappa一致性檢驗(yàn)及ROC曲線分析結(jié)果顯示，血清DCP、GPC3、AFP聯(lián)合檢測(cè)診斷HBV相關(guān)HCC的靈敏度、特異度、準(zhǔn)確度均較三項(xiàng)指標(biāo)單項(xiàng)診斷或兩兩聯(lián)合診斷更高，其中三項(xiàng)聯(lián)合檢測(cè)診斷靈敏度高于AFP、DCP+AFP診斷，特異度高于DCP、AFP單獨(dú)診斷，準(zhǔn)確度高于DCP、AFP、DCP+AFP診斷，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而三項(xiàng)聯(lián)合診斷時(shí)kappa、約登指數(shù)、AUC最高，分別為0.675、0.700、0.843，這與上述研究結(jié)果相近，提示DCP、GPC3、AFP具有廣譜性，單一檢測(cè)時(shí)診斷效能低，如AFP作為常見HCC腫瘤標(biāo)志物，診斷靈敏度、特異度、準(zhǔn)確度均在60%以下，而AFP聯(lián)合DCP、GPC3后可互為補(bǔ)充、互為印證，有助于提高診斷效能，使診斷HBV相關(guān)HCC的靈敏度、特異度、準(zhǔn)確度提高至80%以上，有一定應(yīng)用價(jià)值[15]。同時(shí)本研究也發(fā)現(xiàn)死亡組入院時(shí)的血清DCP、GPC3、AFP水平高于存活組，表明入院時(shí)血清DCP、GPC3、AFP對(duì)HBV相關(guān)HCC患者預(yù)后也有一定評(píng)估價(jià)值。

綜上所述，血清DCP、GPC3、AFP聯(lián)合檢測(cè)診斷HBV相關(guān)HCC的效能較好，有助于提高診斷靈敏度、特異度、準(zhǔn)確度，且對(duì)患者預(yù)后有一定評(píng)估價(jià)值，值得在臨床推廣實(shí)踐。