高玉瓊 魯琳穎 趙家才 何永富 楊彩云 李 雯 楊國榮

1.云南省種畜繁育推廣中心，昆明650212；2.昆明醫(yī)科大學海源學院，昆明651700；3.云南省草地動物科學研究院，昆明650212

口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的人獸共患的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病，其臨床特征是在口腔黏膜、四肢下端及乳房等處皮膚形成水泡和爛斑。該病傳播迅速，流行面廣（流行于全國各地），被各國政府及國際組織所重視，列為全球各國共同商定撲滅的頭號法定傳染病。世界動物衛(wèi)生組織將本病列為A 類動物疫病名單之首[1]。自然條件下口蹄疫病毒可感染多種動物，其中牛的易感性最高。目前，預防口蹄疫的主要方法是對易感動物進行免疫接種。云南省種畜繁育推廣中心家畜冷凍精液站根據(jù)口蹄疫流行情況，在春季和秋季對全群種公牛各進行1 次免疫接種。通過對口蹄疫疫苗接種前后牛精液質(zhì)量變化的分析研究，為制定免疫程序、加強公牛飼養(yǎng)管理、提高精液質(zhì)量提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 種公牛的來源

云南省種畜繁育推廣中心家畜冷凍精液站從全國各地核心育種場選優(yōu)引進種公牛，主要品種有西門塔爾、短角、安格斯、云嶺牛、摩拉水牛、尼里水牛。

1.2 疫苗的來源、接種方法、劑量及接種時間

接種疫苗為新疆天康畜牧生物技術股份有限公司生產(chǎn)的口蹄疫O 型、A 型、亞洲1 型三價滅活疫苗，頸部肌肉注射，每頭2 mL。口蹄疫疫苗每年春季、秋季各注射1 次，2017年春防的疫苗接種時間是2017年1 月18 日，秋防的疫苗接種時間是2017年7 月6 日。

1.3 種公牛的飼養(yǎng)管理

種公牛按照國家法定程序引進后隔離檢疫，檢疫合格后方能進入生產(chǎn)區(qū)。種公牛采用常年分欄舍飼，每牛一欄，定時定量由專人飼喂，不飼喂霉爛變質(zhì)的飼草飼料，自由飲水，自由運動。飼養(yǎng)采用全混合日糧（TMR）飼養(yǎng)技術，飼喂量占體重的2.5%～3.0%。日常加強公牛調(diào)教、肢蹄的護理和保健，定期免疫、驅蟲、消毒、體重體尺測量。

1.4 種公牛精液的采集

種公牛用假陰道法進行采精，所用器械應先沖洗、消毒。采精前在采精器的假陰道內(nèi)注入40 ℃左右的熱水，使得假陰道內(nèi)溫度控制在38～40 ℃，注水量根據(jù)牛的年齡、品種、特點而定，一般而言，年齡小比年齡大的注水量少，水牛比肉牛注水量少。假陰道內(nèi)壓力適當，并涂上適量的凡士林，使假陰道內(nèi)保持適當?shù)臐櫥取２删珕T右手持采精器，站在公牛的右后方，當公牛起跳、前肢爬上臺牛時，迅速向前用左手托著采精牛的包皮，右手將采精器口對陰莖口，使采精器和陰莖呈直線狀，兩手配合將采精牛陰莖口引進采精器口內(nèi)。公牛前沖即射精完成，采精員右手握緊采精器隨采精牛而下，待公牛前肢落地后，緩慢將采精器與公牛陰莖分離，將采精器口斜向上方，打開氣閥，待精液流入集精管后迅速轉入實驗室進行精液檢測。

1.5 精液質(zhì)量檢測

精液的檢查首先進行感官評定，新鮮的正常精液呈乳白色或乳黃色的不透明狀。然后通過刻度管測定采精量，用精子密度測定儀測定精液的密度，據(jù)此推算出應加稀釋液量，接下來取一小滴精液于玻片上在37 ℃的恒溫可視顯微鏡下觀察活力（呈直線運動精子的百分數(shù)），活力≥65%可進行稀釋分裝，并認真記錄各項檢查結果。

1.6 冷凍精液的制作

將檢查合格的精液用32 ℃的稀釋液進行稀釋，稀釋后用細管精液分裝一體機進行分裝、封口、印字。待分裝好的細管精液溫度降至15～20 ℃時放入4 ℃的冰箱平衡2～4 h，平衡后按照程控冷凍儀的技術進行冷凍，待細管精液冷凍好后存入液氮中。

1.7 精液凍后活力的檢測

從液氮容器中取出一只凍精，迅速放入37 ℃的水浴中輕輕晃動，待溶解后立即取出，擦干細管上的水分，用細管剪剪去封口端，滴一小滴精液于載玻片上置于37 ℃的恒溫可視顯微鏡下觀察活力，解凍活力達35%以上方可，否則報廢。

1.8 數(shù)據(jù)處理

根據(jù)在群種公牛采精記錄，以接種疫苗當天為界，接種疫苗前2 個月的種公牛精液的平均采精量、鮮精活力、密度、凍精報廢率數(shù)據(jù)為對照組，接種疫苗后2 個月種公牛精液的平均采精量、鮮精活力、密度、凍精報廢率數(shù)據(jù)為試驗組，用t 檢驗進行統(tǒng)計分析。

2 結果與分析

春季注射疫苗后，全群種公牛原精活力極顯著降低，采精量和精子密度變化不明顯，報廢率提高，解凍活力降低；西門塔爾牛和摩拉水牛原精活力均極顯著下降，采精量增加，報廢率提高，西門塔爾牛精子密度增加，摩拉水牛精子密度下降，但差異均不顯著。春防疫苗接種前后精液質(zhì)量見表1、表2 和表3。

表1 春防疫苗接種群體種公牛精液質(zhì)量比較

表2 春防疫苗接種西門塔爾牛精液質(zhì)量比較

表3 春防疫苗接種摩拉水牛精液質(zhì)量比較

由表4、表5 和表6 可以看出，秋季注射疫苗后，全群種公牛原精活力顯著降低，采精量顯著增加，精子密度下降，但差異不明顯，報廢率均上升，解凍活力降低；西門塔爾牛和摩拉水牛原精活力均顯著下降，采精量增加，報廢率提高，西門塔爾牛精子密度和摩拉水牛精子密度均上升，但差異均不顯著。

表4 秋防疫苗接種群體種公牛精液質(zhì)量比較

表5 秋防疫苗接種西門塔爾牛精液質(zhì)量比較

表6 秋防疫苗接種摩拉水牛精液質(zhì)量比較

3 討 論

種公牛進行口蹄疫強制免疫可以有效預防牛口蹄疫，同時也會影響種公牛的精液質(zhì)量，尤其是精液的采精量、活力以及凍后活力。2017年春季接種口蹄疫三聯(lián)疫苗后，種公牛原精活力極顯著下降（P＜0.01)，水牛的采精量極顯著增加，精子密度下降，但差異不明顯；秋季接種口蹄疫三聯(lián)疫苗后，種公牛原精活力顯著降低（P＜0.05），采精量有所增加，精子密度變化不明顯；精液報廢率增加，春季防疫注射反應比秋季防疫注射反應強烈；接種口蹄疫疫苗后使精液品質(zhì)和精子耐凍性降低。種公牛接種口蹄疫疫苗后，導致精液品質(zhì)普遍下降，對種公牛冷凍精液生產(chǎn)造成影響，種公牛接種疫苗后要注重加強飼養(yǎng)管理，根據(jù)冷凍精液生產(chǎn)需要，合理安排免疫時間，免疫注射后適當減少采精次數(shù)，減少不良應激，以避免和減少損失。本試驗未考慮疾病、飼養(yǎng)管理、氣候、精液的采集和處理、公牛的月齡等因素對精液質(zhì)量的影響，今后有待進一步深入研究。