王 濤 郝利平 李月圓 白宇仁
(山西農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院,山西 太谷 030801)
長(zhǎng)山藥(Dioscoreaopposita)為薯蕷科(Dioscoreaceae)植物,在我國(guó)種植面積廣、產(chǎn)量高、銷量大。長(zhǎng)山藥富含黏蛋白、薯蕷皂苷、生物堿、多糖、維生素和膳食纖維等功能性物質(zhì)[1],是一種高營(yíng)養(yǎng)的藥食同源植物。在低溫貯運(yùn)過(guò)程中,長(zhǎng)山藥易發(fā)生表皮褐變、失水皺縮、果肉凹陷等冷害癥狀,造成其營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和商品價(jià)值的損失,因此對(duì)減輕長(zhǎng)山藥在貯運(yùn)過(guò)程中冷害的研究具有重要意義。
殼聚糖是甲殼素經(jīng)過(guò)脫乙酰基作用后的產(chǎn)物,是一種可被生物降解的綠色天然高分子材料[2],可以降低病原微生物的入侵和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的流失,從而延緩果實(shí)衰老和病變。殼聚糖在木瓜[3]、櫻桃[4]等果蔬保鮮方面已得到廣泛應(yīng)用,且在黃瓜[5]、砂糖橘[6]等果蔬冷害控制方面的應(yīng)用也有報(bào)道。短波紫外線(short-wave ultraviolet,UV-C)是一種非熱處理技術(shù),具有低成本、易操作、安全環(huán)保等優(yōu)勢(shì)。研究發(fā)現(xiàn)UV-C處理可以提高辣椒[7]、葡萄[8]、香梨[9]等果實(shí)的貯藏品質(zhì),還可以減輕黃瓜[10]、水蜜桃[11]、貢橘[12]等果實(shí)的冷害癥狀。目前,殼聚糖和UV-C處理對(duì)采后長(zhǎng)山藥冷害發(fā)生及品質(zhì)的影響鮮見(jiàn)報(bào)道,因此本研究通過(guò)探討殼聚糖、UV-C及殼聚糖+UV-C處理對(duì)冷藏期間長(zhǎng)山藥冷害及品質(zhì)的影響,以期為減緩貯運(yùn)過(guò)程中長(zhǎng)山藥冷害損傷提供理論依據(jù)。
新鮮長(zhǎng)山藥,產(chǎn)地河北,2107年10月購(gòu)自太原市農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)。
殼聚糖(脫乙酰度≥90%)、三氯乙酸、硫代巴比妥酸、磷酸緩沖液、鄰苯二酚、愈創(chuàng)木酚、H2O2等,購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。
ZWD-A型紫外照射器,南京紫光電器有限責(zé)任公司;ZQJ-254紫外輻射照度計(jì),蘇州江東精密儀器有限公司;LP5-10型高速離心機(jī),北京雷勃爾公司;WFJ2000可見(jiàn)分光光度計(jì),尤尼柯上海儀器有限公司;DDS-11A電導(dǎo)儀,上海第二分析儀器廠。
1.3.1 殼聚糖及UV-C處理長(zhǎng)山藥最優(yōu)條件的篩選
1.3.1.1 不同濃度的殼聚糖處理對(duì)長(zhǎng)山藥冷害指數(shù)的影響 選取組織飽滿、粗細(xì)大致相同的長(zhǎng)山藥,截成長(zhǎng)度約20 cm的塊莖,分別采用濃度為0.5%、1.0%、1.5%的殼聚糖浸泡長(zhǎng)山藥塊莖10 min,取出自然晾干后置于設(shè)定好的冷庫(kù)(1±0.5℃、相對(duì)濕度75%~85%)中進(jìn)行貯藏試驗(yàn),貯藏時(shí)間共計(jì)60 d。每隔10 d取樣并測(cè)定長(zhǎng)山藥的冷害指數(shù)。
1.3.1.2 不同劑量的UV-C照射對(duì)長(zhǎng)山藥冷害指數(shù)的影響 選取組織飽滿、粗細(xì)大致相同的長(zhǎng)山藥,截成長(zhǎng)度約20 cm的塊莖,分別采用劑量為4、6、8 KJ·m-2的UV-C照射處理長(zhǎng)山藥塊莖,處理完畢后置于設(shè)定好的冷庫(kù)(1 ±0.5℃、相對(duì)濕度75%~85%)中進(jìn)行貯藏試驗(yàn),貯藏時(shí)間共計(jì)60 d。每隔10 d取樣并測(cè)定長(zhǎng)山藥的冷害指數(shù)。
1.3.2 最優(yōu)條件下不同處理方式對(duì)長(zhǎng)山藥冷害及品質(zhì)的影響 選取組織飽滿、粗細(xì)大致相同的長(zhǎng)山藥,截成長(zhǎng)度約20 cm的塊莖,以1.3.1優(yōu)化得出的殼聚糖最佳濃度和UV-C最佳劑量為基礎(chǔ),采用殼聚糖(最佳濃度)、UV-C(最佳劑量)及殼聚糖(最佳濃度)+UV-C(最佳劑量)3種方式處理長(zhǎng)山藥塊莖,其中對(duì)照組(control,CK)不作任何處理,每50個(gè)塊莖為一個(gè)處理組。將處理好的塊莖放入設(shè)定好的冷庫(kù)(1 ±0.5℃、相對(duì)濕度75%~85%)中,貯藏時(shí)間共計(jì)60 d。每隔10 d取樣分析長(zhǎng)山藥的冷害指數(shù)、可溶物固形物含量(soluble solid content,SSC)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量、細(xì)胞膜透性、多酚氧化酶(polyphenol oxidase,PPO)活性、過(guò)氧化物酶(peroxidase,POD)活性的變化。
1.4.1 冷害指數(shù)的測(cè)定 長(zhǎng)山藥冷害癥狀主要表現(xiàn)為表皮出現(xiàn)褐色斑點(diǎn),局部凹陷,失水皺縮等。參考Bi等[13]方法,將長(zhǎng)山藥冷害程度分為5級(jí):0級(jí),塊莖組織飽滿完好;1級(jí),表皮出現(xiàn)輕微凹陷和少量褐色斑點(diǎn),面積不超過(guò)5%;2級(jí),表皮凹陷區(qū)和褐色斑點(diǎn)面積達(dá)到10%~30%,切口皺縮;3級(jí),表皮凹陷區(qū)和褐斑面積達(dá)到30%~50%,切口開(kāi)始腐爛;4級(jí),表皮凹陷區(qū)和褐斑面積達(dá)到50%以上,切口腐爛嚴(yán)重。按照公式計(jì)算冷害指數(shù):
(1)
式中,N為塊莖總個(gè)數(shù);ni為發(fā)生冷害塊莖數(shù);i為冷害級(jí)數(shù)。
1.4.2 可溶性固形物含量的測(cè)定 長(zhǎng)山藥可溶性固形物含量(SSC)采用手持糖度儀測(cè)定,結(jié)果以百分?jǐn)?shù)表示。
1.4.3 MDA含量的測(cè)定 采用硫代巴比妥酸比色法[14]:稱取0.4 g樣品,加入5 mL 0.1%的三氯乙酸(trichloroacetic acid,TCA),然后研磨成勻漿,轉(zhuǎn)移到試管中,再加入5 mL 0.5%硫代巴比妥酸(4,6-Dihydroxy-2-mercaptopyrimidine,TBA),搖勻后將試樣煮沸后冷卻至室溫,最后轉(zhuǎn)入10 mL離心管中并于 3 000 r·min-1離心15 min,測(cè)量上清液體積,并測(cè)定其在530 nm和600 nm波長(zhǎng)處的吸光度值。每個(gè)樣品作2次重復(fù),按照公式計(jì)算樣品中MDA含量:
(2)
式中,A532和A600分別為532 nm和600 nm處的吸光度值;Ⅴ為上清液總體積,mL;W為稱取樣品重量,g。
1.4.4 細(xì)胞膜透性的測(cè)定 果蔬細(xì)胞中細(xì)胞膜透性的變化可由相對(duì)電導(dǎo)率來(lái)直接反映,參考趙云峰等[15]的方法并略有修改。用直徑為8 mm的打孔器將長(zhǎng)山藥樣品制成厚度為1 mm、大小一致的組織圓片,稱取5 g樣品并放入燒杯中,然后加入20 mL蒸餾水,浸泡放置30 min,用電導(dǎo)率儀分別測(cè)定該樣品常溫下和煮沸后浸泡液的電導(dǎo)率,并按照公式計(jì)算樣品的相對(duì)電導(dǎo)率:
(3)
式中,L0為常溫下浸泡液的電導(dǎo)率;L1為煮沸后浸泡液的電導(dǎo)率。
1.4.5 多酚氧化酶(PPO)活性的測(cè)定 參考曹建康等[16]的方法。稱取1 g長(zhǎng)山藥塊莖試樣,加入4 mL 0.1 mol·L-1磷酸緩沖液,冰浴條件下研磨后,轉(zhuǎn)入離心管中 5 000 r·min-1離心30 min,取0.5 mL上清液作為酶提取液,加入鄰苯二酚作為反應(yīng)混合物,測(cè)定在其在420 nm處的吸光度。以每分鐘內(nèi)OD420變化0.01為1個(gè)活性單位,計(jì)算得出PPO活性。
1.4.6 過(guò)氧化物酶(POD)活性的測(cè)定 參考高俊鳳[17]的方法。取1 g長(zhǎng)山藥樣品研磨成勻漿,4 000 r·min-1離心15 min得到酶提取液,取0.5 mL酶提取液,加入3 mL愈創(chuàng)木酚和H2O2混合溶液,測(cè)定該混合反應(yīng)物在480 nm波長(zhǎng)處的吸光度。以每分鐘OD480的變化0.01為1個(gè)活性單位,計(jì)算得出POD活性。
1.4.7 數(shù)據(jù)分析 采用Microsoft Excel 2010進(jìn)行數(shù)據(jù)處理;Origin 8.6軟件作圖。SPSS 17.0軟件進(jìn)行單因素方差分析和差異顯著性檢驗(yàn)[12]。
由圖1可知,隨著貯藏時(shí)間的延長(zhǎng),不同濃度殼聚糖處理的長(zhǎng)山藥塊莖冷害指數(shù)整體呈上升趨勢(shì)。方差分析表明,在貯藏前30 d,各殼聚糖處理組長(zhǎng)山藥冷害指數(shù)與CK差異不顯著;貯藏40 d后,1.0%殼聚糖處理組長(zhǎng)山藥冷害指數(shù)顯著低于CK和0.5%殼聚糖處理組(P<0.05),1.5%殼聚糖處理組與CK間差異不顯著;因此,選用1.0%作為殼聚糖處理長(zhǎng)山藥的最佳濃度。
圖1 不同濃度殼聚糖處理對(duì)長(zhǎng)山藥冷害指數(shù)的影響Fig.1 Effect of different concentration of chitosan acid treatments on chilling injury index of yam
由圖2可知,整個(gè)貯藏期間,4 KJ·m-2UV-C處理組長(zhǎng)山藥冷害指數(shù)與CK差異不顯著;貯藏40 d后8 KJ·m-2UV-C處理組長(zhǎng)山藥冷害指數(shù)顯著低于4 KJ·m-2UV-C處理組和CK(P<0.05),6 KJ·m-2UV-C處理組長(zhǎng)山藥冷害指數(shù)顯著低于8 KJ·m-2UV-C處理組(P<0.05)。因此,選擇6 KJ·m-2作為UV-C處理長(zhǎng)山藥的最佳照射劑量。
圖2 不同照射劑量UV-C處理對(duì)長(zhǎng)山藥 冷害指數(shù)的影響Fig.2 Effect of different irradiation doses of UV-C treatments on chilling injury index of yam
試驗(yàn)得出殼聚糖處理最佳濃度為1.0%,UV-C照射最佳劑量為6 KJ·m-2。采用殼聚糖+UV-C結(jié)合法對(duì)長(zhǎng)山藥塊莖進(jìn)行處理,以不作處理為空白對(duì)照,對(duì)比最佳濃度殼聚糖和最佳劑量UV-C單獨(dú)處理,分析不同處理方式對(duì)長(zhǎng)山藥冷害及品質(zhì)的影響。
2.3.1 不同處理方式對(duì)長(zhǎng)山藥冷害指數(shù)的影響 由圖3可知,貯藏第10天時(shí),CK與各處理組長(zhǎng)山藥塊莖均未見(jiàn)冷害癥狀出現(xiàn);貯藏第20天時(shí),CK、殼聚糖處理組和UV-C處理組長(zhǎng)山藥塊莖出現(xiàn)輕微冷害癥狀,而殼聚糖+UV-C處理組則未見(jiàn)冷害現(xiàn)象。隨著貯藏時(shí)間的延長(zhǎng),長(zhǎng)山藥塊莖冷害指數(shù)不斷遞增,貯藏 40 d后,CK長(zhǎng)山藥塊莖的冷害指數(shù)顯著高于同期其他處理組(P<0.05),說(shuō)明殼聚糖處理組、UV-C處理組、殼聚糖+UV-C處理組均可減緩長(zhǎng)山藥塊莖冷害的發(fā)生。貯藏第60天時(shí),殼聚糖+UV-C處理組長(zhǎng)山藥塊莖的冷害指數(shù)為40.2%,CK組則達(dá)到69.4%,在整個(gè)貯藏期間殼聚糖+UV-C處理組長(zhǎng)山藥塊莖的冷害指數(shù)均保持在較低水平,且顯著低于殼聚糖處理組、UV-C處理組(P<0.05)。表明殼聚糖+UV-C處理對(duì)減輕長(zhǎng)山藥塊莖冷害的效果最好。
圖3 不同處理方式對(duì)長(zhǎng)山藥冷害指數(shù)的影響Fig.3 Effect of different treatments on chilling injury index of yam
2.3.2 不同處理方式對(duì)長(zhǎng)山藥可溶性固形物含量的影響 可溶性固形物(SSC)含量可以反映果蔬在貯藏期間品質(zhì)的變化。由圖4可知,長(zhǎng)山藥塊莖的SSC含量隨著貯藏時(shí)間的延長(zhǎng)整體呈下降趨勢(shì)。貯藏40 d后,殼聚糖處理組和UV-C處理組長(zhǎng)山藥塊莖SSC含量顯著高于CK(P<0.05),殼聚糖+UV-C處理組極顯著高于CK(P<0.01);貯藏50 d后,UV-C處理組和CK長(zhǎng)山藥塊莖SSC含量持續(xù)下降,殼聚糖+UV-C處理組和殼聚糖處理組長(zhǎng)山藥塊莖SSC含量下降緩慢,且整體維持在較高水平。在整個(gè)貯藏期間,殼聚糖+UV-C處理可以更好地降低長(zhǎng)山藥塊莖代謝消耗,保持較高的SSC含量,維持塊莖品質(zhì)。
圖4 不同處理方式對(duì)長(zhǎng)山藥可溶性固 形物含量的影響Fig.4 Effect of different treatments on soluble solids content of yam
2.3.3 不同處理對(duì)長(zhǎng)山藥丙二醛含量的影響 MDA為膜脂過(guò)氧化主要產(chǎn)物,是反映果蔬細(xì)胞冷害發(fā)生程度的主要物質(zhì)[18]。由圖5可知,貯藏期間不同處理組長(zhǎng)山藥塊莖MDA含量整體呈上升趨勢(shì)。貯藏前10 d,不同處理組長(zhǎng)山藥塊莖MDA含量變化不大,貯藏10 d后,殼聚糖處理組、UV-C處理組、殼聚糖+UV-C處理組中長(zhǎng)山藥塊莖MDA含量顯著低于CK(P<0.05)。隨著貯藏時(shí)間的延長(zhǎng),殼聚糖+UV-C處理組長(zhǎng)山藥塊莖的MDA含量上升比較平緩,且含量顯著低于殼聚糖處理組和UV-C處理組(P<0.05),極顯著低于CK(P<0.01)。表明3種處理均可抑制MDA含量的上升,減少了其對(duì)塊莖的傷害,其中殼聚糖+UV-C處理效果最好。
圖5 不同處理方式對(duì)長(zhǎng)山藥MDA含量的影響Fig.5 Effect of different treatments on MDA content of yam
2.3.4 不同處理方式對(duì)長(zhǎng)山藥細(xì)胞膜透性的影響 細(xì)胞膜透性是衡量細(xì)胞膜完整性的重要標(biāo)志[19],由圖6可知,貯藏前20 d,各處理組長(zhǎng)山藥塊莖的相對(duì)電導(dǎo)率差異不顯著;貯藏30 d后,CK中長(zhǎng)山藥塊莖的相對(duì)電導(dǎo)率極顯著高于其他處理組(P<0.01),殼聚糖處理組和UV-C處理組長(zhǎng)山藥塊莖的相對(duì)電導(dǎo)率顯著高于殼聚糖+UV-C處理組(P<0.05)。表明3種處理均可以減緩長(zhǎng)山藥塊莖相對(duì)電導(dǎo)率的上升,保持細(xì)胞膜的完整性,其中殼聚糖+UV-C處理效果最好。
圖6 不同處理對(duì)長(zhǎng)山藥相對(duì)電導(dǎo)率的影響Fig.6 Effect of different treatments on relative electric conductivity of yam
2.3.5 不同處理方式對(duì)長(zhǎng)山藥多酚氧化酶活性的影響 果蔬發(fā)生冷害作用會(huì)導(dǎo)致果皮果肉發(fā)生褐變,可通過(guò)PPO活性反映長(zhǎng)山藥塊莖冷害程度[20]。由圖7可知,貯藏30 d,各處理組長(zhǎng)山藥塊莖的PPO活性上升速率比較平緩;貯藏第40天時(shí),冷害損傷加重,CK中長(zhǎng)山藥塊莖的PPO活性達(dá)到較高水平,極顯著高于同期其他處理組(P<0.01),殼聚糖處理組和UV-C處理組長(zhǎng)山藥塊莖的PPO活性極顯著高于同期殼聚糖+UV-C處理組(P<0.01)。表明殼聚糖+UV-C處理對(duì)降低PPO活性效果最好,有效地減緩了長(zhǎng)山藥冷害褐變的發(fā)生。
圖7 不同處理方式對(duì)長(zhǎng)山藥PPO活性的影響Fig.7 Effect of different treatments on PPO activity of yam
2.3.6 不同處理方式對(duì)長(zhǎng)山藥過(guò)氧化物酶活性的影響 在低溫脅迫下,果蔬細(xì)胞中過(guò)氧化物酶(POD)會(huì)清除細(xì)胞內(nèi)的活性氧來(lái)抵抗冷害的發(fā)生[21]。由圖8可知,貯藏期間各處理組長(zhǎng)山藥塊莖的POD活性總體呈先上升后下降的趨勢(shì),殼聚糖處理組、UV-C處理組和殼聚糖+UV-C處理組長(zhǎng)山藥塊莖的POD活性整體高于CK。貯藏第30天時(shí),各處理組長(zhǎng)山藥塊莖的POD活性均達(dá)到峰值,且顯著高于CK(P<0.05);貯藏40 d后,CK、殼聚糖處理組和UV-C處理組長(zhǎng)山藥塊莖的POD活性下降比較迅速,而殼聚糖+UV-C處理組長(zhǎng)山藥塊莖POD活性下降較平緩,且顯著高于其他處理組(P<0.05)。表明殼聚糖+UV-C處理組對(duì)保持POD活性效果最好。
圖8 不同處理方式對(duì)長(zhǎng)山藥POD活性的影響Fig.8 Effect of different treatments on POD activity of yam
低溫是保持果蔬品質(zhì)常見(jiàn)的有效方式之一,但長(zhǎng)時(shí)間低溫貯藏會(huì)破壞一些果蔬細(xì)胞正常生理代謝活動(dòng),導(dǎo)致冷害癥狀的出現(xiàn)[22]。前期試驗(yàn)在1、3、5℃ 3個(gè)條件下進(jìn)行長(zhǎng)山藥塊莖貯藏試驗(yàn),發(fā)現(xiàn)長(zhǎng)山藥塊莖在1℃條件下貯藏時(shí)易發(fā)生冷害現(xiàn)象。本試驗(yàn)結(jié)果表明,1℃貯藏條件下殼聚糖處理、UV-C照射和殼聚糖+UV-C處理3種方式均可以維持長(zhǎng)山藥在冷藏期間的品質(zhì),保持較低的冷害指數(shù)和較高的可溶性固形物含量,減輕長(zhǎng)山藥冷害的發(fā)生,其中殼聚糖+UV-C處理具有疊加效應(yīng),與單獨(dú)處理方式相比,可使長(zhǎng)山藥冷害癥狀推遲10 d出現(xiàn),且可溶性固形物含量整體維持在較高水平,但當(dāng)殼聚糖濃度過(guò)高或UV-C照射劑量過(guò)低時(shí),對(duì)長(zhǎng)山藥塊莖冷害指數(shù)的抑制效果不明顯。
果蔬在發(fā)生冷害后,細(xì)胞膜的完整性和流動(dòng)性遭到破壞,酸堿離子進(jìn)出細(xì)胞平衡狀態(tài)被打破,造成膜脂過(guò)氧化,細(xì)胞膜透性和MDA含量升高[23]。研究表明,采后處理可以通過(guò)降低MDA含量,維持細(xì)胞膜透性來(lái)提高果蔬低溫耐受性。如貯藏前熱水處理可以有效地減少紅陽(yáng)獼猴桃果實(shí)MDA含量的積累、抑制相對(duì)細(xì)胞膜透性的增加,保持較好的果實(shí)品質(zhì)[24]。丁香酚熏蒸處理可有效抑制青茄果實(shí)MDA含量的上升,從而提高青茄果實(shí)的低溫耐受性[25]。本研究結(jié)果表明,殼聚糖、UV-C、殼聚糖+UV-C 3種處理方式均可以減輕低溫對(duì)長(zhǎng)山藥細(xì)胞膜的傷害作用,減緩其相對(duì)電導(dǎo)率和MDA含量的上升,維持細(xì)胞膜的穩(wěn)定性,使膜具有正常的生理功能,從而有效控制長(zhǎng)山藥冷害發(fā)生的時(shí)間,降低冷害發(fā)生程度。
長(zhǎng)山藥發(fā)生冷害的主要癥狀表現(xiàn)為表皮發(fā)生褐變,主要原因是PPO催化酚類物質(zhì)反應(yīng)生成了黑色素。POD作為果蔬細(xì)胞內(nèi)清除活性氧自由基的保護(hù)酶之一,可以有效地降低塊莖細(xì)胞因活性氧積累而造成的傷害[26],其活性與植物抗冷性密切相關(guān)[27]。研究發(fā)現(xiàn)不同采后預(yù)處理可以減緩PPO、POD活性的升高,維持較高的總酚含量,減輕褐變和冷害的發(fā)生[28]。姚文思等[29]發(fā)現(xiàn)甘氨酸甜菜堿(glycine betaine, GB) 處理抑制了西葫蘆果實(shí)褐變相關(guān)的 PPO和POD活性,從而維持了果實(shí)在低溫貯藏期間的品質(zhì)。趙云峰等[30]報(bào)道熱處理可以降低采后龍眼果皮PPO活性,從而延緩采后龍眼果實(shí)果皮褐變的發(fā)生。本試驗(yàn)中,一定濃度殼聚糖、一定照射劑量UV-C和殼聚糖+UV-C處理可以顯著降低長(zhǎng)山藥塊莖的PPO活性,抑制表皮褐變,有效保持低溫貯藏期間POD活性,維持較高的自由基清除能力,增強(qiáng)了長(zhǎng)山藥對(duì)低溫的抵抗能力的同時(shí),減輕了冷害的發(fā)生。
1.0%殼聚糖、6 KJ·m-2UV-C、殼聚糖+UV-C處理都可以顯著降低1℃冷藏期間長(zhǎng)山藥塊莖冷害指數(shù)和褐變皺縮,保持細(xì)胞膜的完整性和較高的可溶性固形物含量,抑制相對(duì)電導(dǎo)率、MDA含量和多酚氧化酶的升高,提高抗氧化保護(hù)酶的活性,從而抑制冷害的發(fā)生,保持了低溫下長(zhǎng)山藥的貯藏品質(zhì)。其中,殼聚糖+UV-C處理對(duì)長(zhǎng)山藥塊莖冷害的控制效果更為顯著,在1℃條件下貯藏使得長(zhǎng)山藥塊莖冷害出現(xiàn)時(shí)間推遲10 d。本研究結(jié)果對(duì)延長(zhǎng)長(zhǎng)山藥貯藏時(shí)間和提高貯藏品質(zhì)具有重要意義。