周海玲 李 壯 曹自平

佳木斯大學，黑龍江省佳木斯市 154007

在中國乳腺癌呈逐年上升趨勢[1]，如何預防及醫(yī)治乳腺癌成為醫(yī)學研討的一個重要內(nèi)容。腫瘤的發(fā)生一般相對比較隱秘，特別有些人更是缺少醫(yī)學常識延誤治療時機。乳腺癌患者新發(fā)病人數(shù)每年都在增多，其因癌癥死亡的人數(shù)也是呈上升趨勢。癌癥的發(fā)生與基因異常改變有很大干系。最近幾年許多學者發(fā)現(xiàn)特異性趨化因子及其受體是許多腫瘤發(fā)生轉移的必要因素，尤其CCR7的表達成為乳腺癌發(fā)生轉移的必須因素。乳腺癌組織中CCR7的出現(xiàn)在癌細胞的趨化與侵襲活性中有一定的加速作用。大量研究證實乳腺癌以及多種實體腫瘤的轉移與CCR7有關。鈣粘附蛋白(Cadherin)可以把它歸為能夠參與細胞間同質(zhì)黏附的鈣依賴性跨膜糖蛋白。其中的 N-cadherin存在于神經(jīng)組織、肌肉組織中，本題研究的 E-cadherin存在于上皮組織中， P-cadherin存在胎盤組織中等。在此之中E-cadherin 與腫瘤的轉移關系密切，也是上皮間質(zhì)轉化過程當中的重要生物標識物，而多受研究者關注。人的E-cadherin編碼基因位于16號染色體q22.1附近，由723～748個氨基酸組成，分子量80～124KD，分子位于跨膜區(qū)。CC類趨化因子受體成員CCR7被證明在包含乳腺癌在內(nèi)的多種腫瘤的淋巴轉移中發(fā)揮著主要作用[2]，腫瘤轉移的過程包含腫瘤細胞向腫瘤細胞團外侵襲，向血管、淋巴管遷徙，然后經(jīng)此過程管道上的開口進入當中，沿著血管、淋巴管到達轉移部位。談及腫瘤細胞的侵襲，細胞外基質(zhì)(ECM)的降解是腫瘤細胞可以向外侵襲以及血管淋巴管開放的重要環(huán)節(jié)，而基質(zhì)金屬蛋白酶MMPs成員MMP-9 在這一過程中起到的作用極其重要。相關文獻報道MMP-9 可以降解E-cadherin 調(diào)節(jié)組織重塑、增殖和遷移，也能從胞外區(qū)近質(zhì)膜處將其分裂開[3]。在腫瘤細胞的定向遷移方面，趨化因子與其相應受體之間能為治療乳腺癌提供大量理論依據(jù)。本課題研究通過免疫組織化學方法測驗CCR7與E-cadherin兩因子在乳腺癌中的表達情況及對相關性進行分析。

1 資料與方法

1.1 標本來源 搜集在2017年7月—2018年11月佳木斯大學附屬第一醫(yī)院病理科80例乳腺浸潤性導管癌的石蠟包塊,取癌旁5cm組織45例，另取對應腋窩轉移淋巴結40例。術前均未行任何放化療、內(nèi)分泌治療及生物靶向治療，術后病理診斷明確，上述標本均常規(guī)制作石蠟包埋切片。

1.2 主要試劑 試劑包含兔抗人CCR7單克隆抗體，兔抗人 E-cadherin(bs-1016R，1∶200)蛋白單抗，和由北京博奧森生物技術有限公司生產(chǎn)PS法試劑盒和DAB顯色試劑，PBS磷酸鹽緩沖液緩沖液。

1.3 免疫組化 通過免疫組化方法(SABC)處理蠟塊，染色，研究CCR7、E-cadherin在浸潤性乳腺癌、轉移淋巴結及癌旁組織中的表達情況。

1.4 結果處理 在高倍鏡下進行觀察癌細胞數(shù)量，CCR7 和E-cadherin均以細胞膜和(或)細胞質(zhì)染色。幾乎不染色為陰性(-)；淺黃為弱陽性(+)；棕黃染陽性(++)；深棕染強陽性(+++)。

1.5 統(tǒng)計學方法 采用Spearman等級相關進行檢驗分析，用SPSS17.0軟件包處理本文數(shù)據(jù)；均以α=0.05作為測驗水準，P<0.05有意義。用χ2檢驗研究CCR7與E-cadherin在浸潤性乳腺癌中表達情況。

2 結果

2.1 CCR7、E-cadherin在乳腺中的表達 由表1所示可見，

表1 CCR7、E-cadherin在癌旁正常組織、浸潤性導管癌及轉移淋巴結的表達

注：*χ2=11.424，P<0.05，**χ2=15.374，P<0.05。

CCR7在乳腺癌、轉移淋巴結組織中的陽性表達率均高于癌旁正常組織，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。E-cadherin在乳腺浸潤性導管癌組織、轉移淋巴結及癌旁組織皆有表達,差異有統(tǒng)計學意義(χ2=15.374，P<0.05)，且E-cadherin在轉移淋巴結、癌旁組織中的陽性表達率均高于乳腺浸潤性導管癌組織，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。

2.2 CCR7、E-cadherin在乳腺癌組織中的表達與其臨床病理特征的關系 由表2可見，CCR7、E-cadherin與乳腺癌組織的組織分化水平、臨床TNM分期、淋巴結轉移情況顯著相關(P<0.05)，與患者年齡、腫塊大小及絕經(jīng)前后無相關性(P>0.05)。

表2 CCR7、E-cadherin在乳腺癌組織中的表達與其臨床病理特征的關系

2.3 乳腺癌組織和癌旁組織中CCR7與E-cadherin表達相關性 利用Spearman措施計算,剖析CCR7、E-cadherin二者在乳腺癌中的表達相關性，前者在乳腺癌組織中出現(xiàn)高表達，后者在癌旁組織中出現(xiàn)高表達。結果為CCR7與E-cadherin表達呈負相關性(r=-0.42)，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表3。

表3 乳腺癌組織和癌旁組織中CCR7與E-cadherin表達相關性

3 討論

乳腺癌最常見的轉移形式是經(jīng)過腋窩淋巴結轉移，其轉移部位包含骨、肝、肺，其中腎臟和皮膚部位的轉移較罕見。值得注意的是轉移是致使絕大多數(shù)癌癥患者復發(fā)以致死亡的主要影響因素。乳腺癌轉移現(xiàn)如今有兩種說法，第一種理論為“種子和土壤”學說，認為體內(nèi)各部位的組織器官給癌細胞供的生長條件是有差別的，因此具有相對特異性生長的腫瘤細胞。第二種認知是“歸巢理論”，癌癥的轉移是因為人來自身的器官能夠產(chǎn)生某些趨化因子，正是在這些趨化因子的介導下，癌細胞最終經(jīng)過富含趨化因子的器官的血管壁轉移到特定的部位[3]。研究乳腺癌細胞如何轉移，將對治療其復發(fā)、侵襲轉移帶來不小啟迪。研究表明，乳腺癌干細胞既是乳腺癌細胞群體中具備強大成瘤能力的細胞亞群，而且與乳腺癌發(fā)生發(fā)展、轉移、治療抵抗等多種生物學行為顯著相關。現(xiàn)今觀點認為，乳腺癌治療后復發(fā)轉移的根源是乳腺癌干細胞在化療、內(nèi)分泌治療中能夠發(fā)生抵抗。導致乳腺癌患者預后不良的重要因素是腫瘤發(fā)生轉移，而淋巴結是乳腺癌轉移最常見的部位。乳腺癌細胞侵襲進入微淋巴管是乳腺癌淋巴轉移的早期事件。Muller等提出了CCR7在乳腺癌組織中的異常表達與乳腺癌的轉移密切相關。最近大量研究發(fā)現(xiàn)CCR7在癌細胞轉移過程中起到主要作用。CCR類趨化因子受體主要在單核細胞、中性粒細胞、T細胞、B細胞和嗜酸性粒細胞及肺和肝等組織中表達。CC類趨化因子受體成員CCR7 與其配體CCL21的結合在乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展及淋巴轉移中發(fā)揮重要作用，很可能作為防止腫瘤轉移的靶點。大量研究表明在對黑色素瘤、甲狀腺癌、肝癌宮頸癌、肺癌等多種腫瘤的研究中發(fā)現(xiàn)CCR7的表達與腫瘤淋巴結轉移關系密切。因此，CCR7與其配體的相互作用在腫瘤的淋巴轉移過程中充當重要介質(zhì)。已有研究證明，CCR7活化后可以激活細胞外信號調(diào)節(jié)蛋白激酶1/2(Erk1/2)，而Erk1/2是MMP-2/9的上游信號分子,通過下調(diào)E-cadherin誘發(fā)上皮間質(zhì)轉化的發(fā)生[4]，從而促使乳腺癌多階段過程的發(fā)展，推測乳腺癌CSCs中CCR7可能通過活化Erk1/2促進腫瘤細胞 MMP-2/9的分泌，下調(diào)E-cadherin降解細胞外的基質(zhì)及破壞微淋巴管基底膜，為乳腺癌 CSCs轉移創(chuàng)造條件[5-7]。

本實驗通過免疫組化方法來檢測CCR7、E-cadherin在乳腺正常組織、乳腺浸潤性導管癌組織及轉移淋巴結中的表達與侵襲轉移情況的研究。檢測發(fā)現(xiàn)CCR7、E-cadherin在浸潤性導管癌組織、轉移淋巴結中的陽性率不同于癌旁組織的陽性率(P<0.05),揭示其在乳腺癌的惡變與轉移中能夠起到促成作用。CCR7、E-cadherin在有淋巴結轉移的陽性率高于無結轉移淋巴結組(P<0.05)。CCR7、E-cadherin在轉移淋巴結組織中的陽性率也較浸潤性乳腺癌組織陽性率相對高一些。上述結果說明，CCR7、E-cadherin可能與乳腺癌淋巴結的侵襲轉移有相關性，這兩種因子可能作為乳腺癌淋巴結轉移及預后的重要檢測目標。并且CCR7、E-cadherin在浸潤性乳腺癌的組織分化程度、臨床TNM分期及淋巴結轉移相關(P<0.05)，而與患者年齡、是否絕經(jīng)及腫瘤大小無相關性(P>0.05)。揭示兩者在轉移性淋巴結組織中陽性率高，與淋巴結轉移、臨床TNM分期及組織分化程度有關，證明了異常表達的CCR7、E-cadherin對浸潤性乳腺癌的進展過程可能起到一定作用，可認為是乳腺癌患者預后不良的標志。最后在乳腺癌組織中CCR7、E-cadherin呈現(xiàn)負相關(r=-0.42,P<0.05)，提示CCR7、E-cadherin在乳腺癌發(fā)生發(fā)展中起到對抗作用，并且CCR7能下調(diào)E-cadherin的表達,同時也預示在其高表達時可能有復發(fā)轉移的可能。本試驗檢測到CCR7、E-cadherin與浸潤性乳腺癌的產(chǎn)生侵襲及轉移有關,CCR7可能加強E-cadherin對細胞外基質(zhì)的破壞作用，從而腫瘤細胞通過趨化作用由細胞外基質(zhì)向遠處轉移。如果這個推論成立，將可能為乳腺癌的治療及防止其復發(fā)轉移提供很好的依據(jù)。