全文 陸興

（揚(yáng)州市第三人民醫(yī)院 江蘇 揚(yáng)州 225012）

HIV感染是一種特異性免疫系統(tǒng)功能受損為主要特點(diǎn)的全身性疾病，可以并發(fā)各種機(jī)會性感染[1]。結(jié)核是艾滋病患者最常見的威脅生命的機(jī)會性感染之一。AIDS合并結(jié)核時臨床癥狀復(fù)雜、體征多變，肺部影像學(xué)通常缺乏特異性，傳統(tǒng)的抗酸桿菌痰涂片和培養(yǎng)仍是肺部結(jié)核菌感染診斷的金標(biāo)準(zhǔn)，但分枝桿菌培養(yǎng)耗時長，總體陽性率低。HIV感染者一旦感染了結(jié)核分枝桿菌，會大大縮短發(fā)病的潛伏期.迅速發(fā)展為艾滋病并快速惡化至死亡。因此尋找HIV/AIDS患者合并結(jié)核病感染的快速診斷方法，及時控制HIV/AIDS患者結(jié)核分枝桿菌的感染具有十分重要的意義。結(jié)核感染TB-IGRA主要用于檢測結(jié)核感染后特異性T細(xì)胞分泌的干擾素(IFN-γ)，并據(jù)此結(jié)果判斷是否感染結(jié)核。本研究對揚(yáng)州市第三人民醫(yī)院，近年住院的HIV合并結(jié)核的患者的臨床資料進(jìn)行分析，探討TB-IGRA對于診斷結(jié)核的臨床價值。

1.資料與方法

1.1 一般資料

選取2016年6月-2018年6月?lián)P州市第三人民醫(yī)院收治的44例診斷為艾滋病合并結(jié)核病患者，根據(jù)其CD4+T淋巴細(xì)胞檢測計數(shù)分為三組，分別是CD4≤50 cells/ul、51cells/ul≤CD4≤200cells/ul、CD4≥201cells/ul，分析三組間TBIGRA陽性率的差異。

1.2 研究方法

TB-IGRA檢測：采用靜脈穿刺術(shù)，使用經(jīng)無菌工藝處理的肝素鈉或肝素鋰抗凝真空采血管采集全血樣本，采集量不低于4ml。

培養(yǎng)液的分裝：在生物安全柜內(nèi)將陰性對照培養(yǎng)液（N）、陽性對照培養(yǎng)液（P）和測試培養(yǎng)液（T）按照手柄方向自左向右依次加入至細(xì)胞培養(yǎng)板相應(yīng)孔內(nèi)，100uL/孔；

全血分裝：全血采集后在采血管中輕柔顛倒混勻3～5次，8小時之內(nèi)在生物安全柜內(nèi)將其分裝到細(xì)胞培養(yǎng)板相應(yīng)孔內(nèi)（含有“N”、“P”、“T”培養(yǎng)液各100uL），1.0mL/孔。

培養(yǎng)：蓋緊細(xì)胞培養(yǎng)板上蓋，迅速放入37℃電熱恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)16～24小時，培養(yǎng)過程中保持細(xì)胞培養(yǎng)板平放，不能顛倒。

收集：培養(yǎng)結(jié)束后，將細(xì)胞培養(yǎng)板放置于平整桌面上，靜置1分鐘小心開蓋，從每個細(xì)胞培養(yǎng)板孔中吸取上清進(jìn)行IFN-γ檢測。注意不可吸收到細(xì)胞層，防止溶血。

使用安圖A2000進(jìn)行檢測，輸出結(jié)果。

1.3.統(tǒng)計學(xué)方法

采用SAS 9.3軟件對不同檢測方法的檢測結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計分析，采用χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2.結(jié)果

2.1 不同CD4+淋巴細(xì)胞計數(shù)亞組TB-IGRA陽性的比較

我們將患者根據(jù)CD4+淋巴細(xì)胞計數(shù)分為三組分別是CD4≤50 cells/ul 、51 cells/ul≤CD4≤200cells/ul、CD4≥201cells/ul（見表1），經(jīng)卡方檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；第一組與第二組比較差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；第一組與第三組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；第二組與第三組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

表1 不同CD4+淋巴細(xì)胞計數(shù)亞組TB-IGRA的陽性例數(shù)[n(%)]

2.2 TB-IGRA陽性率與痰涂片陽性率對比

44例診斷為HIV感染合并結(jié)核患者中，TB-IGRA陽性20例（45.5%），痰涂片陽性17例（38.6%），TB-IGRA陽性率與痰涂片陽性率經(jīng)卡方檢驗(yàn)，差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），見表2。

表2.TB-IGRA陽性率與痰涂片陽性率對比[n(%)]

3.討論

結(jié)核病(TB)是艾滋病患者最為常見的并發(fā)癥，早期病原學(xué)陽性率低，不易被診斷，使艾滋病死亡率增高，目前在臨床上使用的諸多方法中，均不能同時有效保障高靈敏度和高特異性[2]。準(zhǔn)確診斷MTB感染、及時發(fā)現(xiàn)隱匿性TB并及早予以預(yù)防性用藥、合理制定高效抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療(HAART)和抗TB治療方案等是控制結(jié)核分枝桿菌感染、降低HIV感染者住院率及病死率的主要途徑。傳統(tǒng)的痰標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢查雖然是目前診斷結(jié)核病的金標(biāo)準(zhǔn)，但只有開放性結(jié)核病才能檢出，菌少時檢出困難，需多次送檢，且診斷時間延長[3]。因此除了傳統(tǒng)經(jīng)典的檢測方法，TB-IGRA是更快速更敏感的檢測方法，歐陽輝等[4]認(rèn)為TB-IGRA結(jié)果不會受到CD4+T淋巴細(xì)胞計數(shù)水平影響，可以避免因HIV感染后細(xì)胞免疫功能受損而產(chǎn)生的假陰性結(jié)果。但越來越多研究[5]表明，TB-IGRA結(jié)果與外周血CD4+T淋巴細(xì)胞的數(shù)量有關(guān)，當(dāng)機(jī)體處于嚴(yán)重免疫抑制狀態(tài)時，TB-IGRA結(jié)果容易出現(xiàn)假陰性。本研究中44例診斷為HIV感染合并結(jié)核者，CD4≤50cells/ul 9例（20.4%），51cells/ul≤CD4≤200cells/ul 16例（36.4%），CD4≥201cells/ul 19例（43.2%），隨著CD4+淋巴細(xì)胞計數(shù)的增加，TB-IGRA的陽性率逐漸升高，且組間對比有統(tǒng)計學(xué)差異，表明CD4+淋巴細(xì)胞計數(shù)對TB-IGRA的陽性率有著顯著的影響，對于CD4+T淋巴細(xì)胞計數(shù)低的患者尤其是小于等于50cells/ul的患者TB-IGRA實(shí)驗(yàn)的靈敏度明顯降低。

國外的一些研究[6]顯示，HIV陽性的結(jié)核患者中TB-IGRA陽性率可達(dá)90%，但本研究中HIV感染合并結(jié)核患者TB-IGRA陽性率為45.5%，相比而言靈敏度大減，可能原因是樣本量較少，且樣本取自住院HIV陽性的結(jié)核患者，免疫功能更為低下，檢驗(yàn)誤差也不能排除。有研究[7]表明：在HIV合并結(jié)核病人群中TB-IGRA的敏感性和特異性高于痰涂片、PPD，本研究顯示TBIGRA陽性20例（45.5%），痰涂片陽性17例（38.6%），TBIGRA陽性率與痰涂片陽性率經(jīng)卡方檢驗(yàn)，差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義，沒有提示TB-IGRA的敏感性優(yōu)于傳統(tǒng)痰涂片，但是痰涂片往往需多次送檢，檢出時間長[8]，尤其對于HIV患者往往會耽誤治療時間造成住院時間延長住院費(fèi)用升高，TB-IGRA的方便快捷可以為臨床醫(yī)師的診斷提供更快的支持。

綜上所述，TB-IGRA為臨床醫(yī)生診斷或篩查結(jié)核提供了快速便捷的方法，但CD4+T淋巴細(xì)胞計數(shù)對TB-IGRA結(jié)果影響較大，仍需綜合判斷。