潘 成 屈 瀟 秦環(huán)龍

結(jié)直腸癌(colorectal cancer, CRC)是我國(guó)致死率排名第五的惡性腫瘤，每年新增病例約37.6萬(wàn)例，死亡19.1萬(wàn)例[1]。約30%～50%的CRC患者術(shù)后發(fā)生轉(zhuǎn)移，由于缺乏準(zhǔn)確的生物學(xué)標(biāo)志物，不利于判斷患者的預(yù)后[2]。微RNA(miRNA)是一類由18～25個(gè)堿基組成的單鏈非編碼RNA，其通過(guò)誘導(dǎo)沉默復(fù)合物調(diào)節(jié)靶基因表達(dá)，參與疾病的發(fā)生和發(fā)展[3]。miRNA-17-92基因簇是一種常見(jiàn)的“癌miRNA”，位于13號(hào)染色體的非蛋白編碼區(qū)(13q31.3)，可轉(zhuǎn)錄為6個(gè)miRNA(miRNA-17、miRNA-18a、miRNA-19a、miRNA-20a、miRNA-19b-1和miRNA-92a-1)[4-6]。其中，miRNA-17在腸黏膜上皮細(xì)胞中的表達(dá)量最高；在正常、腺瘤、腫瘤組織中，miRNA-17的表達(dá)量逐步增高，能夠靶向調(diào)節(jié)P130并激活Wnt信號(hào)通路，密切參與CRC的發(fā)生和發(fā)展[7-8]。近來(lái)研究[9-10]發(fā)現(xiàn)，miRNA-17亦能激活T淋巴細(xì)胞，發(fā)揮腫瘤抑制因子的作用。miRNA-17判斷CRC患者預(yù)后的價(jià)值仍不清晰，尚需進(jìn)一步在大樣本隊(duì)列中驗(yàn)證。

2006年，癌癥基因組圖譜(the cancer genome atlas，TCGA)計(jì)劃正式啟動(dòng)。TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)可提供大量基于RNA測(cè)序技術(shù)檢測(cè)的CRC患者組織標(biāo)本的miRNA表達(dá)譜數(shù)據(jù)，有利于系統(tǒng)地評(píng)估m(xù)iRNA的臨床意義。本研究基于TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)，探討CRC患者腫瘤組織miRNA-17表達(dá)與臨床病理的關(guān)系，以進(jìn)一步明確miRNA-17對(duì)CRC患者預(yù)后判斷的意義。

1 資料與方法

1.1 數(shù)據(jù)提取和篩選 通過(guò)TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)(http:∥cancergenome.nih.gov/)獲取截至2018年1月的CRC患者miRNA-17表達(dá)數(shù)據(jù)和相關(guān)臨床病理信息，包括年齡、性別、腫瘤TNM分期、隨訪資料等。所有納入對(duì)象均符合以下標(biāo)準(zhǔn)：①miRNA-17的表達(dá)水平和相關(guān)臨床資料均可獲取和分析；②隨訪時(shí)間>60 d。排除標(biāo)準(zhǔn)：隨訪期間因非CRC相關(guān)并發(fā)癥或意外事件死亡者。本研究遵循醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)原則。

2 結(jié) 果

2.1 腫瘤組織與正常組織中miRNA-17的表達(dá) 本研究共納入612例CRC患者的612個(gè)腫瘤組織和11個(gè)癌旁組織樣本，其中獲取完整隨訪信息372例(結(jié)腸癌271例、直腸癌101例)，男197例、女175例，miRNA-17高表達(dá)190例、低表達(dá)182例，患者平均年齡為(65.66±13.24)歲，腫瘤TNM分期Ⅰ期73例、Ⅱ期124例、Ⅲ期113例、Ⅳ期62例，平均隨訪時(shí)間為(27.65±21.21)個(gè)月。腫瘤組織中miRNA-17表達(dá)水平為1 061.00±29.24，顯著高于正常組織中的82.18±11.40(P<0.001)。

2.2 CRC患者臨床特征與miRNA-17表達(dá)的關(guān)系 術(shù)前血清CEA水平增高(≥5 μg/L)者的miRNA-17表達(dá)水平顯著高于正常者(<5 μg/L，P=0.009)，而兩組間性別、年齡、腫瘤TNM分期、腫瘤浸潤(rùn)(T分期)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(N分期)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移(M分期)的差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值均>0.05)。見(jiàn)表1。

2.3 miRNA-17表達(dá)水平與CRC患者的DFS和OS相關(guān)性 Kaplan-Meier生存曲線和Log-rank檢驗(yàn)分析結(jié)果顯示，miRNA-17高表達(dá)患者的DFS和OS分別為23.6 (14.5,37.5)和24.4(13.2,41.5)個(gè)月，miRNA低表達(dá)患者的DFS和OS分別為21.4(12.7,31.4)和21.5(13.2,35.5)個(gè)月，miRNA-17高、低表達(dá)患者間DFS和OS的差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值均>0.05)，提示miRNA-17表達(dá)水平與CRS患者的DFS和OS均不相關(guān)。見(jiàn)圖1、2。

表1 CRC患者臨床病理特征與miRNA-17表達(dá)的關(guān)系 (N=372, n)

圖1 miRNA-17表達(dá)水平與結(jié)直腸癌患者DFS的關(guān)系

2.4 單因素和多因素COX回歸分析影響患者DFS和OS的危險(xiǎn)因素 單因素COX回歸分析結(jié)果顯示，腫瘤浸潤(rùn)(HR=2.838，95%CI為1.134～7.104，P=0.025)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(HR=2.780，95%CI為1.626～4.752，P<0.001)、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移(HR=3.361，95%CI為2.012～5.613，P<0.001)、術(shù)前CEA水平(HR=2.530，95%CI為1.510～4.239，P<0.001)和腫瘤TNM分期[Ⅲ期(HR=3.805，95%CI為1.114～13.000，P=0.033)、Ⅳ期(HR=12.090，95%CI為3.631～40.250，P<0.001)]是影響CRC患者DFS和OS的危險(xiǎn)因素；而性別(HR=0.926，95%CI為0.555～1.545，P=0.768)、年齡(HR=1.769，95%CI為0.970～3.224，P=0.062)、miRNA-17表達(dá)水平(HR=0.859，95%CI為0.515～1.433，P=0.561)均不是影響CRC患者DFS和OS的危險(xiǎn)因素。

圖2 miRNA-17表達(dá)水平與結(jié)直腸癌患者OS的關(guān)系

多因素COX回歸分析結(jié)果顯示，年齡(HR=2.562，95%CI為1.355～4.844，P=0.003)和腫瘤TNM分期[Ⅲ期(HR=11.854，95%CI為1.266～111.032，P=0.030)、Ⅳ期(HR=27.482，95%CI為2.846～265.349，P=0.004)]是影響CRC患者OS的危險(xiǎn)因素；而性別(HR=0.682，95%CI為0.392～1.185，P=0.174)、腫瘤浸潤(rùn)(HR=0.832，95%CI為0.196～3.524，P=0.802)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(HR=0.419，95%CI為0.121～1.451，P=0.170)、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移(HR=1.220，95%CI為0.520～2.861，P=0.647)、術(shù)前CEA水平(HR=1.521，95%CI為0.835～2.771，P=0.170)、miRNA-17水平(HR=0.749，95%CI為0.438～1.281，P=0.291)均不是影響患者OS的危險(xiǎn)因素。性別(HR=1.495，95%CI為0.842～2.656，P=0.169)、年齡(HR=0.609，95%CI為0.348～1.065，P=0.082)、腫瘤TNM分期[Ⅲ期(HR=4.869，95%CI為4.869，P=0.258)、Ⅳ期(HR=6.835，95%CI為0.440～106.158，P=0.169)]、腫瘤浸潤(rùn)(HR=0.581，95%CI為0.136～2.493，P=0.465)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(HR=1.164，95%CI為0.148～9.162，P=0.885)、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移(HR=1.788，95%CI為0.820～3.897，P=0.143)、術(shù)前CEA水平(HR=1.806，95%CI為0.988～3.302，P=0.054)、miRNA-17水平(HR=0.671，95%CI為0.388～1.161，P=0.153)均不是影響CRC患者DFS的危險(xiǎn)因素。

3 討 論

miRNA-17-92基因簇是“癌miRNA”研究熱點(diǎn)之一，該基因的轉(zhuǎn)錄激活與原癌基因c-myc、E2F轉(zhuǎn)錄因子家族和p53等密切相關(guān)，在幾乎所有實(shí)體腫瘤(如結(jié)直腸癌、胃癌、肺癌、肝癌等)中均表達(dá)紊亂[11-12]。體外實(shí)驗(yàn)證實(shí)，miRNA-17能夠靶向作用于P130(視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤樣2)，激活Wnt/β-連環(huán)蛋白(β-catenin)通路[8]；并且與miRNA-106a/b和miRNA-20a/b協(xié)同作用于γ-氨基丁酸B型受體1，參與調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、分化和凋亡[13]。miRNA-17還可充當(dāng)腫瘤抑制因子阻礙血管再生和疾病進(jìn)展[9-10]。本研究通過(guò)分析TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)中CRC患者的miRNA-17表達(dá)，發(fā)現(xiàn)其在腫瘤組織中的表達(dá)水平明顯增高，術(shù)前血清CEA水平升高(≥5 μg/L)的患者miRNA水平升高更明顯；Kaplan-Meier生存曲線分析結(jié)果顯示，miRNA-17表達(dá)水平與CRC患者的OS、DFS均無(wú)關(guān)，并非影響CRC患者預(yù)后的危險(xiǎn)因素。

腫瘤發(fā)生與胚胎發(fā)育存在共同的調(diào)節(jié)通路[14-15]。如胚胎干細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞均呈現(xiàn)過(guò)度增殖、缺乏分化的特征；腫瘤細(xì)胞在侵襲和轉(zhuǎn)移過(guò)程中，存在與胎盤細(xì)胞植入類似的分子機(jī)制[16]。已有研究[17]證實(shí)，許多miRNA參與胚胎發(fā)育和癌變的基本過(guò)程，miRNA在人胚結(jié)腸和CRC組織中存在交叉表達(dá)[16]。Ma等[18]研究發(fā)現(xiàn)，人胚胎干細(xì)胞和轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸癌細(xì)胞中均有miRNA-26b表達(dá)。Monzo等[16]研究發(fā)現(xiàn)，早期胚胎結(jié)腸上皮細(xì)胞中miRNA-17表達(dá)水平增高，miRNA-17能夠下調(diào)E2F1表達(dá)，影響胚胎結(jié)腸發(fā)育和CRC細(xì)胞增殖。CEA在胚胎的消化管組織和內(nèi)胚葉起源的消化系統(tǒng)腫瘤組織中也廣泛表達(dá)，兩者表達(dá)是否具有協(xié)同性目前尚未明確。本研究結(jié)果顯示，術(shù)前血清CEA水平升高的患者miRNA-17表達(dá)水平明顯高于CEA水平正常的患者，提示miRNA-17具有胎源性特征。

有研究[8,19]發(fā)現(xiàn)，miRNA-17可作為判斷CRC預(yù)后的標(biāo)志物，miRNA-17表達(dá)水平增高的患者OS明顯縮短，對(duì)化學(xué)治療的反應(yīng)更敏感。Volinia等[11]的研究發(fā)現(xiàn)，肝癌組織中miRNA-17-92家族表達(dá)水平與肝癌患者的生存率呈負(fù)相關(guān)。然而，Liu等[20]的研究結(jié)果表明，miRNA-17-92家族過(guò)表達(dá)是乳腺癌、淋巴瘤患者OS縮短的危險(xiǎn)因素，而不是影響CRC、肝癌、膠質(zhì)瘤和前列腺癌患者OS的危險(xiǎn)因素。本研究結(jié)果顯示，miRNA-17不是CRC患者的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，其表達(dá)水平與患者的DFS和OS均無(wú)關(guān)。考慮目前研究結(jié)果產(chǎn)生分歧的原因如下。①遺傳背景差異：一項(xiàng)meta分析結(jié)果表明，miRNA-17-92基因過(guò)表達(dá)與亞洲人的OS和DFS縮短相關(guān)，而不是影響白種人OS和DFS的危險(xiǎn)因素。Shen等[21]研究發(fā)現(xiàn)，不同族群miRNA表達(dá)模式可能截然不同。②樣本量不足：因樣本量小和檢測(cè)方法存在差異，對(duì)研究結(jié)果造成偏倚。利用TCGA數(shù)據(jù)評(píng)估m(xù)iRNA來(lái)判斷CRC患者的預(yù)后，具有樣本量大、檢測(cè)方法較一致等特點(diǎn)，其結(jié)果較meta分析結(jié)果更可靠。③生物學(xué)功能：miRNA-17可能為疾病早期階段的驅(qū)動(dòng)因子。但值得注意的是，單個(gè)miRNA與多個(gè)miRNA組合作為判斷預(yù)后的標(biāo)志物亦存在區(qū)別。

綜上所述，通過(guò)分析CRC患者TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)的miRNA和臨床特征，發(fā)現(xiàn)miRNA-17與術(shù)前血清CEA表達(dá)水平相關(guān)，但miRNA-17不能作為影響CRC患者OS、DFS的危險(xiǎn)因素。