廖瑟靜，翁競玉，石榆鋒，覃琦珊，張曉月，梁小潔，李麗

（廣西中醫(yī)藥大學(xué)，廣西南寧530001）

近年來隨著人民生活水平的提高和生活方式的改變，對(duì)酒類的消費(fèi)也日益增多，過量飲酒已經(jīng)成為全世界范圍內(nèi)極受關(guān)注的社會(huì)公共問題。一次大量飲酒會(huì)引發(fā)急性酒精中毒，對(duì)機(jī)體健康產(chǎn)生嚴(yán)重危害，例如致心腦血管疾病、神經(jīng)系統(tǒng)疾病、消化不良、代謝紊亂及營養(yǎng)失調(diào)等[1-2]。隨著急性酒精中毒發(fā)病率逐年增高，開發(fā)有效的解酒藥物、緩解酒精中毒癥狀也顯得愈發(fā)必要。檜木純露為檜木植物蒸餾精油后所得的冷凝水溶液，含有黃酮類、萜烯類、槲皮素、鞣質(zhì)等多種成分，具有良好的抗氧化、清除自由基、抗炎等活性，人們?cè)谏钌弦言囉糜诮饩迫ニ拮?、提神醒腦，發(fā)現(xiàn)有較好的療效[3-5]。本項(xiàng)目通過小鼠防醉及醒酒實(shí)驗(yàn)，考察檜木純露的解酒作用；通過構(gòu)建小鼠酒精性肝損傷模型，觀察檜木純露的預(yù)防保護(hù)作用，并初步探討其作用機(jī)制。為進(jìn)一步深入研究檜木產(chǎn)品的藥用及保健價(jià)值提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

檜木純露：四川檜元素生物有限公司；海王金樽：深圳市海王健康科技發(fā)展有限公司，將海王金樽研磨后配成1g/mL 的混懸液備用；56 度二鍋頭白酒：北京紅星股份有限公司；天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（aspartate aminotransferase，AST）、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（alanine aminotransferase，ALT）、丙二醛（malondialdehyde，MDA）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）試劑盒：南京建成生物工程研究所。

清潔級(jí)昆明種小鼠：雄性，體重（20±2）g，購自成都達(dá)碩實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK（川）2008-24。飼養(yǎng)環(huán)境溫度為（23±2）℃，濕度為40%～60%，明暗交替周期為12 h。

1.2 儀器與設(shè)備

低溫高速離心機(jī)（H1650R）：湘儀離心機(jī)儀器有限公司；高速離心機(jī)（L530）：長沙湘儀離心機(jī)儀器公司；7200 型可見分光光度計(jì)：上海龍尼柯儀器有限公司；恒溫水浴箱（HHSYZL-Ni）：北京長風(fēng)儀器公司；微量加樣器：Eppendorf 公司；玻璃勻漿管：上海壘固儀器有限公司。

1.3 方法

1.3.1 防醉實(shí)驗(yàn)

取雄性小鼠50只，適應(yīng)性喂養(yǎng)3 d 后隨機(jī)分為模型組、海王金樽陽性對(duì)照組（0.15 mL/10 g）、檜木純露高、中、低劑量組（0.2 mL/10 g、0.15 mL/10 g、0.1 mL/10 g）。禁食不禁水12 h 后，各給藥組給予相應(yīng)藥物預(yù)防，模型組灌以生理鹽水（0.15 mL/10 g）。給藥30 min 后，各組小鼠灌胃給予56 度紅星二鍋頭（0.15 mL/10 g），觀察小鼠醉酒潛伏期（從灌酒到翻正反射消失的時(shí)間）、醒酒時(shí)間（從灌酒到翻正反射恢復(fù)時(shí)間）。

1.3.2 醒酒實(shí)驗(yàn)

動(dòng)物分組同1.3.1。各組小鼠灌胃給予56 度紅星二鍋頭0.15 mL/10 g，5 min 后，除模型組給予生理鹽水，其余組小鼠分別灌胃給予相應(yīng)藥物治療。記錄小鼠醉酒潛伏期及醒酒時(shí)間。

1.3.3 對(duì)酒精性肝損傷的保護(hù)作用

取雄性小鼠60 只，適應(yīng)性喂養(yǎng)3 d 后隨機(jī)分為空白組、模型組、海王金樽陽性對(duì)照組（0.15 mL/10 g）、檜木純露高、中、低劑量組（0.2 mL/10 g、0.15 mL/10 g、0.1 mL/10 g）。每日空白組與模型組給予等體積的生理鹽水，各給藥組每日灌胃相應(yīng)劑量藥物進(jìn)行保護(hù)，30 min 后除空白組外，其余各組以0.15 mL/10 g 灌胃56 度紅星二鍋頭，持續(xù)14 d。

最后一天灌胃結(jié)束30 min 后，小鼠眼球取血處死，分離血清，解剖取肝臟，用預(yù)冷的生理鹽水漂洗后稱重，計(jì)算臟器系數(shù)。

1.3.4 血清中AST、ALT 的測定

AST 及ALT 的測定方法參照試劑盒說明書。將5 μL 待測樣本加入基質(zhì)液中，再依次與2.4-二硝基苯肼、0.4 mmol/L 氫氧化鈉溶液反應(yīng)，后在510 nm 波長下測定各復(fù)孔A值。通過標(biāo)準(zhǔn)曲線法求得各樣本相應(yīng)的AST、ALT 活力單位。

1.3.5 肝臟中氧化/抗氧化相關(guān)指標(biāo)的測定

肝臟組織中SOD 的測定采用水溶性四唑鹽法，參照試劑盒說明書操作后于450 nm 處測定各復(fù)孔A值。MDA 的測定使用硫代巴比妥酸法，參照試劑盒說明書操作后于532 nm 處測定各復(fù)孔A值。

式中：A0為未添加樣品的對(duì)照組吸光度值；A1為添加樣品的實(shí)驗(yàn)組吸光度值。

1.3.6 數(shù)據(jù)處理方法

數(shù)據(jù)均采用±s表示，并采用SPSS19.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，組間比較采用t 檢驗(yàn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 防醉實(shí)驗(yàn)

實(shí)驗(yàn)小鼠防醉實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1。

表1 小鼠防醉實(shí)驗(yàn)結(jié)果（±s，n=10）Table 1 Results of experiment on preventing drunkenness in mice（±s，n=10）

表1 小鼠防醉實(shí)驗(yàn)結(jié)果（±s，n=10）Table 1 Results of experiment on preventing drunkenness in mice（±s，n=10）

注：與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01。

組別 醉酒潛伏期/min 醒酒時(shí)間/min模型組 3.45±1.65 292.73±39.28陽性藥組 8.69±2.31** 261.94±47.90**檜木純露高劑量組 7.29±2.73** 254.35±50.66**檜木純露中劑量組 6.57±1.44** 263.28±41.27*檜木純露低劑量組 4.12±1.92* 279.01±37.41*

由表1可見，與模型組小鼠比較，灌胃白酒前給予不同劑量的檜木純露和陽性藥的小鼠醉酒潛伏期延長（P<0.01 或P<0.05），醒酒時(shí)間縮短（P<0.01 或P<0.05）。

2.2 解酒實(shí)驗(yàn)

實(shí)驗(yàn)小鼠解酒實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表2。

由表2可見，與模型組比較，灌白酒后再灌胃給予不同劑量的檜木純露和陽性藥的小鼠醉酒潛伏期延長（P<0.01 或P<0.05），醒酒時(shí)間顯著縮短（P<0.01）。

2.3 對(duì)酒精性肝損傷的保護(hù)作用

2.3.1 對(duì)肝臟系數(shù)的影響

對(duì)酒精性肝損傷小鼠肝臟系數(shù)影響結(jié)果見表3。

表2 實(shí)驗(yàn)小鼠解酒實(shí)驗(yàn)結(jié)果（±s，n=10）Table 2 Results of experiment on relieving alcoholism in mice（±s，n=10）

表2 實(shí)驗(yàn)小鼠解酒實(shí)驗(yàn)結(jié)果（±s，n=10）Table 2 Results of experiment on relieving alcoholism in mice（±s，n=10）

注：與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01。

組別 醉酒潛伏期/min 醒酒時(shí)間/min模型組 3.12±1.30 276.6±44.86陽性藥組 5.67±0.91** 237±65.28**檜木純露高劑量組 6.11±1.67** 242.4±48.60**檜木純露中劑量組 5.33±1.42* 249±37.08**檜木純露低劑量組 6.02±1.22** 252±54.62**

表3 對(duì)酒精性肝損傷小鼠肝臟系數(shù)的影響（±s）Table 3 Effect on liver index in mice induced by ethanol（±s）

表3 對(duì)酒精性肝損傷小鼠肝臟系數(shù)的影響（±s）Table 3 Effect on liver index in mice induced by ethanol（±s）

注：與空白組比較，##P<0.01；與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01。

組別 n 肝臟系數(shù)空白組 10 4.35±1.02模型組 8 6.80±0.81##陽性藥組 10 4.57±0.36**檜木純露高劑量組 10 4.67±0.61**檜木純露中劑量組 10 4.89±0.97*檜木純露低劑量組 9 5.06±0.56*

由表3可見，模型組中酒精性肝損傷小鼠的肝臟系數(shù)較空白組小鼠顯著升高（P<0.01），給予檜木純露和陽性藥保護(hù)的小鼠肝臟系數(shù)較模型組降低（P<0.01或P<0.05）。

2.3.2 對(duì)血清AST 和ALT 的影響

對(duì)小鼠血清中AST 和ALT 活性影響結(jié)果見表4。

表4 對(duì)小鼠血清中AST 和ALT 活性的影響（±s）Table 4 Effects on levels of AST and ALT in serum in mice（±s）

表4 對(duì)小鼠血清中AST 和ALT 活性的影響（±s）Table 4 Effects on levels of AST and ALT in serum in mice（±s）

注：與空白組比較，##P<0.01；與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01。

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由表4可見，給藥14 d 后，與空白組比較，模型組小鼠血清AST 和ALT 活性顯著升高（P<0.01）；與模型組比較，陽性藥組和檜木純露高、中劑量組顯著降低（P<0.01 或P<0.05），但檜木純露低劑量組AST 和ALT活性無顯著性差異。

2.3.3 對(duì)肝臟SOD 活性和MDA 含量的影響

對(duì)小鼠肝臟SOD 活性和MDA 含量影響結(jié)果見表5。

由表5可見，與空白組比較，模型組小鼠肝臟內(nèi)SOD 活性顯著降低（P<0.01），MDA 的水平顯著升高（P＜0.01）；與模型組比較，陽性藥組與檜木純露各劑量組SOD 的活性升高（P＜0.01 或P＜0.05）。MDA 水平顯著降低（P＜0.01）。

表5 對(duì)小鼠肝臟SOD 活性和MDA 含量的影響（±s）Table 5 Effects on levels of SOD and MDA in liver in mice（±s）

表5 對(duì)小鼠肝臟SOD 活性和MDA 含量的影響（±s）Table 5 Effects on levels of SOD and MDA in liver in mice（±s）

注：與空白組比較，##P＜0.01；與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。

組別 n SOD/（U/mgprot） MDA/（mmol/gprot）空白組 10 166.34±30.56 0.51±0.12模型組 8 109.11±31.24## 1.96±0.57##陽性藥組 10 143.29±25.70** 1.04±0.31**檜木純露高劑量組 10 150.62±20.16** 1.23±0.46**檜木純露中劑量組 10 134.48±32.02** 1.19±0.25**檜木純露低劑量組 9 121.65±38.69* 1.30±0.44**

3 結(jié)論與討論

近些年來，因?yàn)槿藗兩钏降脑龈?，人均飲酒量的上升造成酒精性肝病的發(fā)病率也逐年上升，成為僅次于病毒性肝炎的第二大肝病[6]。一次大量飲酒會(huì)引發(fā)急性酒精中毒，嚴(yán)重影響身體健康，危害社會(huì)安定。急性酒精中毒可對(duì)機(jī)體產(chǎn)生嚴(yán)重?fù)p害，例如致心腦血管疾病、神經(jīng)系統(tǒng)疾病、消化不良、代謝紊亂及營養(yǎng)失調(diào)等疾病。隨著急性酒精中毒發(fā)病率逐年增高，對(duì)其進(jìn)行防治也顯得愈發(fā)重要。

乙醇進(jìn)入機(jī)體后約90%～95%在肝臟內(nèi)被氧化代謝，加快乙醇在體內(nèi)代謝的機(jī)理包括加快肝臟中乙醇的氧化代謝、增強(qiáng)清除自由基的能力等。ALT 主要存在于肝細(xì)胞漿內(nèi)，當(dāng)肝細(xì)胞損傷時(shí)，細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)氨酶可進(jìn)入血中，引起血ALT 升高。AST 也存在于肝細(xì)胞漿內(nèi)，AST 并分布于線粒體內(nèi)，當(dāng)肝細(xì)胞損害嚴(yán)重時(shí)，線粒體內(nèi)AST 釋放入血，因此轉(zhuǎn)氨酶是肝細(xì)胞損害的敏感標(biāo)志，也是乙醇所致肝損傷較敏感且常見的指標(biāo)[7]。酒精攝入過多會(huì)導(dǎo)致肝組織的抗氧化物質(zhì)消耗增加，SOD 水平下降。MDA 是脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的終產(chǎn)物，能反映組織中自由基的含量和自由基引發(fā)的脂質(zhì)過氧化程度[8]。

檜木是裸子植物中扁柏屬的一種植物，檜木純露為檜木植物蒸餾所得的冷凝水溶液。檜木純露中除了含有少量精油成分之外，還含有全部植物體內(nèi)的水溶性物質(zhì)。擁有百分之百植物水溶性物質(zhì)的純露，其所含礦物養(yǎng)分（如單寧酸及類黃酮）是精油所缺乏的，其低濃度的特性容易被皮膚所吸收，完全無香精及酒精成份，溫和不刺激。有研究表明，檜木純露具有很好的抗氧化效果，對(duì)羥基自由基（·OH）具有一定的清除作用，對(duì)超氧自由基具有明顯的抑制作用，可發(fā)揮抗炎、護(hù)肝等作用，檜木其葉子的主要化學(xué)成分是揮發(fā)油、黃酮類、鞣質(zhì)等[9-11]，而萜類和黃酮類化合物對(duì)ConA 致小鼠免疫性肝損傷均具有一定的保肝作用[12]。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在防醉實(shí)驗(yàn)和解酒實(shí)驗(yàn)中，檜木純露均可延長小鼠的醉酒潛伏期，且縮短醒酒時(shí)間（P＜0.01 或P＜0.05）。在酒精性肝損傷實(shí)驗(yàn)中，檜木純露能緩解酒精對(duì)小鼠肝臟系數(shù)的影響（P＜0.01 或P＜0.05），降低血清中ALT、AST 水平（P＜0.01 或P＜0.05）及肝臟內(nèi)MDA 含量（P＜0.01），升高SOD 活性（P＜0.01或P＜0.05），有效緩解酒精對(duì)肝臟的損傷，增強(qiáng)抗氧化能力，減輕過氧化損傷，為檜木作為具有抗氧化能力、護(hù)肝作用的保健食品提供了一定的理論研究依據(jù)。

檜木純露具有顯著的防醉解酒作用，可增強(qiáng)酒精中毒小鼠的抗氧化能力，對(duì)小鼠酒精性肝損傷具有一定的保護(hù)作用。檜木純露有望進(jìn)一步開發(fā)成為解酒護(hù)肝的保健食品，其有效成分和作用機(jī)制還需更深入的研究。