王 曉，畢永賢，錢舒敏，劉紅艷，葉 迎，蔣麗剛

（珀萊雅化妝品股份有限公司，浙江 杭州 310012）

斑貼試驗(yàn)對(duì)《化妝品皮膚病診斷標(biāo)準(zhǔn)及處理原則》（GB17149.1-17149.7-1997）中定義的6種化妝品不良反應(yīng)的評(píng)價(jià)作用如下：化妝品接觸性皮炎：占化妝品皮膚病的70%～90%，包括刺激性接觸性皮炎和變應(yīng)性接觸性皮炎，多種改進(jìn)的斑貼方法主要圍繞其進(jìn)行試驗(yàn)研究，并具有區(qū)分和確診價(jià)值；化妝品痤瘡：通過(guò)斑貼進(jìn)行的致粉刺試驗(yàn)，對(duì)化妝品產(chǎn)品是否會(huì)引起潛在的黑頭、粉刺、痤瘡等癥狀有著重要的評(píng)估意義；化妝品毛發(fā)損害：一般而言，斑貼試驗(yàn)對(duì)化妝品毛發(fā)損害的臨床診斷意義不大；化妝品甲損害：?jiǎn)为?dú)甲板損害無(wú)需進(jìn)行斑貼試驗(yàn)，若有甲周皮膚損害，斑貼試驗(yàn)具有臨床診斷意義；化妝品光感性皮炎：特殊的光斑貼試驗(yàn)，針對(duì)化妝品誘發(fā)的光變應(yīng)性、光毒性等皮膚癥狀；化妝品皮膚色素異常：對(duì)于炎癥后色素沉著，斑貼試驗(yàn)結(jié)果對(duì)最終的臨床診斷有一定參考作用。由此可見，斑貼試驗(yàn)不僅是診斷化妝品接觸性皮炎的金標(biāo)準(zhǔn)[1]，還對(duì)其他化妝品不良反應(yīng)的評(píng)估及診斷起到重要作用[2]。

1 斑貼試驗(yàn)的分類

根據(jù)來(lái)源對(duì)化妝品斑貼試驗(yàn)進(jìn)行分類。從方法學(xué)來(lái)講，針對(duì)每種斑貼方法的應(yīng)用性，又進(jìn)行了評(píng)估性或診斷性歸類。評(píng)估性斑貼試驗(yàn)，多用于產(chǎn)品安全性評(píng)價(jià)，受試對(duì)象為健康志愿者，受試物多為化妝品終產(chǎn)物等待檢樣品，需嚴(yán)格控制受試物劑量，受試時(shí)間依規(guī)范要求通常為24 h，一般在去除受試物后0.5 h、24 h、48 h觀察皮膚反應(yīng)，報(bào)告中不區(qū)分刺激性或變應(yīng)性反應(yīng)，評(píng)估結(jié)論以群體為基礎(chǔ)；診斷性斑貼試驗(yàn)，多用于化妝品皮膚病的診斷或?qū)ふ姨囟ㄟ^(guò)敏原，受試對(duì)象多為皮膚病患者，受試物以標(biāo)準(zhǔn)系列變應(yīng)原（多為歐洲標(biāo)準(zhǔn)變應(yīng)原系列中的26個(gè)檢測(cè)抗原）[3]或自制變應(yīng)原（可以是單一物質(zhì)、混合物或具有代表性的成分結(jié)構(gòu)）為主[4,5]，劑量限定相對(duì)不嚴(yán)格，常規(guī)的最基本的致敏性斑貼試驗(yàn)受試時(shí)間為48 h，一般在去除變應(yīng)原后0.5 h、72 h、96 h和7 d后觀察皮膚反應(yīng)，結(jié)果判讀需區(qū)分是刺激性反應(yīng)或變應(yīng)性反應(yīng)，診斷結(jié)論針對(duì)受試者個(gè)體。

1.1 規(guī)范內(nèi)的斑貼試驗(yàn)

《化妝品安全技術(shù)規(guī)范2015版》中規(guī)定的人體斑貼試驗(yàn)包括：①皮膚（單次）封閉型斑貼試驗(yàn)；②皮膚重復(fù)性開放型涂抹試驗(yàn)，詳細(xì)的試驗(yàn)流程及適用范圍，請(qǐng)參考規(guī)范內(nèi)容，文章不做贅述，以上2種方法均屬于評(píng)估性斑貼試驗(yàn)。

規(guī)范描述到“斑貼試驗(yàn)適用于檢測(cè)化妝品產(chǎn)品對(duì)人體皮膚潛在的不良反應(yīng)”，而未提及這“不良反應(yīng)”往往有兩種情況：刺激性反應(yīng)或過(guò)敏性反應(yīng)。前者不涉及免疫應(yīng)答過(guò)程（即致敏過(guò)程），刺激反應(yīng)的程度主要與刺激物濃度及接觸皮膚時(shí)間有關(guān)，只要刺激性超出皮膚耐受的閾值，任何使用者都會(huì)發(fā)生陽(yáng)性反應(yīng)。后者則屬于一種遲發(fā)性免疫應(yīng)答過(guò)程，需誘導(dǎo)才能在少數(shù)敏感性個(gè)體上形成致敏狀態(tài)。

實(shí)際上，單從一次基礎(chǔ)的斑貼試驗(yàn)的陽(yáng)性結(jié)果很難準(zhǔn)確地判斷出是刺激性反應(yīng)還是過(guò)敏性反應(yīng)，尤其在陽(yáng)性反應(yīng)很微弱的情況下，而對(duì)兩者的區(qū)分，對(duì)指導(dǎo)消費(fèi)者合理使用化妝品、正確看待化妝品引起的不良反應(yīng)有重要意義。那么下面諸多研究中改進(jìn)的各類斑貼方法，將呈現(xiàn)出獨(dú)特的針對(duì)性了。

1.2 其他各類斑貼試驗(yàn)

人體皮膚多次累積刺激性斑貼試驗(yàn)：屬評(píng)估性斑貼試驗(yàn)，用于檢測(cè)化妝品中的微量可疑成分及重復(fù)接觸某些產(chǎn)品的潛在刺激性。類似的有累積刺激試驗(yàn)、重復(fù)刺激試驗(yàn)、最大化刺激試驗(yàn)。例如，畢志剛等[6]對(duì)市售六種維A酸外用制劑進(jìn)行了皮膚累積刺激性評(píng)估，對(duì)受試者進(jìn)行每周4次24 h和1次72 h的斑貼試驗(yàn)，共觀察3周，對(duì)15次斑貼試驗(yàn)的局部皮膚反應(yīng)等級(jí)進(jìn)行評(píng)分，再計(jì)算平均累積刺激指數(shù)（MCII）；以累積方式激發(fā)出原本刺激性很微弱且難以進(jìn)行刺激性比較的常用維A酸制劑的潛在刺激性，另外還得出，產(chǎn)品的刺激作用可能由藥物本身、藥物濃度或基質(zhì)引起。

48 h人體皮膚封閉/半封閉斑貼試驗(yàn)：屬經(jīng)典診斷性斑貼試驗(yàn)，主要用于尋找變應(yīng)原。香精、防腐劑、色素，是化妝品中常見致敏成分；植物來(lái)源活性物、防曬霜中的紫外吸收劑、眼霜中的收斂劑、美白產(chǎn)品中的美白成分等，都可能是引起化妝品過(guò)敏的變應(yīng)原[7]?；瘖y品過(guò)敏原人體皮膚48 h斑貼試驗(yàn)的臨床研究，可為化妝品研發(fā)機(jī)構(gòu)篩選原料或配方、為消費(fèi)者有效避免化妝品類過(guò)敏原提供幫助[8,9]。

致敏試驗(yàn)（Human Repeated Insult Patch Test），也稱人體重復(fù)激發(fā)斑貼試驗(yàn)或人重復(fù)性損傷性斑貼試驗(yàn)：常歸于診斷性斑貼試驗(yàn)，通過(guò)變應(yīng)原多次誘導(dǎo)后再激發(fā)，預(yù)測(cè)或鑒定潛在的過(guò)敏原。北京大學(xué)第一醫(yī)院皮膚科對(duì)11種化妝品進(jìn)行了人重復(fù)性損傷性斑貼試驗(yàn)，過(guò)程如下：誘導(dǎo)期，在背部同一位置重復(fù)9次斑貼試驗(yàn)，休息2周后，在非斑貼部位進(jìn)行激發(fā)試驗(yàn)，HRIPT結(jié)果以誘導(dǎo)期和激發(fā)期皮膚綜合反應(yīng)判定。仲少敏等[10]認(rèn)為出于倫理方面的考慮，HRIPT并不適合預(yù)測(cè)或鑒定潛在的致敏原，其敏感性高，可明確區(qū)分刺激性、已致敏性和潛在致敏性，主要作為確證試驗(yàn)。其陰性結(jié)果，被認(rèn)為是證明產(chǎn)品不會(huì)在人體產(chǎn)生不良反應(yīng)的最可信方法。目前國(guó)內(nèi)很少有人采用HRIPT進(jìn)行化妝品安全性評(píng)估工作。

致粉刺試驗(yàn)：屬評(píng)估性斑貼試驗(yàn)，在背部同一部位實(shí)施48 h封閉斑貼，3次/周×4周，取涂抹部位硅膠倒模，顯微鏡觀察微粉刺數(shù)量，評(píng)估產(chǎn)品是否有引起痤瘡或黑頭粉刺的潛在風(fēng)險(xiǎn)?；瘖y品及醫(yī)藥部外用品等貼有“已通過(guò)致敏性試驗(yàn)”、“已通過(guò)致粉刺試驗(yàn)”標(biāo)識(shí)的商品，需進(jìn)行致敏試驗(yàn)、致粉刺試驗(yàn)。

人體皮膚損傷模型斑貼試驗(yàn)：屬評(píng)估性斑貼試驗(yàn)，例如皮膚劃痕試驗(yàn)，是一種利用受損皮膚模型評(píng)估化妝品刺激性的方法；又如肥皂小室試驗(yàn)，是專門用來(lái)評(píng)估肥皂產(chǎn)品是否會(huì)引起皮膚干裂或剝落的一種方法；另外，還可建立其他合理的損傷模型，如有些活性成分，因分子量大而較難透過(guò)皮膚角質(zhì)層，可考慮使用膠帶重復(fù)粘貼或DMSO加強(qiáng)皮膚滲透，在此應(yīng)考慮DMSO的刺激性，提示將DMSO與水以一定比例混合后使用[11]。

光皮膚斑貼試驗(yàn)：對(duì)于檢測(cè)化妝品的光毒性而言，其屬于評(píng)估性斑貼試驗(yàn)；用于光變應(yīng)性皮炎的研究或?qū)ふ夜庾儜?yīng)原，則屬于診斷性斑貼試驗(yàn)[12]。通過(guò)在皮膚表面敷貼化妝品或光變應(yīng)原，并同時(shí)接受一定劑量某波段紫外線（通常為UVA段，也有研究采用UVA+UVB段），檢測(cè)光毒性或光變應(yīng)性皮炎。光毒性斑貼試驗(yàn)，用來(lái)評(píng)價(jià)對(duì)皮膚局部使用化妝品并暴露于光下是否會(huì)有不良反應(yīng)發(fā)生，光毒性反應(yīng)與劑量有關(guān)，反應(yīng)局限于照射區(qū)，并呈現(xiàn)出日曬特征。光斑貼試驗(yàn)結(jié)果判讀見表1。

表1 光斑貼試驗(yàn)結(jié)果判讀分類Tab.1 Interpretation and classification of photo-patch test results

目前國(guó)內(nèi)主要參照光照性皮膚病研究組（EMCPPTS）制定光斑貼試驗(yàn)基礎(chǔ)變應(yīng)原，含19種紫外吸收劑；引起光變應(yīng)性皮炎的變應(yīng)原大致有：遮光劑（如羥苯甲酮）、抗生素、芳香劑等[13]。

SLS斑貼試驗(yàn)：評(píng)估受試者是否容易產(chǎn)生刺激性皮炎，這是一種皮膚屏障功能評(píng)價(jià)手段[14]，反映受試者皮膚的易感性。往往在診斷性斑貼試驗(yàn)中，加入一個(gè)SLS樣品點(diǎn)，由于SLS易透過(guò)角質(zhì)層引起刺激反應(yīng)，若SLS點(diǎn)為陽(yáng)性，說(shuō)明其他抗原所引起的非特異性紅斑極可能是刺激反應(yīng)，若SLS點(diǎn)為陰性，說(shuō)明紅斑反應(yīng)是變態(tài)反應(yīng)。

2 斑貼試驗(yàn)應(yīng)用范疇

2.1 化妝品安全性/適應(yīng)性評(píng)估

不少有能力的企業(yè)會(huì)在公司內(nèi)部進(jìn)行斑貼試驗(yàn)，主要是人體皮膚單次封閉型斑貼試驗(yàn)，作為化妝品安全與風(fēng)險(xiǎn)管理的重要一環(huán)。試驗(yàn)首先應(yīng)滿足國(guó)家相關(guān)規(guī)定和倫理學(xué)要求，另外需由2～3名皮膚科專業(yè)醫(yī)師按照統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行結(jié)果判讀[15]。對(duì)于一些規(guī)模較小的化妝品企業(yè)，可與第三方檢測(cè)機(jī)構(gòu)合作，對(duì)原料的把控、配方的篩選及優(yōu)化進(jìn)行有效評(píng)價(jià)。另外，可根據(jù)產(chǎn)品的特性或?qū)Ξa(chǎn)品的關(guān)注程度設(shè)計(jì)重復(fù)性刺激試驗(yàn)、最大化刺激試驗(yàn)等[1]。目前我國(guó)有7家化妝品行政許可人體安全性檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)，負(fù)責(zé)特殊類化妝品上市前的人體安全性評(píng)測(cè)。

2.2 化妝品皮膚病的診斷

雖然國(guó)家頻繁出臺(tái)化妝品相關(guān)法規(guī)，對(duì)產(chǎn)品上市前的監(jiān)管也日趨完善，但隨著化妝品的廣泛使用、創(chuàng)新產(chǎn)品及原料種類的多樣化，化妝品不良反應(yīng)的報(bào)道不斷增加，化妝品皮膚病也日益增多，其中絕大部分屬于化妝品接觸性皮炎。

斑貼試驗(yàn)是診斷化妝品接觸性皮炎的可靠方法：通過(guò)對(duì)標(biāo)準(zhǔn)抗原或自制抗原進(jìn)行斑貼試驗(yàn)，可以幫助受試者找出致敏物質(zhì)，確定其與臨床的關(guān)系；通過(guò)化妝品終產(chǎn)物斑貼試驗(yàn)，可以幫助受試者確認(rèn)致敏化妝品，避免引起更大的損失和傷害[2,16]。研究化妝品、原料產(chǎn)生的刺激性和過(guò)敏性反應(yīng)，有助于深入了解化妝品接觸性皮炎的發(fā)病原因和內(nèi)在機(jī)理。

陳晶晶等[17]以疑似化妝品過(guò)敏的患者為對(duì)象，研究了不同解剖部位斑貼試驗(yàn)結(jié)果的差異，結(jié)果顯示面部皮膚較前臂和背部皮膚陽(yáng)性率更高；又分析了不同部位角質(zhì)層厚度、皮脂膜質(zhì)量、pH值、經(jīng)表皮水分流失等因素對(duì)斑貼結(jié)果的影響；該研究對(duì)輔助化妝品皮膚病的診斷有指導(dǎo)意義，對(duì)于背部斑貼試驗(yàn)結(jié)果呈陰性而又有典型化妝品皮膚病臨床癥狀者，可加試面部斑貼試驗(yàn)以提高陽(yáng)性檢出率。

2.3 測(cè)試人群的篩選及人群皮膚基礎(chǔ)調(diào)研

王?？〉萚8]首次對(duì)某區(qū)化妝品不良反應(yīng)人群進(jìn)行較完善的化妝品常見抗原系列斑貼試驗(yàn)結(jié)果探討，通過(guò)大樣本量調(diào)查，建立化妝品致病成分?jǐn)?shù)據(jù)庫(kù)，對(duì)于預(yù)防區(qū)域性化妝品皮膚病的發(fā)生有著積極意義。

上海市皮膚病醫(yī)院，對(duì)3 497件特殊用途化妝品斑貼試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行基礎(chǔ)研究，從類別、劑型、試驗(yàn)季節(jié)、受試者性別對(duì)試驗(yàn)陽(yáng)性率的影響進(jìn)行深層分析，比如冬季陽(yáng)性率偏高、男性受試者陽(yáng)性率較高等，有利于特殊用途化妝品安全性評(píng)價(jià)的規(guī)范和完善，也對(duì)斑貼試驗(yàn)的結(jié)果分析有指導(dǎo)意義[15]。如何規(guī)避混雜因素對(duì)斑貼試驗(yàn)結(jié)果的影響，對(duì)化妝品監(jiān)測(cè)管理起到重要作用[14]。

又如，化妝品人體功效測(cè)試之前，往往需要先通過(guò)斑貼試驗(yàn)確定產(chǎn)品的安全性；或者針對(duì)產(chǎn)品特性，經(jīng)斑貼試驗(yàn)篩選出合適的測(cè)試群體。

3 斑貼試驗(yàn)的創(chuàng)新

目前為止，斑貼試驗(yàn)結(jié)果主要由觀察者的視覺評(píng)價(jià)進(jìn)行判定，這與其認(rèn)知和經(jīng)驗(yàn)有關(guān)，存有一定的主觀性。一些儀器檢測(cè)手段可對(duì)斑貼結(jié)果進(jìn)行量化及描述，包括經(jīng)表皮水分流失率、皮膚顏色、表皮含水量、皮膚血流量等[18]。已有文獻(xiàn)證明紅斑程度和a*存在線性相關(guān)關(guān)系[19]；更有人采用Chromameter和Mexameter測(cè)定皮膚顏色，提出a*值、E值均能準(zhǔn)確、靈敏、快速的反映微弱紅斑狀況。因儀器指標(biāo)與視診判讀間相關(guān)性的研究尚少，目前暫不能代表斑貼試驗(yàn)的視覺評(píng)價(jià)結(jié)果，但可作為結(jié)果判讀的輔助依據(jù)。

在化妝品領(lǐng)域，斑貼試驗(yàn)對(duì)終產(chǎn)品安全性/適應(yīng)性評(píng)估、配方及原料的篩選與優(yōu)化、人群皮膚基礎(chǔ)調(diào)研、化妝品皮膚病的臨床研究等方面都發(fā)揮著不可替代的作用。作為化妝品消費(fèi)者，斑貼試驗(yàn)對(duì)于我們明確化妝品過(guò)敏原，指導(dǎo)我們?cè)谌粘＿x購(gòu)、使用產(chǎn)品中避開可疑成分，有著實(shí)際而有效的意義。近年來(lái)，隨著方法的更新、材料的改進(jìn)，斑貼試驗(yàn)的應(yīng)用范圍更加廣泛，但仍需對(duì)其封閉時(shí)間、判讀次數(shù)、影響因素等進(jìn)行深入的研究，以提高診斷準(zhǔn)確率，確保其作為評(píng)測(cè)手段的可靠性。