王云,朱星枚,羅玉梅

肝癌分為原發(fā)性肝癌與轉(zhuǎn)移性肝癌兩類，前者是指發(fā)生在肝細(xì)胞或肝內(nèi)膽管細(xì)胞的癌腫。流行病學(xué)調(diào)查證實(shí)，近幾年肝癌發(fā)生率呈上升趨勢(shì)，而國(guó)內(nèi)原發(fā)性肝癌死亡率居惡性腫瘤第二位[1]。原發(fā)性肝癌浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移性強(qiáng)，惡性程度高，對(duì)人類危害性較大，其發(fā)生、進(jìn)展屬多因素多階段復(fù)雜過程，與大量免疫細(xì)胞、細(xì)胞因子、信號(hào)通路有關(guān)。免疫細(xì)胞的一種-Th22細(xì)胞，是一類T輔助細(xì)胞，最新研究結(jié)果顯示，Th22細(xì)胞對(duì)慢性炎癥性疾病發(fā)生、發(fā)展具有重要調(diào)控作用，在某些慢性炎癥性疾病(如牛皮癬、哮喘等)中，Th22細(xì)胞在一定程度上決定了慢性疾病的癥狀惡化速度[2]。有報(bào)道稱Th22細(xì)胞具有白細(xì)胞介素22(Interleukin 22，IL-22)合成功能，IL-22可以在機(jī)體出現(xiàn)炎癥時(shí)激發(fā)機(jī)體的免疫系統(tǒng)，起到免疫預(yù)防作用[3]。本研究探討了肝癌患者中輔助性T細(xì)胞22及其細(xì)胞因子水平變化特點(diǎn)，并分析其臨床意義，現(xiàn)報(bào)道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料

2017年1月至2018年3月，選取西安交通大學(xué)第一附屬醫(yī)院消化內(nèi)科原發(fā)性肝癌患者80例(肝癌組)，納入標(biāo)準(zhǔn)：①與《原發(fā)性肝癌診療規(guī)范(2011年版)》[4]中原發(fā)性肝癌診斷標(biāo)準(zhǔn)相符，均經(jīng)病理組織學(xué)確診；②入院前3個(gè)月內(nèi)及手術(shù)前未接受放化療、抗HBV病毒以及免疫抑制劑治療；③患者及家屬知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：有自身免疫性疾病、急性炎癥以及其他系統(tǒng)慢性炎癥患者。同時(shí)選取健康志愿者80例作為對(duì)照組，兩組一般資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表1。研究經(jīng)院倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)。

表1 兩組一般資料比較

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

選用流式細(xì)胞儀檢測(cè)兩組Th22細(xì)胞水平，抽取患者5 mL外周靜脈血，冷藏備用。將450 μL樣本置于24孔板內(nèi)，滴入等量1640培養(yǎng)液，滴入1 μL蛋白運(yùn)轉(zhuǎn)抑制劑Golipug，置于4 ℃溫箱內(nèi)孵化5 h，收集細(xì)胞，置于試管內(nèi)，滴入4 μL FITC標(biāo)記的抗人CD4，振蕩，避光孵化10 min，PBS洗滌，滴入5 μL PE標(biāo)記的抗人IL-22，PBS洗滌并重懸，選用流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果。IL-22檢測(cè)參照ELISA法，試劑盒由上海生工提供，操作根據(jù)相關(guān)說明書進(jìn)行。

1.3 觀察指標(biāo)

比較肝癌組、對(duì)照組兩組外周血Th22細(xì)胞、IL-22水平。觀察不同病理特征，包括性別、年齡、腫瘤直徑、TNM分期、HBV感染、AFP水平(采取放射免疫分析法檢測(cè))，患者Th22細(xì)胞、IL-22水平差異，分析有差異的項(xiàng)目與Th22細(xì)胞、IL-22的線性相關(guān)性，同時(shí)觀察Th22細(xì)胞、IL-22的線性相關(guān)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 兩組外周血Th22細(xì)胞、IL-22水平比較

肝癌組外周血Th22、IL-22水平分別為(7.21±1.41)%、(810.45±104.55)pg/mL明顯高于對(duì)照組(2.15±0.64)%、(220.61±90.04)pg/mL(t=29.228，t=38.236，P=0.000，P=0.000)。

2.2 外周血Th22細(xì)胞、IL-22水平與患者病理特征關(guān)系

腫瘤直徑≥5 cm患者外周血Th22細(xì)胞和IL-22明顯高于腫瘤直徑<5 cm患者(P<0.05)；有HBV感染患者外周血Th22細(xì)胞明顯高于無HBV感染患者(P<0.05)。見表2。

表2 外周血Th22細(xì)胞、IL-22水平與患者病理特征關(guān)系±s)

2.3 相關(guān)性分析

將患者外周血Th22細(xì)胞、IL-22、腫瘤直徑、HBV DNA載量及AFP進(jìn)行相關(guān)分析，結(jié)果顯示，外周血Th22細(xì)胞與IL-22呈正相關(guān)(r=0.515，P=0.000)；外周血Th22細(xì)胞、IL-22與腫瘤直徑均呈正相關(guān)(r=0.366、0.351，P=0.000、0.000)，見圖1～3。

圖1 Th22與IL-22的線性相關(guān)圖

圖2 Th22與腫瘤直徑的線性相關(guān)圖

圖3 IL-22與腫瘤直徑的線性相關(guān)圖

3 討論

肝癌是指發(fā)生于肝臟的惡性腫瘤，患者早期無特異性癥狀，因此，臨床診斷的肝癌患者多為中晚期肝癌。本病患者臨床癥狀多表現(xiàn)為肝區(qū)疼痛、食欲不振、頭暈乏力等，部分患者有低熱、黃疸等癥，部分存在遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移患者，還將出現(xiàn)轉(zhuǎn)移灶相關(guān)癥狀[5]。目前臨床上對(duì)于肝癌的治療方法主要有手術(shù)治療、放射治療、生物治療等。而隨著精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)的發(fā)展，個(gè)體化治療已成為癌癥治療發(fā)展的主要趨勢(shì)[6]，因此尋找靶向藥物及治療方式成為重要的臨床課題。Th22細(xì)胞亞群是新發(fā)現(xiàn)的一類CD4+T細(xì)胞亞群，為L(zhǎng)-10細(xì)胞因子家族中一員，由IL-10受體2和IL-22受體1組成的跨膜異源二聚體受體(IL-22受體)可完成其信號(hào)傳導(dǎo)。IL-22受體1表達(dá)于人的皮膚、腎臟、肝臟、胰腺等特定器官，而T、B細(xì)胞等免疫細(xì)胞表面則缺少IL-22受體1的表達(dá)，IL-10受體2則廣泛表達(dá)于人體各類細(xì)胞中[7]。Th22細(xì)胞亞群分泌白細(xì)胞介素-22、白細(xì)胞介素-13、白介素-6等細(xì)胞因子，而不產(chǎn)生干擾素-r、白細(xì)胞介素-4和白細(xì)胞介素-17[8]。目前，臨床研究證實(shí)，IL-22大部分由Th22細(xì)胞分泌，少部分由Th17細(xì)胞分泌，參與感染性疾病、自身免疫性疾病發(fā)病機(jī)制[8]。另外，Th22細(xì)胞效應(yīng)分子IL-22可介導(dǎo)炎癥反應(yīng)、腫瘤等病理過程，在機(jī)體免疫調(diào)節(jié)、宿主防御及組織修復(fù)中均發(fā)揮著重要作用[9-10]。

本研究結(jié)果顯示，肝癌組外周血Th22、IL-22明顯高于對(duì)照組，提示肝癌患者體內(nèi)Th22細(xì)胞經(jīng)分泌IL-22 參與調(diào)節(jié)腫瘤免疫機(jī)制、病理過程；而通過分析外周血中Th22細(xì)胞與IL-22水平的相關(guān)性，發(fā)現(xiàn)Th22細(xì)胞與IL-22呈正相關(guān)，證實(shí)了這一結(jié)論。鄒美銀[12]等發(fā)現(xiàn)乙型肝炎病毒相關(guān)原發(fā)性肝癌組外周血中Th22細(xì)胞表達(dá)頻數(shù)及IL-22水平明顯高于正常對(duì)照組，多因肝硬化形成過程中，HBV誘導(dǎo)所致慢性炎癥及纖維化，于慢性炎癥過程中形成腫瘤壞死因子α、IL-6，促使初始CD4+T細(xì)胞分化成Th22細(xì)胞，進(jìn)而分泌大量IL-22，從而促進(jìn)肝細(xì)胞修復(fù)、再生。黃高鉑[13]等也發(fā)現(xiàn)IL-22參與細(xì)胞增殖、分化、凋亡調(diào)節(jié)，調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞周期，使其停滯在G2/M 期，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞增殖受抑。筆者推測(cè)，Th22細(xì)胞產(chǎn)生的效應(yīng)因子IL-22在慢性肝損傷中發(fā)揮限制肝損傷作用，IL-22產(chǎn)生增多，于肝臟慢性炎癥后，可誘導(dǎo)受損肝細(xì)胞存活，并有可能進(jìn)展為肝癌。

本研究結(jié)果顯示，腫瘤直徑≥5 cm患者外周血Th22細(xì)胞和IL-22分別高于腫瘤直徑<5 cm患者；有HBV感染患者外周血Th22細(xì)胞明顯高于無HBV感染患者；而外周血Th22細(xì)胞、IL-22與腫瘤直徑呈正相關(guān)，提示隨著腫瘤逐漸增大，外周血Th22細(xì)胞、IL-22表達(dá)水平逐漸升高，證實(shí)Th22細(xì)胞在原發(fā)性肝癌病變過程中可能通過分泌IL-22間接或直接參與腫瘤細(xì)胞增殖、侵襲及轉(zhuǎn)移。具體而言，IL-22與其受體相互作用后，將激活下游信號(hào)通路，激活J激酶1(JAKl)、酪氨酸激酶2(Tyk2)及細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶(ERK)功能，同時(shí)誘導(dǎo)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)子及轉(zhuǎn)錄激活子3(STAT3)及少量STATl、STAT5等活化[14-16]。另外，IL-22可通過介導(dǎo)JAK-STAT3信號(hào)通路來誘導(dǎo)組織細(xì)胞內(nèi)的DNA表達(dá)上調(diào)，并以此促進(jìn)組織重塑、血管生成、纖維化生成等[17-19]。筆者推測(cè)，Th22細(xì)胞在原發(fā)性肝癌中的作用機(jī)制，可能表現(xiàn)在兩個(gè)方面：一是Th22細(xì)胞經(jīng) IL-22 參與原發(fā)性腫瘤發(fā)病及進(jìn)展；二是Th22細(xì)胞主要表達(dá)于肝臟組織中，伴隨著腫瘤的進(jìn)展、轉(zhuǎn)移，其侵入外周血，導(dǎo)致外周血Th22細(xì)胞表達(dá)升高[20]。至于Th22細(xì)胞在乙型肝炎型肝細(xì)胞癌的具體發(fā)生機(jī)制，仍有待進(jìn)一步探討。

綜上所述，肝癌患者中Th22細(xì)胞及其細(xì)胞因子水平明顯升高，與HBV感染、腫瘤直徑有一定關(guān)系，值得進(jìn)一步研究。