張皖君，藍(lán)蔚青,2,*，段賢源，孫曉紅,2，謝 晶,2,*

（1.上海海洋大學(xué)食品學(xué)院，上海 201306；2.上海水產(chǎn)品加工及貯藏工程技術(shù)研究中心，上海冷鏈裝備性能與節(jié)能評價專業(yè)技術(shù)服務(wù)平臺，食品科學(xué)與工程國家級實驗教學(xué)示范中心（上海海洋大學(xué)），上海 201306）

鱸魚（Lateolabrax japonicus）屬鱸形目、鱸屬經(jīng)濟(jì)魚類，在我國海洋漁業(yè)中具有相當(dāng)重要的地位，經(jīng)濟(jì)價值與開發(fā)潛力較高。近年來，隨著鱸魚市場需求的不斷增長，開展鱸魚的貯藏保鮮研究顯得尤為重要。但由于鱸魚水分與蛋白質(zhì)含量高，魚體鰓部及體表易攜帶大量細(xì)菌，貯藏期間極易腐敗變質(zhì)[1]。前人研究得出，微生物的生長繁殖會加速魚肉組織結(jié)構(gòu)分解、氧化酸敗并產(chǎn)生大量異味，導(dǎo)致其腐敗，嚴(yán)重影響水產(chǎn)品的品質(zhì)[2-3]。目前普遍應(yīng)用的保鮮方法是冰藏。傳統(tǒng)碎冰（crushed ice，CI）貯藏密封不充分，抑菌效果差，保鮮能力不足；因此優(yōu)化冰藏處理技術(shù)對延長水產(chǎn)品貨架期具有重要意義[4]。流化冰（slurry ice，SI）為新型保鮮處理技術(shù)，其具有預(yù)冷速度快、機(jī)械損傷小等優(yōu)點，貯藏中可將魚體完全浸沒，能有效隔絕氧氣。同時，SI中的鹽對細(xì)菌也有一定的抑制作用，能延緩由氧化和微生物繁殖導(dǎo)致的腐敗變質(zhì)[5]。酸性電解水冰（acidic electrolyzed water ice，AEWI）不僅結(jié)合了傳統(tǒng)冰低溫貯藏的作用，還具有殺菌能力強(qiáng)、應(yīng)用范圍廣且安全方便的特點，在水產(chǎn)品保鮮中也有廣泛應(yīng)用[6]。但由于魚類在冰藏過程中依然會受到優(yōu)勢腐敗菌（specific spoilage organisms，SSO）的影響，且其生長速度和致腐能力均較強(qiáng)[7]；因此，開展水產(chǎn)品冰藏期間SSO的研究并進(jìn)行靶向抑制，對水產(chǎn)品保鮮具有重要意義。

現(xiàn)有報道顯示，目前微生物群落研究主要基于傳統(tǒng)分離培養(yǎng)或變性梯度凝膠電泳（denaturing gradient gel electrophoresis，DGGE）等分子生態(tài)學(xué)技術(shù)開展，其僅能檢測極少數(shù)易培養(yǎng)或優(yōu)勢菌群的變化情況，難以反映微生物真實豐度與演替規(guī)律[8]。高通量測序技術(shù)也稱“下一代測序”技術(shù)，能一次并行對幾十萬到幾百萬條DNA分子進(jìn)行序列測定，一般以讀長較短為標(biāo)志，是微生物領(lǐng)域中重要的研究方法，具有測序通量高、結(jié)果精準(zhǔn)等優(yōu)點[9-10]。其雖建立時間不長，但發(fā)展迅速，現(xiàn)已廣泛應(yīng)用于基因組，包括測序、表觀基因組學(xué)與功能基因組學(xué)研究等方面[11]。高通量測序技術(shù)能檢出樣品中不可培養(yǎng)及低豐度的微生物，在土壤多樣化、腸道環(huán)境、發(fā)酵食品與人類健康等學(xué)科領(lǐng)域應(yīng)用廣泛[12]。米其利等[13]對高通量測序技術(shù)的操作流程、在食品微生物生態(tài)學(xué)中的應(yīng)用進(jìn)行綜述，評價了該測序技術(shù)的優(yōu)勢、局限性及應(yīng)用前景。張和平等[14]總結(jié)了近年來高通量測序技術(shù)在乳制品微生物基因組和生物多樣性中的應(yīng)用現(xiàn)狀。目前高通量技術(shù)在鮐魚、大黃魚、南美白對蝦、鲊魚等水產(chǎn)品的微生物生態(tài)學(xué)上已有應(yīng)用研究，但運用高通量技術(shù)分析不同冰藏條件下鱸魚中的細(xì)菌群落演變規(guī)律及品質(zhì)特征變化的報道較少[15-17]。

本實驗在進(jìn)行揮發(fā)性鹽基氮（total volatile basic nitrogen，TVB-N）含量、K值等品質(zhì)指標(biāo)測定的基礎(chǔ)上，通過Illumina Miseq測序平臺和PICRUSt功能預(yù)測工具來對比分析不同冰藏條件下鱸魚菌群結(jié)構(gòu)和代謝功能的差異，以揭示鱸魚冰藏過程中的微生物變化規(guī)律及致腐機(jī)制，為后期靶向抑制其腐敗變質(zhì)提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

鮮活鱸魚（質(zhì)量（500±20）g、體長（27.5±1.2）cm），購自上海市水產(chǎn)品市場，30 min內(nèi)運至實驗室后立即處理。

細(xì)菌基因組DNA提取試劑盒（E.Z.N.A.Soil DNA Kit）美國OMEGA公司；Qubit 3.0 DNA檢測試劑盒 美國Life公司；Taq酶 賽默飛世爾科技公司（上海）；核酸純化試劑盒（Agencourt AMPure XP） Beckman公司（中國）；ATP關(guān)聯(lián)物標(biāo)準(zhǔn)品 美國Sigma公司；輕質(zhì)氯化鎂等 國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

RE-1000W-SP型SI制冰機(jī) 江蘇南通瑞友工貿(mào)有限公司；AF-103 AS型制冰機(jī) 意大利Scotsman公司；FW-200型強(qiáng)酸性電解水生成器 日本Amano公司；Kjeltec8400型凱氏定氮儀 丹麥FOSS公司；Alliance 2695型高效液相色譜（high performance liquid chromatography，HPLC）系統(tǒng) 美國Waters公司；DYCZ-21型電泳槽 北京市六一儀器廠；T100TM型聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（polymerase chain reaction，PCR）儀 伯樂（中國）公司；Miseq高通量測序儀 美國Illumina公司。

1.3 方法

1.3.1 原料處理與分組

樣品用冰水洗凈后隨機(jī)分為3 組，分別置于盛有SI、AEWI和CI的泡沫箱中，冰魚體積比為1∶1，置于4 ℃冰箱冰藏，隔天換冰一次。鱸魚經(jīng)去頭、尾、內(nèi)臟，取背部魚肉進(jìn)行各項指標(biāo)測定和細(xì)菌DNA提取。

選擇3 個處理組樣品分別于0～23 d內(nèi)定期取樣測定其TVB-N含量與K值，判定其鮮度變化，每個指標(biāo)做3 組平行。同時，選取貯藏前期（3 d）、中期（12 d）與末期（21 d）的樣品直接用于提取總細(xì)菌DNA。其中，貯藏3 d的SI、AEWI、CI組細(xì)菌基因組DNA分別記為A1、A2、A3，12 d和21 d的SI、AEWI、CI組細(xì)菌基因組DNA分別記為B1、B2、B3和C1、C2、C3。

1.3.2 保鮮冰制備

表 1 不同保鮮冰制取規(guī)格參數(shù)Table 1 Preparation methods and technical parameters for different types of ice used for fi sh preservation

1.3.3 TVB-N含量的測定

參考SC/T 3032—2007《水產(chǎn)品中揮發(fā)性鹽基氮的測定》[18]進(jìn)行操作，平行測定3 次，結(jié)果以mg/100 g表示。

1.3.4 K值的測定

參考楊文鴿等[19]的方法，并略作改動。取5 g魚樣放入離心管，加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)10%高氯酸10 mL，勻漿后8 000 r/min冷凍離心15 min，取上清液。沉淀用10 mL 5%高氯酸洗滌，冷凍離心取上清液，合并上清液，用KOH溶液調(diào)pH值至6.5，取上清液于50 mL容量瓶中定容，過0.22 μm膜后液相測定。HPLC檢驗條件：pH 6.5的0.05 mol/L磷酸緩沖溶液平衡洗脫；進(jìn)樣量10 μL，流速1 mL/min，柱溫28 ℃，檢測波長254 nm，采用外標(biāo)法進(jìn)行定量。計算方法如下式所示。

式中：ATP、ADP、AMP、IMP、HxR、Hx分別代表腺苷三磷酸、腺苷二磷酸、腺苷酸、肌苷酸、次黃嘌呤核苷、次黃嘌呤的含量/（μmol/g）。

1.3.5 總DNA提取與PCR擴(kuò)增

在無菌狀態(tài)下取不同部位的鱸魚肉，混勻后稱量，采用E.Z.N.A.Soil DNA Kit的試劑盒提取鱸魚肉中總菌群的基因組DNA[2]。用瓊脂糖凝膠檢測DNA完整性，置于-20 ℃?zhèn)溆?。PCR所需引物為已融合引物（Miseq測序平臺中V3～V4通用的引物）341F（5′-CCTACGGGNGGCWGCAG-3′）與805R（5′-GACTACHVGGGTATCTAATCC-3′）。其中，兩輪PCR擴(kuò)增體系與擴(kuò)增條件參照溫崇慶等[20]的方法，第一輪，30 μL PCR反應(yīng)體系：2×Taq master Mix 15 μL、10 μmol/L引物各1 μL、DNA模板10 ng，加ddH2O至30 μL。PCR擴(kuò)增條件為：94 ℃預(yù)變性3 min；94 ℃變性30 s，45 ℃退火20 s，65 ℃延伸30 s，5 個循環(huán)；94 ℃變性20 s，55 ℃退火20 s，72 ℃延伸30 s，20 個循環(huán)；72 ℃延伸5 min。第二輪擴(kuò)增，引入Illumina橋式PCR兼容引物，DNA模板為20 ng，PCR擴(kuò)增條件為：95 ℃預(yù)變性30 s；95 ℃變性15 s，55 ℃退火15 s，72 ℃延伸30 s，5 個循環(huán)；72 ℃延伸5 min。第二輪PCR產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，觀察擴(kuò)增效果。

1.3.6 PCR產(chǎn)物純化及測序

使用SanPrep柱式DNA膠回收試劑盒對DNA進(jìn)行回收，用Qubit 3.0 DNA檢測試劑盒對回收的DNA精確定量，以便于后續(xù)實驗按照體積比1∶1混合后測序。由生工生物工程（上海）股份有限公司進(jìn)行Illumina MiSeq高通量測序。

1.3.7 QIIME軟件數(shù)據(jù)分析

通過QIIME軟件（生工生物工程（上海）股份有限公司）對獲得的序列進(jìn)行質(zhì)控與過濾，舍棄低質(zhì)量的DNA序列，對獲得的高質(zhì)量有效序列作分類單元（operational taxonomic units，OTU）聚類[21]。根據(jù)聚類分析結(jié)果，使用mothur軟件（http∶//www.mothur.org/）中的summary.single命令，計算生物多樣性指數(shù)并進(jìn)行Alpha多樣性分析，采用RDP-classifier（https∶//sourceforge.net/projects/rdp-classifier/）方法[22]和Green Gene數(shù)據(jù)庫對序列進(jìn)行物種注釋和分類學(xué)分析。

由OTU的分析結(jié)果計算常用的Alpha多樣性指數(shù)，其中，Coverage值為測序深度指數(shù)，代表每個樣品文庫的覆蓋率；Chao1和ACE指數(shù)可表示菌群豐富程度，數(shù)值越高表明群落物種豐富度越高；香農(nóng)和辛普森指數(shù)反映物種多樣性，群落多樣性與香農(nóng)指數(shù)呈正相關(guān)，與辛普森指數(shù)呈負(fù)相關(guān)[21]。

稀釋曲線可用來說明樣本的測序數(shù)據(jù)量是否合理，利用mothur軟件對OTU做Rarefaction分析，利用R軟件繪制曲線圖。主成分分析（principal component analysis，PCA）通過方差分解，對原有的復(fù)雜數(shù)據(jù)降維，保持?jǐn)?shù)據(jù)集中對方差貢獻(xiàn)最大的特征，反映樣本間的差異和距離，利用R軟件的vegan package進(jìn)行分析[16]。利用PICRUSt（http∶//picrust.github.io/picrust/）工具將OTU表標(biāo)準(zhǔn)化并進(jìn)行功能預(yù)測分析。

1.4 數(shù)據(jù)分析

利用Excel 2010、SPSS Statistics 20.0等統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和分析，利用Origin 9.1軟件作圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 TVB-N含量和K值分析

鱸魚肉的TVB-N含量小于13 mg/100 g為一級鮮度，TVB-N含量大于30 mg/100 g即不可食用[23]。

如圖1所示，從6 d開始，CI組樣品的TVB-N含量明顯上升，在12 d時超過一級鮮度的極限值，貯藏18 d時已接近限量標(biāo)準(zhǔn)。SI組樣品的TVB-N含量在18 d時處于一級鮮度，AEWI組樣品也處于新鮮狀態(tài)，貯藏后期SI組樣品的TVB-N含量在初始值附近，明顯低于AEWI組樣品。一般認(rèn)為作為生魚片的新鮮魚K值約在20%以下，20%～50%為二級鮮度，大于70%為不可食用[24]。鱸魚樣品的初始K值為（3.95±0.18）%，表明樣品的新鮮度較高。在貯藏第21天，CI和AEWI處理組樣品的K值分別達(dá)到（76.41±2.12）%、（75.95±2.01）%，SI組樣品為（51.08±1.22）%，低于其余兩組。因此，SI可抑制樣品蛋白質(zhì)和核苷酸的降解速度，其中AEWI組的保鮮效果優(yōu)于CI組。

圖 1 不同冰處理對鱸魚貯藏過程中TVB-N含量（A）與K值（B）的影響Fig. 1 Effect of different ice treatments on TVB-N content (A) and K value (B) of Lateolab rax japonicas

2.2 樣品細(xì)菌多樣性分析

由表2可知，經(jīng)質(zhì)控與過濾等處理后得到了鱸魚樣品的有效序列，不同貯藏時間下每組樣品的有效序列數(shù)均在10 000以上，有效序列達(dá)50%以上，表明測序所得到的有效序列可達(dá)到后續(xù)微生物多樣性分析的要求[25]。對97%相似水平下的OTU進(jìn)行生物信息統(tǒng)計，AEWI和CI組樣品隨著貯藏時間的延長，OTU數(shù)量明顯增加，SI組鱸魚樣品OTU數(shù)量在貯藏后期較少，表明菌群種類較少。

表 2 不同冰藏條件下鱸魚樣品序列信息和Alpha多樣性指數(shù)Table 2 Summary of the sequencing data sets and Alpha diversity index for Lateolabrax japonicas with different ice treatments

由表2可知，各樣品的測序深度指數(shù)Coverage值均大于0.99，說明樣品中序列未被測出的概率較低，測序結(jié)果可反映不同冰藏過程中鱸魚樣品的真實情況[26]。AEWI組中Chao1、Ace、香農(nóng)指數(shù)最小的均為樣品A2，數(shù)值最大的均是樣品C2，這說明AEWI組中的鱸魚樣品在3 d時物種豐富度最低，在21 d時物種豐富度和微生物多樣性達(dá)到最高，可能由于此時AEWI中的有效氯成分揮發(fā)，抑菌效果降低，導(dǎo)致微生物污染和繁殖加劇[27]。CI組在貯藏12 d物種豐富度和微生物多樣性較高，說明微生物種類和含量迅速增加，鱸魚樣品在此時已腐敗。SI組中A1樣品的物種豐富度最高，可能由于貯藏前期SI中的微生物與魚體發(fā)生交叉感染，導(dǎo)致微生物數(shù)量增加[28]。SI組樣品中，C1的Ace、Chao1和香農(nóng)指數(shù)最低，辛普森指數(shù)最高，表明SI貯藏末期樣品菌群豐度及多樣性較低，其原因可能是“微凍”溫度抑制了部分微生物的生長與繁殖，使鱸魚樣品菌群結(jié)構(gòu)發(fā)生較大變化[16]。

圖 2 各樣品稀釋性曲線（A）和香農(nóng)指數(shù)曲線（B）分析Fig. 2 Rarefaction curves (A) and Shannon index curves (B) for different samples

如圖2A所示，隨著測序量的增加，各組樣品稀釋性曲線逐漸進(jìn)入飽和期，說明測序量合理充分，測序深度已基本覆蓋所有物種信息[29]。同時，香農(nóng)指數(shù)曲線也趨于平緩（圖2B），表明測序數(shù)據(jù)可反映樣品中微生物菌群多樣性組成，更多數(shù)據(jù)量對發(fā)現(xiàn)新的OTU貢獻(xiàn)很小。

2.3 不同冰處理對鱸魚貯藏過程中細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)的影響

對所有冰藏樣品獲得的OTU從屬水平上進(jìn)行物種注釋，圖3為屬水平上相對豐度大于1%的菌群柱狀分布圖。

圖 3 不同冰藏條件下鱸魚樣品微生物物種組成Fig. 3 Bacterial community composition at the genus level in Lateolabrax japonicas with different ice treatments

由圖3可知，鱸魚在不同貯藏階段中的菌群結(jié)構(gòu)差異較大。在冰藏初期（3 d），3 組中鱸魚樣品A1、A2、A3主要以芽孢桿菌屬（Bacillus）、乳球菌屬（Lactococcus）、大洋芽孢桿菌屬（Oceanobacillus）、腎桿菌屬（R e n i b a c t e r i u m）、不動桿菌屬（Acinetobacter）為主，其中在菌群中占比例最大的是芽孢桿菌屬，分別達(dá)30.08%、38.12%、33.82%，與目前大多數(shù)冷鮮肉優(yōu)勢腐敗菌研究結(jié)果[17,30]一致，其次為乳球菌屬、大洋芽孢桿菌屬。隨著冰藏時間的延長，鱸魚樣品中芽孢桿菌屬、乳球菌屬和大洋芽孢桿菌屬相對豐度明顯下降，且以上菌屬在AEWI組和CI組的相對豐度顯著高于SI組。

隨著貯藏時間的延長，SI處理樣品中的假單胞菌屬（Pseudomonas）、希瓦氏菌屬（Shewanella）相對豐度分別由1.25%、0.03%升至4.38%、4.06%，摩替亞氏菌屬（Moritella）、埃希氏桿菌屬（Escherichia）和別弧菌屬（Aliivibrio）在貯藏中、后期所占比例逐漸增大，優(yōu)勢明顯。相關(guān)研究報道顯示，假單胞菌屬和希瓦氏菌屬是水產(chǎn)品低溫貯藏過程中常見的腐敗菌，具有很強(qiáng)的產(chǎn)生氨等腐敗產(chǎn)物的能力[31-32]。此外，摩替亞氏菌屬、埃希氏桿菌屬也能在冰藏溫度下生長，是冷鮮水產(chǎn)品和禽畜肉中的常見腐敗菌和致病菌[33]。在AEWI和CI組樣品中，假單胞菌屬、短波單胞菌屬（Brevundimonas）與不動桿菌屬（Acinetobacter）在貯藏前期均未檢出或檢出量很少，到12 d時，其所占比例總體呈增長態(tài)勢，21 d時AEWI組假單胞菌屬和不動桿菌屬迅速增加，加速了冰鮮鱸魚的腐敗。CI組在21 d時不動桿菌屬比例達(dá)27.77%，說明該菌是影響CI組貯藏過程中鱸魚腐敗變質(zhì)的優(yōu)勢菌屬。綜上所述，假單胞菌屬、不動桿菌屬和希瓦氏菌屬可能是鱸魚冰藏期間的主要優(yōu)勢菌。

2.4 PCA比較分析

圖 4 不同冰藏條件下鱸魚樣品PCA分析Fig. 4 Principal component analysis (PCA) of bacterial community composition in Lateolabrax japonicas with different ice treatments

樣品在PCA圖中相應(yīng)坐標(biāo)軸上的距離越近，組成相似性越高[25]。對于主成分PC1-2分析（圖4A），冰藏前期的樣品A1、A2、A3樣品較為相近，說明在這一主成分水平上3 種保鮮冰處理下鱸魚貯藏前期的菌群特征較為相近[12]。對主成分PC1-3分析（圖4B），在主成分PC3方面，貯藏21 d的3 組鱸魚樣品與前、中期樣品的距離區(qū)分度明顯，表明樣品在冰藏末期的菌群組成發(fā)生較大變化，該結(jié)果與群落結(jié)構(gòu)分析結(jié)果一致。溫冬玲等[25]在不同增菌溫度下冷鮮雞肉細(xì)菌群落的主成分分析中也得到相似結(jié)果。主成分PC2-3分析中（圖4C），貯藏12 d的樣品B1、B2、B3間與貯藏21 d的C1、C2、C3樣品間在主成分PC2和PC3方面均距離相對較遠(yuǎn)，貯藏中期和末期樣品在幾種特定微生物組成上均有較大差異。總體來看，在各個主成分坐標(biāo)軸上，貯藏末期3 個處理組樣品與前、中期樣品均相距較遠(yuǎn)，且貯藏末期的樣品C2、C3與C1相互間也有一定距離，表明貯藏時間及冰藏方式對鱸魚樣品微生物種類及組成變化影響顯著，導(dǎo)致冰鮮鱸魚群落結(jié)構(gòu)組成發(fā)生較大變化。

2.5 TVB-N含量、K值相關(guān)細(xì)菌篩選

表 3 鱸魚冰藏期間與TVB-N含量、K值顯著相關(guān)細(xì)菌Table 3 Bacteria at the genus level remarkably associated with TVB-N content and K value in Lateolabrax japonicas during ice storage

在屬水平上，利用皮爾森相關(guān)性檢驗冰藏期間鱸魚TVB-N含量、K值與微生物群落的相關(guān)性，篩選出相對豐度＞1%，r＞0.5且P＜0.05的相關(guān)細(xì)菌。結(jié)果如表3所示，鱸魚樣品中與TVB-N含量顯著相關(guān)的細(xì)菌共4 個，其中與TVB-N含量呈正相關(guān)的有假單胞菌屬、短波單胞菌屬和不動桿菌屬。與K值顯著相關(guān)的細(xì)菌有8 個，其中呈正相關(guān)的主要是嗜冷桿菌屬（Psychrobacter）、假單胞菌屬和希瓦氏菌屬，表明這些微生物可能是導(dǎo)致冰藏期間鱸魚腐敗變質(zhì)的優(yōu)勢菌。

2.6 PICRUSt功能預(yù)測

利用軟件PICRUSt進(jìn)行功能基因的同源蛋白簇預(yù)測（相對豐度＞0.1%），在功能聚類上，鱸魚樣品細(xì)菌代謝相關(guān)基因能基本按不同貯藏時間聚成3 類（即前、中、后期），不同保鮮冰組之間有交叉，也有相似之處。楊娟等[34]在研究集雨窖水中微生物群落結(jié)構(gòu)中也得到類似結(jié)果。結(jié)果獲得預(yù)測功能基因中主要是氨基酸轉(zhuǎn)運和代謝、碳水化合物轉(zhuǎn)運和代謝、脂質(zhì)轉(zhuǎn)運和代謝、輔酶轉(zhuǎn)運和代謝、能源產(chǎn)生和轉(zhuǎn)換等與代謝相關(guān)的基因。此外，鱸魚樣品中還有與翻譯、核糖體結(jié)構(gòu)和起源，轉(zhuǎn)錄，復(fù)制、重組和修復(fù)，細(xì)胞壁/膜/包膜起源，無機(jī)離子運輸和代謝以及信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制等相關(guān)的功能基因。冰藏至21 d時，鱸魚樣品中與上述新陳代謝和能源生產(chǎn)與轉(zhuǎn)換相關(guān)的基因在數(shù)量上呈C2＞C3＞C1的趨勢。其中，有關(guān)氨基酸、碳水化合物和脂質(zhì)代謝的基因在數(shù)量上，C3和C2顯著高于C1。表明隨著貯藏時間的延長，在相關(guān)微生物作用下，CI和AEWI的樣品更易進(jìn)行氨基酸、脂質(zhì)和碳水化合物代謝產(chǎn)生醛、酮和酸等物質(zhì)，使魚體產(chǎn)生腥臭味，品質(zhì)下降。說明PICRUSt功能預(yù)測在肌肉新陳代謝相關(guān)菌的研究上表現(xiàn)出良好的應(yīng)用前景，能為從微生物代謝角度延緩鱸魚腐敗的研究提供新思路。

圖 5 不同冷藏處理下鱸魚樣品細(xì)菌群落的代謝相關(guān)基因豐度分布熱圖Fig. 5 Heatmap of the abundance of genes related to bacterial community metabolism in Lateolabrax japonicas with different ice treatments

3 結(jié) 論

不同保鮮冰處理下鱸魚微生物多樣性存在較大差異，與SI組相比，AEWI和CI組抑菌效果降低，群落多樣性與豐富度增加。冰藏前期，3 組鱸魚樣品中主要以芽孢桿菌屬、乳球菌屬、大洋芽孢桿菌屬為主，其中AEWI組和CI組的相對豐度顯著高于SI組，隨貯藏時間延長，鱸魚菌群組成發(fā)生變化，其優(yōu)勢菌可能為假單胞菌屬、不動桿菌屬、嗜冷桿菌屬、希瓦氏菌屬。PCA分析發(fā)現(xiàn)，貯藏末期3 組樣品的微生物種類及組成與其他時期樣品存在較大差異，且樣品C2、C3與C1間也相距較遠(yuǎn)，表明貯藏時間與冰藏方式對鱸魚群落結(jié)構(gòu)有較大影響。與SI組相比，CI和AEWI組鱸魚樣品細(xì)菌具有更高豐度的參與氨基酸、脂質(zhì)和碳水化合物代謝的相關(guān)基因，說明SI對鱸魚腐敗降解的抑制效果優(yōu)于AEWI和CI。本研究為從微生物代謝功能角度開發(fā)針對性的鱸魚保鮮技術(shù)提供了參考。