王曉紅，李媛媛，戴宇峰，王靜鳳*，李兆杰，薛長湖

（中國海洋大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，山東 青島 266003）

骨質(zhì)疏松是常見的系統(tǒng)性骨代謝障礙疾病的一種，其主要表現(xiàn)為骨礦減少、骨強(qiáng)度降低和骨組織結(jié)構(gòu)損壞，在絕經(jīng)后婦女和老年人中較為常見[1]。骨質(zhì)疏松導(dǎo)致骨骼支撐功能下降，極易引發(fā)骨折，這也是骨質(zhì)疏松癥致殘、致死的重要原因[2]。在患骨質(zhì)疏松癥人口數(shù)最多的中國，人口老齡化的趨勢將進(jìn)一步加劇骨質(zhì)疏松的發(fā)生。高發(fā)病率和日益加重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)使得骨質(zhì)疏松癥成為亟待解決的骨骼疾病[3]。

各骨質(zhì)疏松癥類型中，原發(fā)性骨質(zhì)疏松占比最高，其中絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松呈高骨轉(zhuǎn)換特征，即骨生成由于骨吸收的增強(qiáng)也代償性升高。藥物治療是目前緩解骨質(zhì)疏松的主要方式，其大多通過抑制骨吸收或促進(jìn)骨生成發(fā)揮作用。雖然這些藥物具有一定的療效，但長期服用不僅價(jià)格昂貴，還會(huì)產(chǎn)生諸多不良反應(yīng)[4-5]。因此，從生物活性物質(zhì)中尋求安全有效的改善骨質(zhì)疏松癥方法是目前的研究熱點(diǎn)。

棘皮動(dòng)物海參是我國傳統(tǒng)珍貴食材，其營養(yǎng)豐富，富含膠原蛋白、多糖、脂質(zhì)、皂苷及微量元素等多種活性物質(zhì)，具有抗癌、抗衰老、降糖降脂、增強(qiáng)免疫力等功效[6-9]。海參皂苷與人參皂苷結(jié)構(gòu)相似，同屬三萜皂苷，其結(jié)構(gòu)多為羊毛甾烷型[10]，是海參體壁的主要營養(yǎng)成分之一。植物皂苷特別是人參皂苷已有大量研究發(fā)現(xiàn)其具有促進(jìn)成骨細(xì)胞增殖分化，降低骨吸收，改善骨質(zhì)疏松的功效[11-12]。而與其結(jié)構(gòu)類似同屬三萜皂苷的海參皂苷，雖已探明其具有抗菌、抗腫瘤、改善脂質(zhì)代謝紊亂等多種生理活性作用[13-14]，但在其是否能夠改善骨質(zhì)疏松方面仍鮮有研究報(bào)道。

本實(shí)驗(yàn)采用雙側(cè)去卵巢手術(shù)建立絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥模型，通過檢測尿鈣、尿磷濃度、骨密度、骨礦化沉積和關(guān)鍵基因的表達(dá)，以探究海參皂苷對去卵巢小鼠骨質(zhì)疏松癥骨密度的改善作用及機(jī)制，為海參皂苷的開發(fā)應(yīng)用和防治骨質(zhì)疏松癥提供研究參考。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物、材料與試劑

SPF級雌性C57BL/6J小鼠，體質(zhì)量（20±1）g，購買自北京維通利華公司。動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK（京）2012-0001。動(dòng)物飼養(yǎng)室進(jìn)行12 h光照12 h黑暗交替，保持良好通風(fēng)，控制室溫為（23±1）℃，飼養(yǎng)期間小鼠自由飲水并攝食標(biāo)準(zhǔn)飼料。

海參皂苷來自于中國海洋大學(xué)食品科學(xué)與人類健康實(shí)驗(yàn)室，以菲律賓刺參為原料，按照董平[10]的方法制備。海參干燥后研成粉末，在室溫下以體積分?jǐn)?shù)60%乙醇溶液浸提，減壓濃縮后以水飽和正丁醇萃取，正丁醇部分減壓濃縮蒸干后，進(jìn)一步通過大孔樹脂純化得海參皂苷，其純度經(jīng)高效液相色譜法測定達(dá)80%。

RNA柱式提取試劑盒 生工生物工程公司；M-MLV逆轉(zhuǎn)錄酶 美國Promega公司；尿鈣、尿磷試劑盒南京建成科技公司；上、下游引物 蘇州金唯智生物科技公司；其他試劑為國產(chǎn)分析純。

1.2 儀器與設(shè)備

IQ5型實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（quantitative real-time polymerase chain reaction，qPCR）儀、Model680型酶標(biāo)儀 美國Bio-Rad公司；Neofuge 13R型離心機(jī)上海力申科學(xué)儀器公司；GK99-UNIGAMMA X-RAY PLUS雙能X射線骨密度儀 意大利I’acn公司；DM2500熒光顯微鏡 德國Leica公司；HM 315型石蠟切片機(jī)德國MICROM GmbH公司。

1.3 方法

1.3.1 骨質(zhì)疏松癥模型建立及動(dòng)物分組

42 只雌性C57BL/6J小鼠經(jīng)適應(yīng)性飼養(yǎng)1 周后隨機(jī)分成2 組：假手術(shù)組和去卵巢組。小鼠禁食不禁水12 h后，腹腔注射體積分?jǐn)?shù)10%水合氯醛溶液進(jìn)行麻醉。小鼠腹部剃毛并消毒后打開腹腔，去卵巢組小鼠摘除兩側(cè)卵巢，假手術(shù)組小鼠僅切除腹腔內(nèi)一小塊脂肪，分層縫合切口。術(shù)后去卵巢組2 只小鼠死亡，其余小鼠連續(xù)3 d腹腔注射200 000 U/kg mb青霉素抗感染。

術(shù)后4 周按體質(zhì)量隨機(jī)將存活小鼠分成4 組：假手術(shù)組、模型組和低、高劑量海參皂苷組，每組10 只。低、高劑量海參皂苷組分別灌胃7.5 mg/kg mb和15 mg/kg mb生理鹽水溶解的海參皂苷，假手術(shù)組與模型組灌胃10 mL/kg mb生理鹽水。小鼠每天灌胃1 次，灌胃周期90 d，期間未出現(xiàn)死亡情況。實(shí)驗(yàn)期間小鼠自由進(jìn)食飲水，每3 d記錄體質(zhì)量。

實(shí)驗(yàn)結(jié)束前第14天持續(xù)2 d按照20 mg/kg mb腹腔注射鹽酸四環(huán)素，實(shí)驗(yàn)結(jié)束前第4天持續(xù)2 d腹腔注射5 mg/kg mb鈣黃綠素；實(shí)驗(yàn)結(jié)束前5 d小鼠入代謝籠，收集24 h尿液，取離心后的上清液檢驗(yàn)?zāi)蛞褐笜?biāo)；末次給藥后所有小鼠12 h禁食不禁水，摘眼球取血，迅速分離股骨，未做熒光標(biāo)記的小鼠的股骨于體積分?jǐn)?shù)10%中性甲醛溶液固定，用于骨密度的檢測；熒光標(biāo)記的小鼠的股骨于體積分?jǐn)?shù)95%乙醇溶液中固定，用于礦化沉積率測定；迅速分離脛骨，包裹于錫箔紙中暫存于液氮，轉(zhuǎn)移至-80 ℃保存，用于基因檢測。

1.3.2 尿液生化指標(biāo)的測定

尿液中鈣、磷濃度的檢測參照試劑盒說明書進(jìn)行。

1.3.3 股骨骨密度的檢測

將固定24 h的股骨流水沖洗24 h，包裹于生理鹽水浸泡過的紗布，-20 ℃儲(chǔ)存。檢測前將小鼠股骨取出平衡至室溫，將右側(cè)股骨置于小動(dòng)物模式的雙能X射線骨密度掃描儀，并用相關(guān)軟件分析骨密度結(jié)果。

1.3.4 股骨骨礦化沉積率的測定

將24 h固定的股骨流水沖洗24 h，脫鈣過程3 h，使用質(zhì)量分?jǐn)?shù)10%乙二胺四乙酸脫鈣液，后再次流水沖洗24 h。脫水包埋后，制作10 μm骨切片并觀察，拍照與合成使用熒光顯微鏡。使用Image J軟件測量黃綠兩條線之間的平均寬度，與兩次注射的間隔時(shí)間相除得骨礦化沉積率。

1.3.5 qPCR分析

按照RNA柱式抽提試劑盒的方法提取脛骨總RNA。在M-MLV逆轉(zhuǎn)錄酶催化下，使1 μg的RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，具體反應(yīng)條件及體系參照逆轉(zhuǎn)錄酶M-MLV說明書。以逆轉(zhuǎn)錄獲得的cDNA為模板，進(jìn)行qPCR分析。反應(yīng)體系：cDNA 5 μL、上下游引物各0.75 μL、SYBR 12.5 μL、雙蒸水6 μL。95 ℃預(yù)變性10 min；95 ℃變性15 s，60 ℃退火10 s，72 ℃延伸45 s，共45 個(gè)循環(huán)。以內(nèi)參基因β-actin校正各基因mRNA的表達(dá)量，實(shí)驗(yàn)所用引物序列如表1所示。

表 1 Wnt/β-catenin通路qPCR相關(guān)基因引物序列Table 1 Primer sequences used for qPCR ampli fi cation of genes involved in the Wnt/β-catenin signaling pathway

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

通過SPSS 11.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析：采用單因素方差分析，并采用最小顯著性差異法進(jìn)行兩兩比較；P＜0.05時(shí)認(rèn)為具有顯著性差異，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用 ±s表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 海參皂苷去卵巢小鼠尿鈣、尿磷濃度的影響

表 2 海參皂苷對去卵巢小鼠尿鈣、尿磷濃度的影響（n＝10）Table 2 Effect of SCS on the urinary levels of calcium and phosphorus in osteoporotic mice (n= 10)

鈣、磷是骨中無機(jī)質(zhì)的重要組分，當(dāng)體內(nèi)溶解骨礦活動(dòng)增加時(shí)，其流經(jīng)血液由尿液排出體外。如表2所示，模型組小鼠尿鈣、尿磷水平較假手術(shù)組分別增加了40.82%和56.93%，表明去卵巢小鼠體內(nèi)溶骨活性增強(qiáng)，骨礦物質(zhì)降解、流失嚴(yán)重。海參皂苷的干預(yù)使去卵巢小鼠尿鈣、尿磷的排泄量較模型組小鼠顯著降低，提示海參皂苷有顯著的抑制去卵巢小鼠骨礦物質(zhì)流失的功效。

2.2 海參皂苷提高去卵巢小鼠股骨骨密度

圖 1 海參皂苷對股骨骨密度的影響（n＝ 7）Fig. 1 Effect of SCS on BMD of the femur (n = 7)

骨礦物質(zhì)流失使得骨礦含量逐漸減少，最終導(dǎo)致骨密度降低，這也是骨質(zhì)疏松發(fā)病的重要表現(xiàn)。如圖1所示，模型組小鼠較假手術(shù)組小鼠的股骨骨密度下降了16.95%，差異極顯著（P＜0.01），表明骨質(zhì)疏松在模型組小鼠中已經(jīng)發(fā)生。小鼠經(jīng)海參皂苷干預(yù)后，股骨骨密度得到明顯提升，與模型組相比，低、高劑量海參皂苷組股骨骨密度分別升高了18.03%（P＜0.01）和15.99%（P＜0.01）。結(jié)果表明，海參皂苷能夠抑制小鼠因去卵巢引起的骨礦物質(zhì)流失，提高去卵巢小鼠骨密度。

2.3 海參皂苷提高去卵巢小鼠骨礦化沉積

骨礦化是指在形成骨質(zhì)過程中，羥基磷灰石經(jīng)由鈣、磷等無機(jī)鹽形成，一定條件下沉積到類骨質(zhì)中。骨礦化沉積率反映了骨重建階段成骨細(xì)胞礦化類骨質(zhì)的能力[15]。鹽酸四環(huán)素和鈣黃綠素能夠與鈣螯合并沉積在骨礦化前沿，因此兩種熒光標(biāo)記之間的距離直觀反映了兩次注射期間的骨礦化情況。

圖 2 海參皂苷對去卵巢小鼠骨礦化（A）（20×）和骨礦化沉積率（B）的影響（n＝ 3）Fig. 2 Effect of SCS on the bone mineralization (A) (20 ×) and MAR (B) in ovariectomized mice (n = 3)

如圖2所示，模型組小鼠由于骨質(zhì)疏松的發(fā)生骨礦化沉積水平降低，海參皂苷干預(yù)后，去卵巢小鼠骨礦化能力得到了一定的恢復(fù)。骨礦化沉積率結(jié)果也表明，去卵巢小鼠礦化沉積率較假手術(shù)組明顯降低，低、高劑量海參皂苷組小鼠骨礦化沉積率較模型組小鼠顯著升高，分別升高了91.41%和94.59%。

2.4 海參皂苷調(diào)節(jié)去卵巢小鼠ALP、OCN、COL1a、BMP2基因表達(dá)水平

骨生成代償性增加引起的骨生成紊亂，是絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥區(qū)別于其他類型的主要特點(diǎn)。骨生成的功能細(xì)胞——成骨細(xì)胞能夠分泌多種細(xì)胞因子和酶類促進(jìn)骨基質(zhì)的合成，其中ALP、OCN、COL1a和BMP2是敏感的骨生成標(biāo)志指標(biāo)基因。前期實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，低、高劑量海參皂苷對骨質(zhì)疏松的改善作用差別不明顯，故后續(xù)實(shí)驗(yàn)中提取了低劑量海參皂苷組小鼠脛骨的RNA，從mRNA水平探究海參皂苷對骨生成的作用。

圖 3 海參皂苷對成骨表觀指標(biāo)相關(guān)基因mRNA表達(dá)的影響（n＝ 10）Fig. 3 Effect of SCS on the relative mRNA expression of bone formation markers (n = 10)

由圖3可知，與假手術(shù)組相比，模型組小鼠ALP、OCN、COL1a、BMP2的mRNA相對表達(dá)水平顯著增加，分別上升了15.63%、60.94%、28.30%和52.69%，表現(xiàn)為高骨生成。海參皂苷的干預(yù)可以顯著抑制代償性增加的骨生成水平，與模型組相比，4 種指標(biāo)的mRNA相對表達(dá)水平分別下降了10.81%、66.99%、43.38%和42.96%。結(jié)果提示，海參皂苷可以有效降低去卵巢小鼠骨生成特異性指標(biāo)的mRNA相對表達(dá)水平，調(diào)控去卵巢小鼠高骨生成狀態(tài)進(jìn)而改善骨質(zhì)疏松。

2.5 海參皂苷通過調(diào)節(jié)Wnt/β-catenin抑制高骨生成

Wnt信號(hào)不僅與骨骼發(fā)育有關(guān)，還與成骨細(xì)胞的增殖分化、生長凋亡、骨代謝等多個(gè)方面緊密相關(guān)，其中Wnt/β-catenin通路對骨生成有重要調(diào)節(jié)作用。

圖 4 海參皂苷對Wnt/β-catenin通路關(guān)鍵基因mRNA表達(dá)的影響（n＝10）Fig. 4 Effect of SCS on the relative mRNA expression of key genes involved in the Wnt/β-catenin signaling pathway (n=10)

Wnt信號(hào)的激活依賴于Wnt與其膜受體LRP5的結(jié)合。由圖4可知，模型組小鼠Wnt10b和LRP5的mRNA表達(dá)水平較假手術(shù)組均明顯增加（P＜0.05），表現(xiàn)出高骨生成的特征。與模型組相比，海參皂苷組Wnt10b和LRP5的mRNA水平分別降低了9.82%（P＜0.05）和18.45%（P＜0.05），提示海參皂苷可以通過減少去卵巢小鼠骨組織中Wnt10b和LRP5的結(jié)合，抑制小鼠Wnt/β-catenin通路的激活。

細(xì)胞中糖原合成酶激酶3β（glycogen synthase kinase 3 beta，GSK-3β）能夠與Axin、腺瘤性結(jié)腸息肉病蛋白（adenomatous polyposis coli，APC）形成復(fù)合體，能使β-catenin磷酸化后被進(jìn)一步降解，抑制β-catenin入核。如圖4所示，與假手術(shù)組比較，模型組小鼠GSK-3β的mRNA表達(dá)水平降低了36.84%（P＜0.05），而β-catenin mRNA表達(dá)水平則升高了82.21%（P＜0.01），表明模型組小鼠穩(wěn)定的β-catenin增多，骨生成作用提高。海參皂苷干預(yù)后，GSK-3β的mRNA表達(dá)水平上調(diào)了60.42%（P＜0.05），同時(shí)β-catenin的mRNA表達(dá)水平降低了39.58%（P＜0.01），提示海參皂苷能夠上調(diào)GSK-3β來抑制β-catenin積累從而抑制β-catenin入核啟動(dòng)核轉(zhuǎn)錄因子，抑制高骨生成，改善去卵巢小鼠骨質(zhì)疏松。

Runt相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子2（Runt-related transcription factor 2，Runx2）和成骨細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)錄因子（osterix，OSX）是調(diào)控成骨細(xì)胞成熟的重要因素，受核β-catenin調(diào)控。由圖4可知，模型組小鼠脛骨中的Runx2和OSX的mRNA表達(dá)水平較假手術(shù)組分別增加了68%（P＜0.01）和24.31%（P＜0.05），而海參皂苷能夠顯著下調(diào)Runx2和OSX的mRNA表達(dá)水平，表明海參皂苷能夠通過下調(diào)骨生成的核轉(zhuǎn)錄因子來抑制去卵巢小鼠成骨細(xì)胞分化成熟，進(jìn)而抑制高骨生成。

3 討 論

本實(shí)驗(yàn)采用雙側(cè)去卵巢術(shù)建立小鼠絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥模型，研究海參皂苷對去卵巢小鼠骨密度的影響與作用機(jī)制。結(jié)果表明：海參皂苷能夠降低尿鈣、尿磷濃度，減少骨礦流失，增強(qiáng)骨密度和骨礦化沉積，表現(xiàn)出改善骨質(zhì)疏松癥的作用；海參皂苷能夠下調(diào)Wnt/β-catenin通路，降低ALP、OCN、COL1a、BMP2的mRNA表達(dá)水平，抑制高骨生成，可能是通過抑制骨吸收，從而緩解了骨生成的代償性升高改善骨質(zhì)疏松。

人體成熟骨組織一直處于骨吸收與骨生成維持動(dòng)態(tài)平衡的新陳代謝過程[16-17]。當(dāng)骨吸收作用大于骨生成作用時(shí)，骨重構(gòu)動(dòng)態(tài)平衡被打破，導(dǎo)致骨量丟失，進(jìn)而引起骨密度減小，骨強(qiáng)度降低，最終造成骨質(zhì)疏松的發(fā)生[18]。卵巢衰退、雌激素減少的絕經(jīng)后婦女骨吸收加快，盡管骨生成代償性升高，但不能彌補(bǔ)更快的骨吸收過程，最終導(dǎo)致了高轉(zhuǎn)換型的絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松。

骨基質(zhì)的解離包括兩個(gè)方面：礦化羥磷灰石的溶解和骨有機(jī)成分的降解[19]。其中正常礦化的羥磷灰石被溶解為鈣磷進(jìn)入血液，流經(jīng)腎臟后以尿液的形式排出體外[20]。王姍姍等[20]研究發(fā)現(xiàn)，雌性大鼠摘除雙側(cè)卵巢后，尿鈣、尿磷濃度顯著升高。本實(shí)驗(yàn)中，去卵巢小鼠尿液中鈣、磷濃度顯著增加，表明模型組小鼠體內(nèi)溶骨活性增強(qiáng)，羥磷灰石分解加快，海參皂苷的干預(yù)顯著抑制了骨礦物質(zhì)的溶解，有效調(diào)節(jié)了體內(nèi)的骨礦流失情況。

骨礦物質(zhì)流失使得骨礦含量逐漸降低，最終導(dǎo)致骨密度降低，這也是骨質(zhì)疏松發(fā)病的重要表現(xiàn)。骨密度是診斷骨質(zhì)疏松癥、評價(jià)骨強(qiáng)度的重要依據(jù)[21-22]。Huang Qiang等[23]研究發(fā)現(xiàn)，人參皂苷Rb2能夠增加去卵巢大鼠的骨密度；He Long等[24]的研究證明，人參皂苷Rh2能改善RANKL誘導(dǎo)的骨丟失，提高骨密度。實(shí)驗(yàn)中對骨密度檢測發(fā)現(xiàn)，海參皂苷的干預(yù)有效提高了去卵巢小鼠股骨骨密度，提示海參皂苷能夠改善去卵巢小鼠骨質(zhì)疏松。

骨密度的改善不僅有賴于抑制過度的骨礦流失，也需要增強(qiáng)骨礦化沉積。骨礦化沉積率屬骨計(jì)量學(xué)的動(dòng)態(tài)參數(shù)，是基于熒光物質(zhì)能夠與鈣結(jié)合進(jìn)而參與骨礦化過程的特點(diǎn)，通過活體熒光雙標(biāo)的方法反映骨礦化沉積能力等[25-26]。在本實(shí)驗(yàn)中，通過熒光標(biāo)記切片和骨礦化沉積率發(fā)現(xiàn)，骨質(zhì)疏松發(fā)生時(shí)骨礦化能力隨之降低，海參皂苷能夠顯著提高骨礦化沉積能力，改善去卵巢小鼠骨質(zhì)疏松。

骨基質(zhì)的合成、分泌與礦化均依賴于成骨細(xì)胞分泌的大量骨膠原、骨基質(zhì)及多種重要的細(xì)胞因子和酶類[27]。成骨細(xì)胞合成的ALP是骨組織特有的堿性磷酸酶，能夠提高無機(jī)鹽含量增加骨礦化沉積，進(jìn)而增加成骨[28]。骨組織中最多的非膠原類型蛋白質(zhì)是骨鈣蛋白（osteocalcin，OCN），能夠反映骨轉(zhuǎn)換活躍程度[28]。Col1a是骨的特征性膠原，是骨無機(jī)質(zhì)礦化的基礎(chǔ)[29]。BMP2是強(qiáng)骨生成刺激因子，能夠促進(jìn)間充質(zhì)干細(xì)胞分化為成骨細(xì)胞[30]。通過基因表達(dá)水平的檢測，發(fā)現(xiàn)海參皂苷能夠顯著降低去卵巢骨質(zhì)疏松引起的成骨標(biāo)志物mRNA表達(dá)的升高，有效抑制去卵巢小鼠代償性增加的骨生成。

成骨細(xì)胞分泌堿性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）、OCN等細(xì)胞因子和酶調(diào)節(jié)骨生成作用，而這些細(xì)胞因子和酶的合成則受到調(diào)控成骨細(xì)胞的各類信號(hào)通路的調(diào)節(jié)。前面的實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)海參皂苷能夠降低ALP、OCN等成骨指標(biāo)mRNA表達(dá)水平，因此，接下來可以對調(diào)控ALP、OCN等表達(dá)的成骨信號(hào)通路關(guān)鍵基因進(jìn)行檢測，探究海參皂苷提高骨密度的機(jī)制。Wnt/β-catenin通路對成骨細(xì)胞增殖分化有重要影響[31]，成為治療骨骼疾病的一個(gè)有效靶點(diǎn)，該途徑中任何一個(gè)因子均影響成骨細(xì)胞活性與功能[32]。Wnt信號(hào)的激活能使β-catenin穩(wěn)定積累并轉(zhuǎn)移至細(xì)胞核，使下游RUNX2和OSX等靶基因激活，提高成骨細(xì)胞增殖分化誘導(dǎo)骨生成[32-33]。Wang Fei等[34]研究發(fā)現(xiàn)，去卵巢模型大鼠Wnt/β-catenin通路關(guān)鍵基因表達(dá)上調(diào)，成骨細(xì)胞骨形成活性增強(qiáng)。在本實(shí)驗(yàn)中，海參皂苷的干預(yù)顯著下調(diào)了Wnt10b與LRP5的mRNA表達(dá)，進(jìn)而抑制Wnt信號(hào)激活，通過促進(jìn)GSK-3β的表達(dá)下調(diào)β-catenin，進(jìn)而抑制下游RUNX2和OSX基因的表達(dá)，降低去卵巢小鼠過度活躍的骨生成。