孫宇，王義翠，賈榮玲，劉延鑫，付彤， 高騰云

(1.河南農(nóng)業(yè)大學(xué)牧醫(yī)工程學(xué)院，鄭州 450002； 2.河南中醫(yī)藥大學(xué)，鄭州 450046；3.南陽農(nóng)業(yè)職業(yè)學(xué)院，南陽 473000)

荷斯坦牛是世界各國主要的奶牛品種，各地之間經(jīng) 常會通過運輸引入奶牛，在運輸過程中因生活環(huán)境的變化，迫使動物處于適應(yīng)新環(huán)境下的被動狀態(tài)，同時途中由于驚嚇、擁擠、傷風(fēng)、饑餓、顛簸、溫度等應(yīng)激原的綜合作用，機體的營養(yǎng)代謝和免疫機能發(fā)生改變，不僅出現(xiàn)食欲減退、拉稀等一系列癥狀，還會導(dǎo)致奶牛生長發(fā)育緩慢、生產(chǎn)性能降低，還可能誘發(fā)腹瀉、肺炎等疾病，對奶牛業(yè)發(fā)展產(chǎn)生極大影響[1～4]。

生脈飲具有強心益氣，養(yǎng)陰生津，增強免疫功能，提高機體抵抗力的作用[5]。動物試驗已證實生脈飲有多臟器保護作用[6]，有抗應(yīng)激、抗炎作用[7～10]。在減少運輸應(yīng)激造成牛發(fā)病的添加藥物方面，國內(nèi)很多學(xué)者進行了有益的嘗試[10～13]，但至今國內(nèi)外尚未見關(guān)于生脈飲防治奶牛運輸應(yīng)激的報道。鑒于此，本試驗探討了中草藥試劑生脈飲對荷斯坦青年母牛運輸后的作用效果，為降低奶牛運輸應(yīng)激提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗地點和時間

試驗時間為2017年4月份，試驗地點在鄭州市河南農(nóng)業(yè)大學(xué)實驗牛場。

1.2 試驗藥物與試劑

生脈飲（國藥準(zhǔn)字Z11020363）購自北京同仁堂科技發(fā)展股份有限公司，丙二醛(MDA)試劑盒、超氧化物歧化酶(SOD)試劑盒、超微量Na+/K+-ATP酶試劑盒、谷胱甘肽-過氧化物酶(GSH-Px)試劑盒和總蛋白試劑盒均購自南京建成生物工程研究所。

1.3 試驗處理及飼養(yǎng)管理

選擇15頭體重、月齡相近（10月齡）的青年母牛，隨機分為對照組、運輸應(yīng)激組和生脈飲處理組，每組5頭。對照組牛不進行運輸。運輸應(yīng)激組和生脈飲處理組牛隨機裝車，在模擬道路(包括紅綠燈停車和顛簸路段)上進行3h速度為60km/h的公路運輸（相當(dāng)于從許昌出發(fā)運至鄭州），途中均不提供飲水和食物。生脈飲處理組自運輸前3d至運輸后7d，按120mL/（頭·d）在水中添加生脈飲，由專門實驗人員監(jiān)督試驗牛服用。

到達場舍后，對各組試驗牛在統(tǒng)一飼養(yǎng)管理條件下飼喂。運輸后1d沒有飼喂精飼料，自由飲水，每日人工飼喂2次。

1.4 樣品的采集和指標(biāo)測定

1.4.1 采食量、體溫的測定 每天7∶40對每組牛的平均采食量進行測定；每天8∶30采用獸用體溫計測定全部牛的直腸溫度。

1.4.2 血液樣本的采集與處理

在運輸前1d，運輸后1d、7d、14d對各組試驗牛采集尾靜脈血10mL，ACD抗凝，迅速用冰盒帶回實驗室，1 500r/min離心15min，分離上層血清以備測定血清無機離子含量、GSH-Px、SOD酶活力和MDA含量；下層的紅細胞備測紅細胞膜Na+/K+-ATP酶活力。

1.4.3 血液生化指標(biāo)的測定

采用 Abacus Junior VET全自動血常規(guī)分析儀測定血液相關(guān)指標(biāo)。

1.4.4 血清抗氧化指標(biāo)的測定

GSH-Px活性采用二硫代二硝基苯甲酸法測定；SOD活性采用黃嘌呤氧化法測定；MDA含量采用硫代巴比妥酸(TBA)方法測定；紅細胞膜Na+/K+-ATP酶用比色法測定；總抗氧化能力(T-AOC)等指標(biāo)測定均嚴格按照試劑盒說明書進行。

1.4.5 生長性能及健康狀況記錄

于運輸后1、7、14d稱重，計算14d平均日增重；此外，觀察并記錄14d內(nèi)所有試驗牛的發(fā)病情況，主要觀察呼吸道疾病和消化系統(tǒng)疾病。

1.5 數(shù)據(jù)處理

應(yīng)用SPSS 19.0軟件處理試驗數(shù)據(jù)，結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。以O(shè)ne-Way ANOVA進行方差分析，比較不同試驗處理對奶牛血液相關(guān)生理、生化指標(biāo)及增重的影響，同時考察同一組內(nèi)、不同時間點奶牛血液指標(biāo)的變化。采用LSD法進行多重比較，P＜0.05為差異顯著，P＜0.01為差異極顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 生脈飲對荷斯坦青年母牛直腸溫度的影響

表1組內(nèi)比較結(jié)果顯示，運輸應(yīng)激組荷斯坦青年母牛平均直腸溫度在運后1d與其他時間點比較溫度略高，差異顯著（P＜0.05）；對照組和生脈飲處理組平均直腸溫度在運后1d與其他時間點比較，均差異不顯著（P＞0.05）。組間比較結(jié)果顯示，運后1d，運輸應(yīng)激組與對照組和生脈飲處理組比較，平均直腸溫度略高，差異顯著（P＜0.05）。

2.2 生脈飲對荷斯坦青年母牛干物質(zhì)采食量的影響

表2 生脈飲對荷斯坦青年母牛干物質(zhì)采食量的影響單位： kg/(頭·d)

表2組內(nèi)比較結(jié)果顯示，荷斯坦青年母牛平均干物質(zhì)采食量運輸應(yīng)激組和生脈飲處理組在運后7d與其他時間點比較，采食量下降，差異顯著（P＜0.05）；對照組干物質(zhì)采食量在運后7d與其他時間點比較，差異均不顯著（P＞0.05）。組間比較結(jié)果顯示：運后7d干物質(zhì)采食量，運輸應(yīng)激組與對照組和生脈飲處理組比較，均差異顯著（P＜0.05），對照組與生脈飲處理組比較，差異顯著（P＜0.05）；運后14d，運輸應(yīng)激組與對照組和生脈飲處理組比較，差異顯著（P＜0.05）。

表3 生脈飲對荷斯坦青年母牛血液生化指標(biāo)的影響

2.3 生脈飲對荷斯坦青年母牛血液生化指標(biāo)的影響

表3組內(nèi)比較結(jié)果顯示，運輸應(yīng)激組白細胞數(shù)、粒細胞絕對值和粒細胞百分比在運達后1d高于其他時間點，淋巴細胞絕對值和淋巴細胞百分比在運達后1d低于其他時間點，但是差異均不顯著（P＞0.05）。生脈飲處理組的白細胞總數(shù)、粒細胞絕對值和粒細胞百分比在運達后1d高于其他時間點，淋巴細胞絕對值和淋巴細胞百分比在運達后1d低于其他時間點，但是差異均不顯著（P＞0.05）。組間比較結(jié)果顯示，整個試驗期各組之間紅細胞數(shù)、血紅蛋白含量、白細胞數(shù)、淋巴細胞絕對值、粒細胞絕對值、淋巴細胞百分比、粒細胞百分比均差異不顯著（P＞0.05）。

2.4 生脈飲對荷斯坦青年母?？寡趸芰Φ挠绊?/h3>

表4 生脈飲對荷斯坦青年母牛抗氧化能力的影響

由表4可知，運輸應(yīng)激組奶牛在運輸后1d、7d的Na+/K+-ATP酶活性均極顯著低于運輸前1d（P＜0.01），運輸后1d、7d血清SOD活性、GSHPx活性和T-AOC均顯著低于運輸前1d（P＜0.05），運輸后1、7d血清MDA含量顯著高于運輸前1d（P＜0.05）。

在運輸后1d、7d，紅細胞膜Na+/K+-ATP酶活性運輸應(yīng)激組均顯著低于對照組和生脈飲處理組（P＜0.05），后二者間差異不顯著（P＞0.05）。在運輸后1d、7d，血清SOD活性、GSH-Px活性和T-AOC運輸應(yīng)激組顯著低于對照組和生脈飲處理組（P＜0.05）。在運輸后1d、7d，血清MDA含量運輸應(yīng)激組顯著高于對照組和生脈飲處理組(P＜0.05)。

2.5 生脈飲對荷斯坦青年母牛平均日增重和發(fā)病率的影響

由表5可知，運輸應(yīng)激組運輸后14d呼吸道發(fā)病率和消化道發(fā)病率分別達到15%和20%，而生脈飲處理組分別為0和10%。對照組和生脈飲處理組運輸后14d平均日增重均極顯著高于運輸應(yīng)激組（P＜0.01）。

表5 生脈飲對荷斯坦青年母牛平均日增重和發(fā)病率的影響

3 討論

胡長敏等[14]對三種抗牛運輸應(yīng)激技術(shù)效果比較的研究結(jié)果表明，運輸前后相比，試驗組牛體溫平均值比對照組均有輕度升高，但差異不顯著。本研究證明，運輸應(yīng)激影響了奶牛正常的體溫，這與胡長敏等研究結(jié)果一致。在本研究中，運輸應(yīng)激組奶牛體溫略有升高（P＜0.05）；生脈飲處理組與對照組及其他時間點比較無顯著差異，原因可能是生脈飲能滋陰清熱，具有抗疲勞作用[15]，有利于穩(wěn)定運輸應(yīng)激造成的奶牛體溫改變。

Mackenzie等[16]研究表明，奶牛在運輸過程中會精神不安、肌肉緊張，大多會飲食廢止，運輸后因反芻規(guī)律可能被打亂，采食量減少。在本研究中，運輸后的牛采食量明顯下降，與以上研究結(jié)果一致。本研究發(fā)現(xiàn)生脈飲不僅使奶牛試驗期的干物質(zhì)采食量得到顯著改善（P＜0.05），日增重也明顯提高（P＜0.05）；生脈飲處理組奶牛在投喂生脈飲期間，平均日采食量有上升趨勢，顯著高于運輸應(yīng)激組的奶牛，日增重顯著高于運輸應(yīng)激組，表明在運輸后的飼喂過程中，生脈飲有提高奶牛日采食量、增加日增重的作用，原因可能在于生脈飲味微苦甘，益氣復(fù)脈、養(yǎng)陰生津，從而能提高動物的生長性能等[17]。

機體處于應(yīng)激狀態(tài)時，免疫功能下降[4]。運后第7天時，生脈飲處理組奶牛血液中的白細胞數(shù)目有增高趨勢，這提示生脈飲可以提高應(yīng)激奶牛的細胞免疫力[18]；在試驗期內(nèi)，各組之間紅細胞數(shù)、血紅蛋白含量、白細胞數(shù)、淋巴細胞絕對值、粒細胞絕對值、淋巴細胞百分比、粒細胞百分比均差異不顯著，表明生脈飲對奶牛血液相關(guān)指標(biāo)的影響不大，表明生脈飲可以安全應(yīng)用于奶牛生產(chǎn)中。

機體的氧化/抗氧化狀態(tài)平衡可能會被應(yīng)激破壞，造成細胞功能異常。ATP酶可以為細胞輸入許多新陳代謝所需的物質(zhì)并輸出毒物、代謝廢物以及其他可能阻礙細胞進程的物質(zhì)。鈉鉀ATP酶（又稱為鈉/鉀離子ATP酶）能夠調(diào)節(jié)細胞內(nèi)鈉/鉀離子的濃度，從而保持細胞的靜息電位，其活性對細胞正常功能的維持具有重要意義[18]。本試驗結(jié)果表明，運輸應(yīng)激對血清SOD活性等均有顯著影響，表明短途運輸產(chǎn)生的應(yīng)激對試驗牛造成了一定程度的氧化損傷；但生脈飲處理組在運輸后，血清SOD活性顯著高于運輸應(yīng)激組，MDA含量顯著低于運輸應(yīng)激組（P＜0.05），表明生脈飲有利于機體保持氧化/抗氧化狀態(tài)的平衡。曲維忠等[9]研究表明，生脈飲可顯著增強小鼠血清中SOD活性并降低MDA含量，本試驗結(jié)果與其一致，表明生脈飲增強了機體的抗氧化功能，在一定程度上緩解了運輸應(yīng)激對奶牛的影響。

生脈飲可增強動物機體免疫功能，改善心臟功能，調(diào)整心肌代謝，增強抵抗力；生脈飲具有顯著抗炎作用，可提高動物對疾病的抵抗力。本研究表明，生脈飲處理組牛的呼吸道和消化道發(fā)病率明顯減少。

4 結(jié)論

運輸前3d添加生脈飲，運輸后可以降低奶牛體溫，提高奶牛干物質(zhì)采食量，降低MDA的含量，增強機體的抗氧化功能；生脈飲用于奶牛生產(chǎn)是安全的；綜合考慮各個因素，在奶牛運輸前建議添加120mL/(頭·d)生脈飲，以減輕運輸應(yīng)激對荷斯坦青年母牛造成的危害。