史利歡 劉 煒 田 亮 劉俊閃 郭明發(fā)

河南省兒童醫(yī)院，鄭州兒童醫(yī)院(河南 鄭州450000)

急性淋巴細(xì)胞白血病(ALL)是兒童最常見(jiàn)的惡性腫瘤，占兒童白血病的70%～85%，發(fā)病高峰發(fā)生在學(xué)齡前兒童[1]。患者發(fā)病后自身造血干細(xì)胞增殖分化功能異常，以至于淋巴細(xì)胞數(shù)量減少，屬于兒童時(shí)期惡性克隆性疾病。針對(duì)該疾病的發(fā)病機(jī)制及疾病原因尚處于研究狀態(tài)，但是國(guó)外研究人員發(fā)現(xiàn)該病可能與基因以及細(xì)胞死亡等方面有一定關(guān)聯(lián)性[2-3]。有報(bào)道指出[4-5]，白血病的發(fā)生及發(fā)展進(jìn)程中與機(jī)體多種基因之間存在關(guān)聯(lián)性，本次研究對(duì)急性淋巴細(xì)胞性白血病患兒治療前后Bmal1、eIF4E基因表達(dá)水平變化進(jìn)行研究并分析其相關(guān)性，特作以下報(bào)道。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2016年1月～2017年8月我院收治30例未經(jīng)任何臨床治療的初治確診急性淋巴細(xì)胞性白血病患兒作為研究組，其中男16例，女14例，年齡1～11歲，平均年齡(5.6±1.2)歲，該組患兒經(jīng)過(guò)臨床治療后，采取骨髓形態(tài)學(xué)、免疫學(xué)、遺傳學(xué)及分子生物學(xué)等檢查其骨髓緩解情況，另選擇健康兒童30例作為對(duì)照組，其中男15例，女15例，年齡1～11歲，平均年齡(5.4±1.5)歲，所有患兒均排除心、肝、腎器質(zhì)性病變，患兒家屬自愿加入本次研究，并簽署相應(yīng)知情同意文件?；純阂话阗Y料無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)，醫(yī)院倫理委員會(huì)審核通過(guò)。

1.2方法

1.2.1 樣本：研究組化療前、研究組化療后及對(duì)照組兒童留取靜脈血2ml，EDTA抗凝，所有操作在無(wú)菌環(huán)境下進(jìn)行。

1.2.2 對(duì)血液樣本單個(gè)核細(xì)胞進(jìn)行分離：靜脈全血與無(wú)菌生理鹽水1∶1混勻稀釋至4ml，血液稀釋液與淋巴細(xì)胞分離液以2∶1比例分離單個(gè)核細(xì)胞，離心20min提取中間白膜層。無(wú)菌鹽水反復(fù)洗滌后，制備單個(gè)核細(xì)胞懸液。

1.2.3 RNA提?。?jiǎn)蝹€(gè)核細(xì)胞懸浮液加入1ml Trizo混勻，常溫靜置5min，加入200μL的氯仿，震蕩混勻，靜置5min后離心15min，取無(wú)色水相至離心管內(nèi)并加入等量異丙醇，10min后再次離心，棄上清靜置3min，加DEPC水20ul，最終選取RNA后逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA。

1.2.4 定量RT-PCR檢測(cè)Bmal1、eIF4E mRNA水平：反轉(zhuǎn)錄用RNA-cDNA試劑盒(ABI，Carlsbad，CA)進(jìn)行，熒光定量PCR用ABI TaqMan引物和試劑在Roche LightCycler 480II上進(jìn)行檢測(cè)。所有mRNA測(cè)量均標(biāo)準(zhǔn)化為β-actin mRNA水平。

2 結(jié)果

2.1研究組患兒化療前與化療后Bmal1、eIF4E基因水平對(duì)比 研究組患兒化療前外周血Bmal1、eIF4E基因水平高于化療后(P<0.05)，具體見(jiàn)表1。

表1 研究組患兒化療前與化療后Bmal1、eIF4E基因水平對(duì)比

2.2研究組患兒化療后與對(duì)照組患兒Bmal1、eIF4E基因水平對(duì)比 研究組患兒化療后外周血Bmal1、eIF4E基因水平高于對(duì)照組(P<0.05)，具體見(jiàn)表2。

表2 研究組患兒化療后與對(duì)照組患兒Bmal1、eIF4E基因水平對(duì)比

2.3研究組患兒化療前與對(duì)照組患兒Bmal1、eIF4E基因水平對(duì)比 研究組患兒化療前外周血Bmal1、eIF4E基因水平高于對(duì)照組(P<0.05)，具體見(jiàn)表3。

表3 研究組患兒化療前與對(duì)照組患兒Bmal1、eIF4E基因水平對(duì)比

3 討論

研究發(fā)現(xiàn)急性淋巴細(xì)胞性白血病患者病情發(fā)展受到自身體內(nèi)多種基因的影響[6]。eIF4E是一種蛋白質(zhì)合成翻譯起始的限速因子，如細(xì)胞核內(nèi)部的表達(dá)超過(guò)正常范圍則會(huì)加速細(xì)胞增生，細(xì)胞自身死亡進(jìn)程受到明顯抑制作用，分裂與死亡失衡狀態(tài)下易發(fā)生細(xì)胞癌變[7]。另外研究還發(fā)現(xiàn)多種類(lèi)型腫瘤細(xì)胞內(nèi)部的eIF4E基因表達(dá)均處于升高狀態(tài)，充分表明這種基因的表達(dá)與腫瘤存在某種關(guān)聯(lián)性[8-9]。流行病學(xué)針對(duì)基因的節(jié)律性進(jìn)行大量分析發(fā)現(xiàn)，癌癥易感性與之存在一定關(guān)聯(lián)，并且有研究人員在自身研究結(jié)果支持下大膽做出腫瘤的出現(xiàn)與患者機(jī)體內(nèi)晝夜節(jié)律的控制基因變化有很大關(guān)聯(lián)性的設(shè)想[10]。并逐步對(duì)其進(jìn)行深入的研究，而B(niǎo)mal1基因就屬于節(jié)律控制的主要核心參與基因之一，對(duì)節(jié)律的調(diào)節(jié)起到至關(guān)重要的作用，但因內(nèi)容較為復(fù)雜，目前尚處于研究狀態(tài)，并未給出準(zhǔn)確定量[11]。

研究數(shù)據(jù)顯示，研究組化療前外周血Bmal1、eIF4E基因水平高于化療后(P<0.05)，研究組化療前外周血Bmal1、eIF4E基因水平高于對(duì)照組(P<0.05)，研究組化療后外周Bmal1、eIF4E基因水平高于對(duì)照組(P<0.05)。這是因?yàn)閑IF4E基因是一種單純的限速因子，并不能直接參與癌細(xì)胞生成。而研究發(fā)現(xiàn)初診患兒該基因表達(dá)極高，對(duì)于診斷、治療等方面存在明顯的特異性，可作為確診及治療效果判定的主要特異性指標(biāo)之一，可對(duì)患者診斷及預(yù)后治療產(chǎn)生積極的影響，具有較高的臨床價(jià)值。Bmal1水平變化與患兒疾病進(jìn)展及化療效果存在明顯的聯(lián)系。研究發(fā)現(xiàn)50%以上患兒自身Bmal1基因表達(dá)處于正常水平，但是另外少部分患兒Bmal1基因則出現(xiàn)甲基化，足以證實(shí)該基因表達(dá)與疾病發(fā)生發(fā)展存在關(guān)聯(lián)性，可在臨床診斷及治療中作為特異性指標(biāo)使用[12]。

綜上所述，在針對(duì)兒童急性淋巴細(xì)胞性白血病的初診篩查中，外周血Bmal1、eIF4E基因指標(biāo)特異性明顯，可作為相關(guān)性指標(biāo)進(jìn)行篩查診斷，另外因治療對(duì)Bmal1、eIF4E基因水平影響效果明顯，也可作為治療效果觀察指標(biāo)在臨床中使用。