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(1.徐州工程學(xué)院食品(生物)工程學(xué)院,江蘇徐州 221018;2.江蘇省食品資源開(kāi)發(fā)與質(zhì)量安全重點(diǎn)建設(shè)實(shí)驗(yàn)室,江蘇徐州 221018)

酒精性肝病(Alcoholic liver disease,ALD)為我國(guó)第二大肝病,初期表現(xiàn)為脂肪肝,進(jìn)而發(fā)展成肝炎、肝硬化等[1]。氧化應(yīng)激引起的機(jī)體抗氧化防御系統(tǒng)受損和脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物增加,被認(rèn)為在A(yíng)LD發(fā)病機(jī)制中扮演重要角色[2]。肝臟是乙醇代謝的主要場(chǎng)所,長(zhǎng)期大量飲酒可產(chǎn)生過(guò)量的活性氧和過(guò)氧化產(chǎn)物,使肝組織中超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)、過(guò)氧化氫酶(Catalase,CAT)和谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(Glutathione peroxidase,GSH-Px)等抗氧化酶活性下降,造成肝細(xì)胞損傷[3]。攝入外源抗氧化劑,提高機(jī)體抗氧化能力,消除酒精所致的氧化應(yīng)激,被認(rèn)為是ALD的有效療法之一[4]。近年來(lái),在酒精性肝損傷治療藥物的篩選中,天然產(chǎn)物中的三萜類(lèi)物質(zhì)受到廣泛關(guān)注,從靈芝[5]、茯苓[6]、北五味子[7]、蕨麻[8]和垂盆草[9]等大型真菌和植物中分離得到的三萜已被證實(shí)具有較好的保肝作用。

東方栓孔菌(Trametesorientalis)為多孔菌科栓孔菌屬真菌,可用于肺結(jié)核和支氣管炎等疾病的治療[10]。子實(shí)體中蛋白含量高約18.01%,脂肪含量低約1.58%,氨基酸組成合理,富含多種礦質(zhì)元素[11]。多糖和三萜是東方栓孔菌的主要活性成分,東方栓孔菌多糖具有較好抗氧化、免疫調(diào)節(jié)和抗腫瘤活性[12-13],有關(guān)東方栓孔菌三萜的研究卻較少。東方栓孔菌子實(shí)體中三萜含量約3.52%,高于茯苓、靈芝中的三萜含量,具有較好的體外抗氧化活性[11]。目前有關(guān)較高純度的東方栓孔菌三萜類(lèi)物質(zhì)的富集工藝及體內(nèi)生物活性的研究鮮有報(bào)道。大孔樹(shù)脂吸附法具有高效、經(jīng)濟(jì)、易再生等優(yōu)點(diǎn),廣泛用于天然產(chǎn)物中多酚、黃酮和三萜等某一類(lèi)化合物總組分的純化,大孔樹(shù)脂純化三萜類(lèi)物質(zhì)應(yīng)用廣泛,許多研究者已經(jīng)成功利用大孔樹(shù)脂對(duì)三萜類(lèi)化合物進(jìn)行純化和富集[14-16]。

本文采用大孔吸附樹(shù)脂法對(duì)東方栓孔菌三萜粗提物的純化工藝進(jìn)行優(yōu)化,并探究了經(jīng)大孔樹(shù)脂純化后的東方栓孔菌三萜對(duì)酒精致急性肝損傷小鼠的保護(hù)作用,旨在為東方栓孔菌三萜的開(kāi)發(fā)利用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

東方栓孔菌子實(shí)體 吉林樺甸;昆明小鼠(SCXK魯20140007) (20±2) g,濟(jì)南朋悅實(shí)驗(yàn)動(dòng)物繁育有限公司;丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(Alanine aminotransferase,ALT)、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(Aspartate aminotransferase,AST)、SOD、CAT、GSH-Px、丙二醛(Malondialdehyde,MDA)測(cè)試盒 南京建成生物工程研究所;水飛薊賓 天津天士力圣特制藥有限公司;熊果酸(CAS77-52-1) 上海生工生物試劑;5種供試大孔樹(shù)脂的部分特性見(jiàn)表1;其他試劑 均為國(guó)產(chǎn)分析純。

表1 五種不同大孔樹(shù)脂的部分特性Table 1 Partial properties of five different macroporous resins

723C可見(jiàn)分光光度計(jì) 上海精密科學(xué)儀器有限公司;DCTZ-2000多用途恒溫超聲提取機(jī) 北京弘祥隆生物技術(shù)股份有限公司;LGJ-18A 冷凍干燥機(jī) 北京四環(huán)科學(xué)儀器廠(chǎng);HL-2恒流泵 上海嘉鵬科技有限公司;TGL-16臺(tái)式高速冷凍離心機(jī) 長(zhǎng)沙湘儀有限公司;1.6 cm×30 cm層析柱 上海廈美生化科技發(fā)展有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 粗三萜的提取與含量測(cè)定 東方栓孔菌子實(shí)體40 ℃烘干后粉碎,過(guò)60目篩,稱(chēng)取50 g石油醚脫脂后的粉末,加入750 mL 95%乙醇,置于恒溫超聲提取機(jī)中400 W 50 ℃提取40 min。提取液抽濾后濃縮,-40 ℃冷凍凍干得到三萜粗提物。東方栓孔菌三萜粗提物三萜的質(zhì)量分?jǐn)?shù)測(cè)定參考文獻(xiàn)[14]。

1.2.2 5種樹(shù)脂的靜態(tài)吸附-解吸特性試驗(yàn) 稱(chēng)取預(yù)處理后的5種大孔樹(shù)脂各1 g,置于三角瓶中,分別加入15 mL東方栓孔菌三萜粗提物溶液(三萜質(zhì)量濃度為2.627 g/L),在25 ℃下,110 r/min搖床中振蕩吸附24 h后過(guò)濾,測(cè)定濾液中的東方栓孔菌三萜質(zhì)量濃度,根據(jù)公式(1)和(2)計(jì)算各種樹(shù)脂對(duì)東方栓孔菌三萜的吸附量(mg/g)和吸附率(%)。

將吸附后的樹(shù)脂用蒸餾水洗至溶液無(wú)色,加入70%乙醇15 mL,振蕩解吸24 h,過(guò)濾后測(cè)定濾液的東方栓孔菌三萜質(zhì)量濃度,根據(jù)公式(3)和(4)計(jì)算各種樹(shù)脂對(duì)東方栓孔菌三萜的解吸量(mg/g)和解吸率(%)。

式(1);

式(2);

式(3);

式(4)。

式中:C0、C1和C2分別為三萜初始、平衡和洗脫液質(zhì)量濃度(g/L);V1和V2分別為提取液和洗脫液體積(mL);m為樹(shù)脂質(zhì)量(g)。

1.2.3 吸附等溫線(xiàn)制作 在25 ℃下,稱(chēng)取已篩選出的大孔樹(shù)脂(X-5)14份,每份1 g,置于三角瓶中,加入15 mL質(zhì)量濃度分別為0、0.147、0.331、0.693、0.930、1.260、1.510、1.820、2.930、3.910、4.880、5.950、6.790、7.910 g/L東方栓孔菌三萜粗提物溶液,振蕩吸附24 h,至平衡。以平衡后溶液中的東方栓孔菌三萜質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo),吸附量為縱坐標(biāo),制作東方栓孔菌三萜在X-5樹(shù)脂上的吸附等溫線(xiàn)。將所得吸附等溫線(xiàn)數(shù)據(jù)分別按照Langmuir和Freundlich吸附等溫方程進(jìn)行非線(xiàn)性擬合。

式(5);

式(6)。

式中:Qe和Qm分別為平衡和飽和吸附量(mg/g);Ce為平衡質(zhì)量濃度(g/L);Kl和Kf分別為L(zhǎng)angmuir和Freundlich平衡常數(shù);n為特征參數(shù)。

1.2.4 動(dòng)態(tài)吸附與解吸

1.2.4.1 上樣質(zhì)量濃度對(duì)吸附穿透曲線(xiàn)的影響 稱(chēng)取適量X-5樹(shù)脂,濕法裝柱(1.6 cm×30 cm)。在2 BV/h流速下,根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果設(shè)置單因素上樣質(zhì)量濃度范圍。1.06、2.34和3.12 g/L東方栓孔菌三萜粗提物溶液依次過(guò)柱,每1 BV(1 BV表示1倍樹(shù)脂床體積,約60 cm3)收集1管流出液,測(cè)定流出液三萜質(zhì)量濃度,以上樣液體積為橫坐標(biāo),流出液三萜質(zhì)量濃度為縱坐標(biāo),繪制吸附穿透曲線(xiàn)。

1.2.4.2 上樣流速對(duì)吸附穿透曲線(xiàn)的影響 根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果設(shè)置單因素上樣流速范圍。2.34 g/L東方栓孔菌三萜樣品液依次在1、2和3 BV/h流速下分別過(guò)柱,按1.2.4.1方法繪制吸附穿透曲線(xiàn)。

1.2.4.3 乙醇體積分?jǐn)?shù)對(duì)解吸性能的影響 X-5樹(shù)脂對(duì)東方栓孔菌三萜的吸附達(dá)到飽和后,根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果設(shè)置單因素乙醇體積分?jǐn)?shù)范圍。在2 BV/h流速下,使用50%、70%和90%乙醇分別洗脫X-5樹(shù)脂,每1 BV收集1管洗脫液,測(cè)定洗脫液三萜質(zhì)量濃度,以洗脫液體積為橫坐標(biāo),洗脫液三萜質(zhì)量濃度為縱坐標(biāo),繪制洗脫曲線(xiàn)。根據(jù)公式(7)計(jì)算洗脫率。

式(7)

1.2.4.4 洗脫流速對(duì)解吸性能的影響 根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果設(shè)置單因素洗脫流速范圍。東方栓孔菌三萜在X-5樹(shù)脂上飽和吸附后,選用70%乙醇作為解吸液,分別以1、2和3 BV/h流速洗脫X-5樹(shù)脂,按1.2.4.3方法繪制洗脫曲線(xiàn)。

1.2.5 三萜純度與純化倍數(shù)的測(cè)定 X-5樹(shù)脂純化后的三萜溶液經(jīng)濃縮、冷凍干燥得三萜粉末。根據(jù)公式(8)和(9)計(jì)算純度和純化倍數(shù)。

式(8);

式(9)。

1.2.6 動(dòng)物分組與處理 小鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周,隨機(jī)分成6組,每組10只(雌雄各半)。東方栓孔菌三萜純化產(chǎn)物和水飛薊賓均用蒸餾水配制成懸液。陽(yáng)性對(duì)照組小鼠灌胃150 mg/kg水飛薊賓,低、中、高試驗(yàn)組分別灌胃100、200和400 mg/kg東方栓孔菌三萜,正常組和模型組灌胃蒸餾水,每天1次,連續(xù)20 d。之后正常組灌胃蒸餾水,其余組小鼠灌胃50%乙醇(12 mL/kg),每隔12 h一次,連續(xù)3次。

1.2.7 生化指標(biāo)檢測(cè) 末次灌胃50%乙醇12 h后,小鼠眼眶采血,在4 ℃下,3000 r/min離心10 min,收集血清,按照試劑盒說(shuō)明書(shū)測(cè)定血清中ALT和AST酶活;頸椎脫臼處死小鼠,取肝臟,加適量冷生理鹽水,制成10%(m/V)勻漿,按照試劑盒說(shuō)明書(shū)測(cè)定肝組織中SOD、CAT、GSH-Px活性和MDA含量。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 24.0軟件進(jìn)行分析,結(jié)果采用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示,顯著性分析采用Duncan法。

2 結(jié)果與分析

2.1 大孔樹(shù)脂的篩選

如表2,X-5樹(shù)脂對(duì)東方栓孔菌三萜的靜態(tài)吸附率和解吸率均大于其它4種樹(shù)脂,因此選用X-5樹(shù)脂純化東方栓孔菌三萜。

表2 五種不同大孔樹(shù)脂對(duì)東方栓孔菌三萜的靜態(tài)吸附與解吸特性Table 2 Static adsorption and desorption performance of five different macroporous resins on triterpenes from Trametes orientalis

2.2 東方栓孔菌三萜在X-5樹(shù)脂上的吸附等溫線(xiàn)

在25 ℃下,東方栓孔菌三萜在X-5樹(shù)脂上的吸附等溫線(xiàn)如圖1所示。

圖1 X-5樹(shù)脂對(duì)東方栓孔菌三萜的吸附等溫線(xiàn)Fig.1 Adsorption isotherm of X-5 resin on triterpenes from Trametes orientalis

吸附等溫線(xiàn)用于描述恒溫下吸附劑的平衡吸附量與吸附液的平衡質(zhì)量濃度之間的關(guān)系。將圖1中的吸附等溫線(xiàn)分別按照Langmuir和Freundlich方程進(jìn)行非線(xiàn)性擬合,得到兩方程的參數(shù)(表3)。對(duì)比兩方程的決定系數(shù),Langmuir方程能更好地描述東方栓孔菌三萜在X-5樹(shù)脂表面發(fā)生的吸附過(guò)程,亦說(shuō)明X-5樹(shù)脂對(duì)東方栓孔菌三萜的吸附以單分子層吸附為主。

表3 X-5樹(shù)脂吸附東方栓孔菌三萜的Langmuir和Freundlich方程參數(shù)Table 3 Parameters correlated by Langmuir and Freundlich adsorption equations of X-5 resin on triterpenes from Trametes orientalis

2.3 動(dòng)態(tài)吸附與解吸

2.3.1 上樣質(zhì)量濃度對(duì)吸附穿透曲線(xiàn)的影響 如圖2,當(dāng)上樣三萜質(zhì)量濃度為1.06 g/L時(shí),穿透點(diǎn)(流出液三萜質(zhì)量濃度為上樣三萜質(zhì)量濃度的1/10)時(shí)的上樣液體積為8 BV,此時(shí)三萜吸附量為274.9 mg/g,而X-5樹(shù)脂對(duì)三萜的吸附達(dá)到飽和時(shí)的上樣液體積為14 BV;當(dāng)上樣質(zhì)量濃度為2.34 g/L時(shí),穿透點(diǎn)為5 BV,此時(shí)三萜吸附量為413.8 mg/g,飽和吸附時(shí)的上樣液體積為10 BV;當(dāng)上樣質(zhì)量濃度為3.12 g/L時(shí),其穿透點(diǎn)出現(xiàn)在4 BV,此時(shí)三萜吸附量為431.5 mg/g,飽和吸附時(shí)為8 BV。由此可見(jiàn),上樣質(zhì)量濃度越高,穿透點(diǎn)越靠前,穿透曲線(xiàn)越陡峭,達(dá)到飽和吸附的時(shí)間越短。質(zhì)量濃度上升至3.12 g/L時(shí),穿透點(diǎn)處的三萜吸附量增幅不大;且溶液較渾濁,易對(duì)樹(shù)脂造成污染和堵塞。故較適宜的上樣質(zhì)量濃度為2.34 g/L。

圖2 不同上樣質(zhì)量濃度時(shí)X-5樹(shù)脂的吸附穿透曲線(xiàn)Fig.2 Breakthrough curves of X-5 resin at different loading concentrations

2.3.2 上樣流速對(duì)吸附穿透曲線(xiàn)的影響 不同上樣流速時(shí),東方栓孔菌三萜經(jīng)X-5樹(shù)脂的吸附穿透曲線(xiàn)見(jiàn)圖3。上樣流速分別為1、2和3 BV/h時(shí),東方栓孔菌三萜在X-5樹(shù)脂上的吸附穿透點(diǎn)分別為7、5和3 BV,穿透點(diǎn)時(shí)X-5樹(shù)脂對(duì)東方栓孔菌三萜的吸附量分別為582.9、414.6和229.6 mg/g,達(dá)到飽和吸附時(shí)的上樣液體積分別為15、10和7 BV。由此可知,穿透點(diǎn)處X-5樹(shù)脂對(duì)東方栓孔菌三萜的吸附量隨著上樣流速的提高而下降。上樣流速為1 BV/h時(shí),穿透點(diǎn)時(shí)X-5樹(shù)脂對(duì)東方栓孔菌三萜的吸附量最大,但工作周期過(guò)長(zhǎng),效率低下;當(dāng)上樣流速為2 BV/h時(shí),穿透點(diǎn)時(shí)X-5樹(shù)脂對(duì)東方栓孔菌三萜的吸附量稍低,不過(guò)工作效率高于1 BV/h;當(dāng)上樣流速為3 BV/h時(shí),東方栓孔菌三萜上樣液還沒(méi)有被X-5樹(shù)脂完全吸附就流出,吸附效率低下。綜合考慮吸附量與工作效率,上樣流速為2 BV/h較適宜。

圖3 不同上樣流速時(shí)X-5樹(shù)脂的吸附穿透曲線(xiàn)Fig.3 Breakthrough curves of X-5 resin at different loading flow rates

2.3.3 乙醇體積分?jǐn)?shù)對(duì)解吸性能的影響 不同乙醇體積分?jǐn)?shù)時(shí),東方栓孔菌三萜經(jīng)X-5樹(shù)脂的洗脫曲線(xiàn)見(jiàn)圖4。50%、70%和90%的乙醇所對(duì)應(yīng)的東方栓孔菌三萜洗脫率分別為83.25%、91.19%和62.14%。X5樹(shù)脂所吸附的物質(zhì)為非極性,洗脫率應(yīng)隨著乙醇體積分?jǐn)?shù)的增加而增大,然而90%乙醇的洗脫率卻較低,可能由于隨著乙醇體積分?jǐn)?shù)的提高會(huì)使一些醇溶性雜質(zhì)及脂溶性強(qiáng)的雜質(zhì)洗脫下來(lái),而影響三萜的洗脫。使用70%乙醇洗脫時(shí),洗脫率最高,故在解吸X-5樹(shù)脂上所吸附的東方栓孔菌三萜時(shí),70%乙醇為較適宜的解吸液。

圖4 不同乙醇體積分?jǐn)?shù)時(shí)X-5樹(shù)脂的洗脫曲線(xiàn)Fig.4 Elution curves of X-5 resin at different ethanol concentrations

2.3.4 洗脫流速對(duì)解吸性能的影響 由洗脫曲線(xiàn)(圖5)可知,洗脫流速為1、2和3 BV/h對(duì)應(yīng)的洗脫率分別為84.55%、91.67%和65.71%。1 BV/h流速時(shí),存在拖尾現(xiàn)象;3 BV/h流速時(shí),洗脫率較低;2 BV/h流速時(shí),洗脫率最高,且無(wú)拖尾現(xiàn)象。故在解吸X-5樹(shù)脂上所吸附的東方栓孔菌三萜時(shí),洗脫流速宜控制在2 BV/h。

圖5 不同洗脫流速時(shí)X-5樹(shù)脂的洗脫曲線(xiàn)Fig.5 Elution curves of X-5 resin at different elution flow rates

2.3.5 三萜純度與純化倍數(shù)測(cè)定 在上述優(yōu)化的工藝條件下,采用X-5樹(shù)脂純化東方栓孔菌三萜粗提物,洗脫液濃縮、凍干后得到純化產(chǎn)物。粗提物與純化產(chǎn)物的純度分別為27.58%和83.30%,經(jīng)X-5樹(shù)脂純化后,三萜純度是純化前的3倍。

2.4 東方栓孔菌三萜對(duì)小鼠酒精性肝損傷的保護(hù)作用

2.4.1 東方栓孔菌三萜對(duì)血清ALT和AST含量的影響 東方栓孔菌三萜對(duì)酒精致肝損傷小鼠血清ALT和AST含量的影響見(jiàn)圖6。模型組小鼠血清ALT和AST含量均極顯著高于正常組(p<0.01),表明急性酒精攝入造成了小鼠肝細(xì)胞的損傷,這亦說(shuō)明急性酒精性肝損傷小鼠造模成功。東方栓孔菌三萜低、中和高劑量組小鼠血清ALT含量均極顯著低于模型組(p<0.01),三萜劑量越高,兩種轉(zhuǎn)氨酶含量下降的程度亦越高。陽(yáng)性對(duì)照組小鼠血清ALT和AST含量亦極顯著低于模型組(p<0.01)。

圖6 東方栓孔菌三萜對(duì)酒精致肝損傷小鼠血清ALT和AST含量的影響Fig.6 Effects of triterpenes from Trametes orientalison serum ALT and AST levelsin alcohol-treated mice with liver injury注:##與正常組相比,差異極顯著(p<0.01);**與模型組相比,差異極顯著(p<0.01);n=10,表4同。

血清ALT和AST含量升高是肝細(xì)胞損傷的敏感指標(biāo),乙醇代謝過(guò)程中產(chǎn)生的活性氧可損害生物膜,導(dǎo)致血清ALT和AST升高[17]。低、中和高劑量東方栓孔菌三萜均能顯著拮抗酒精誘導(dǎo)的小鼠血清ALT和AST含量升高,表明東方栓孔菌三萜對(duì)酒精致小鼠急性肝損傷具有較好保護(hù)作用。

2.4.2 東方栓孔菌三萜對(duì)肝組織中抗氧化酶和MDA含量的影響 表4為東方栓孔菌三萜對(duì)酒精致急性肝損傷小鼠的肝組織SOD、CAT、GSH-Px活性和MDA含量的影響。模型組小鼠肝臟SOD、CAT、GSH-Px活性均極顯著低于正常組(p<0.01),MDA含量極顯著高于正常組(p<0.01),表明急性酒精攝入造成了小鼠肝臟抗氧化防御系統(tǒng)的損傷,亦進(jìn)一步說(shuō)明急性酒精性肝損傷小鼠造模成功。東方栓孔菌三萜低、中、高劑量組小鼠肝臟中SOD、CAT、GSH-Px活性均極顯著高于模型組(p<0.01),MDA含量極顯著低于模型組(p<0.01)。三萜劑量越高,抗氧化酶上升與MDA下降的程度亦越高。陽(yáng)性對(duì)照亦能極顯著提高抗氧化酶活性(p<0.01),降低MDA含量(p<0.01)。

表4 東方栓孔菌三萜對(duì)酒精致肝損傷小鼠肝臟SOD、CAT、GSH-Px活性和MDA含量的影響Table 4 Effects of triterpenes from Trametes orientalis on liver SOD,CAT,GSH-PX activities and MDA levels in alcohol-treated mice with liver injury

SOD、CAT、GSH-Px等抗氧化酶是機(jī)體抗氧化防御體系的重要組成部分[18];MDA則是脂質(zhì)過(guò)氧化的主要終產(chǎn)物,可造成機(jī)體進(jìn)一步損傷,MDA含量可反映機(jī)體氧化損傷的程度[19-20]。東方栓孔菌三萜能顯著提高酒精誘導(dǎo)的小鼠肝臟SOD、CAT和GSH-Px活性,降低MDA含量,表明東方栓孔菌三萜可提高機(jī)體抗氧化能力,減少脂質(zhì)過(guò)氧化的發(fā)生。結(jié)合東方栓孔菌三萜的體外抗氧化活性[11],可初步認(rèn)為東方栓孔菌三萜可能是通過(guò)提高體內(nèi)抗氧化酶活性、直接清除自由基和螯合金屬離子等途徑發(fā)揮其對(duì)急性酒精性肝損傷的保護(hù)作用。這與前人研究結(jié)果較一致,很多其它來(lái)源的三萜類(lèi)物質(zhì)也是通過(guò)抗氧化途徑發(fā)揮其對(duì)實(shí)驗(yàn)性肝損傷的保護(hù)作用[21-23]。

3 結(jié)論

所選5種供試大孔樹(shù)脂中,X-5樹(shù)脂對(duì)東方栓孔菌三萜具有較好的靜態(tài)吸附與解吸性能,東方栓孔菌三萜在X-5樹(shù)脂表面的吸附符合Langmuir模型,以單分子層吸附為主。動(dòng)態(tài)吸附時(shí),選擇2.34 g/L三萜溶液,在2 BV/h流速下上樣較為適宜;動(dòng)態(tài)解吸時(shí),選擇70%乙醇,在2 BV/h流速下洗脫較為適宜。經(jīng)X-5樹(shù)脂純化后,東方栓孔菌三萜純度為83.30%,是純化前的3倍,表明X-5樹(shù)脂純化東方栓孔菌三萜效果較佳。

東方栓孔菌三萜能極顯著緩解酒精誘導(dǎo)的小鼠血清ALT和AST含量的升高(p<0.01),極顯著拮抗酒精所致小鼠肝臟SOD、CAT和GSH-Px活性的下降(p<0.01),極顯著降低MDA的生成(p<0.01),表明東方栓孔菌三萜對(duì)酒精致小鼠急性肝損傷具有較好保護(hù)作用。