,,,,, ,*

(1.泰山醫(yī)學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院,山東泰安 271016;2.山東農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院,山東省農(nóng)業(yè)微生物重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,山東泰安 271018)

乳糖酶(lactase)又稱β-半乳糖苷酶(β-galactosidase),具有催化β-半乳糖苷鍵水解,使乳糖轉(zhuǎn)化為半乳糖和葡萄糖的功能,廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、食品和環(huán)保等方面[1-2]。醫(yī)藥方面,乳糖酶主要用于治療乳糖不耐癥[3]。食品工業(yè)方面,乳糖酶可用于生產(chǎn)低乳糖制品和低聚半乳糖[4]。低乳糖乳制品可供乳糖不耐受人群食用;而低聚半乳糖是很好的益生元,它難以被人體吸收,但能被腸道內(nèi)雙歧桿菌所利用,還具有糖類的共有屬性和較好的口感,能夠改善腸道菌群、增強(qiáng)免疫系統(tǒng),被廣泛用于制作高血脂、肥胖、糖尿病人的無(wú)熱量食品[5]。環(huán)境保護(hù)方面,乳清是生產(chǎn)干酪和干酪素的副產(chǎn)品,含有乳糖、維生素和乳清蛋白等營(yíng)養(yǎng)成分,每年世界上約產(chǎn)乳清 9×107噸,其中50%當(dāng)廢水排放,不僅造成浪費(fèi),而且污染環(huán)境[6]。利用乳糖酶可將乳清中的乳糖分解為葡萄糖和半乳糖,用以制造乳清糖漿或作為添加劑添加到食品中,從而達(dá)到綜合開(kāi)發(fā)利用乳清資源,減少環(huán)境污染的目的[7]。

乳糖酶的來(lái)源豐富,包括動(dòng)物來(lái)源和微生物來(lái)源。微生物具有生長(zhǎng)繁殖快、產(chǎn)量高的優(yōu)點(diǎn),在實(shí)際應(yīng)用時(shí)一般從微生物中得到,主要包括產(chǎn)乳糖酶細(xì)菌、酵母菌和霉菌[8]。不同來(lái)源的微生物乳糖酶性質(zhì)也不同,細(xì)菌和酵母所產(chǎn)乳糖酶最適pH近中性,適用于牛乳的水解;霉菌所產(chǎn)的乳糖酶最適pH偏酸性,適用于干酪與酸性乳清的水解[9]。然而天然微生物的乳糖酶產(chǎn)量低,為提高乳糖酶產(chǎn)量,使其能更好地應(yīng)用于工業(yè)生產(chǎn),國(guó)內(nèi)外開(kāi)展了關(guān)于菌株誘變育種、發(fā)酵條件優(yōu)化以及基因重組等研究[10-14]。這些研究工作的進(jìn)行,都應(yīng)以產(chǎn)量較高、性能穩(wěn)定的原始菌株為基礎(chǔ),故而乳糖酶高產(chǎn)菌株的篩選工作依然重要。

我國(guó)西部牧區(qū)主要包括新疆、青海、甘肅、西藏等牧區(qū),因其具有低溫、高海拔、高輻射、寡營(yíng)養(yǎng)等特殊條件,造就了該區(qū)豐富獨(dú)特的菌種資源[15]。牧民采用傳統(tǒng)方法制作乳制品過(guò)程中,伴隨著大量微生物的生長(zhǎng)代謝活動(dòng)[16]。目前針對(duì)乳制品中菌種資源的開(kāi)發(fā),主要是對(duì)其中所蘊(yùn)含的微生物進(jìn)行分離鑒定及多樣性分析[17-22],而從中篩選高產(chǎn)乳糖酶菌株的報(bào)道很少。僅巨蕾等人從甘南牧區(qū)牦牛乳酸奶中篩選到產(chǎn)乳糖酶的腸桿菌屬Enterobactersp.SYA2,并研究了該菌株的產(chǎn)酶條件[23]。本研究擬從采集自西藏牧區(qū)的牦牛奶酪中篩選高產(chǎn)乳糖酶菌株,同時(shí)研究乳糖酶的酶學(xué)特性,為進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用產(chǎn)乳糖酶微生物資源提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

酸奶酪 購(gòu)買(mǎi)自藏區(qū)牧民自制10份,分裝于10個(gè)無(wú)菌保鮮袋中并編號(hào),置于冰盒中帶回實(shí)驗(yàn)室,放在4 ℃冰箱中保存；鄰硝基苯酚-β-D-吡喃半乳糖苷(ONPG,色譜純)、5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷(X-gal) 北京索萊寶科技有限公司;鄰硝基苯酚(ONP,分析純) 乳糖阿拉丁試劑有限公司。

初篩培養(yǎng)基:乳糖20 g,酵母膏10 g,蛋白胨10 g,X-gal 0.04 g,水1000 mL,瓊脂20 g,pH7.0。發(fā)酵培養(yǎng)基:乳糖15 g,蛋白陳20 g,酵母膏3 g,NaCl 3 g,K2HPO41 g,MnCl20.1 g,水1000 mL,pH7.0。牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基:蛋白胨10 g,牛肉膏3 g、NaCl 5 g,瓊脂20 g,水1000 mL,pH7.0～7.2。磷酸鹽緩沖液(pH6.5):磷酸二氫鉀0.68 g,加0.1 mol/L氫氧化鈉溶液15.2 mL,用蒸餾水稀釋至100 mL。

SW-CJ-2FD型超凈工作臺(tái)、SPX-250B5H-Ⅱ型生化培養(yǎng)箱 上海新苗醫(yī)療器械制造有限公司;ZQLY-180S型振蕩培養(yǎng)箱 上海知楚儀器有限公司;3-30K型低溫高速離心機(jī) Sigma公司;HVE-50型高溫滅菌鍋 上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司;DK-8D型電熱恒溫水槽 上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司;UV757CRT型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì) 上海棱光技術(shù)有限公司;超聲波細(xì)胞破碎儀 寧波新芝生物技術(shù)有限公司。

1.2 菌種初篩

稱量1 g樣品加入到滅菌的研缽中,用杵研碎后加入到9 mL的無(wú)菌水中,將體積分?jǐn)?shù)從10-1依次稀釋到10-7,選擇10-3～10-7五個(gè)梯度濃度的樣品稀釋液,涂布于含有0.04 g/L X-gal的初篩培養(yǎng)基上,37 ℃下培養(yǎng)24 h,選取變藍(lán)的菌落分純后編號(hào),接入發(fā)酵培養(yǎng)基中以備復(fù)篩。編號(hào)方法為:在樣品編號(hào)后面直接編號(hào)。如RTM-111即為從RTM-1號(hào)奶酪樣品中分到的11號(hào)菌落。

1.3 菌種復(fù)篩

將初篩得到的菌株接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中,37 ℃、150 r/min振蕩培養(yǎng)24 h,取培養(yǎng)液20 mL。4 ℃、6000 r/min離心15 min,收集菌體沉淀并用0.1 mol/L磷酸鹽緩沖溶液(pH6.5)洗滌兩次,加入0.1 mol/L磷酸鹽緩沖溶液(pH6.5)至20 mL,超聲破碎15 min,4 ℃、12000 r/min離心15 min,取上清液即為乳糖酶粗酶液,通過(guò)測(cè)定酶活以進(jìn)行菌種復(fù)篩。

1.4 乳糖酶活力的測(cè)定及標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

1.4.1 乳糖酶活力測(cè)定 參照參考文獻(xiàn)[23],以O(shè)NPG為酶作用底物,取0.5 mL酶液,37 ℃下水浴5 min,加入已預(yù)熱至37 ℃的含5 mmol/L ONPG磷酸鹽緩沖液(pH6.5)1.5 mL,37 ℃下水浴反應(yīng)10 min,然后立即加入3 mL 0.5 mol/L Na2CO3終止反應(yīng),于420 nm下測(cè)定OD值,測(cè)定3次取平均值。以加熱失活的酶液或蒸餾水作為空白。一個(gè)酶活力單位定義(U)為:在37 ℃每分鐘水解釋放1 μmoL ONP所需的酶量。

X=(C×5×N)/(0.5×10)

其中,X為乳糖酶活力;C為標(biāo)準(zhǔn)曲線上對(duì)應(yīng)的ONP濃度;N為稀釋倍數(shù)。

1.4.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制 取6支試管分別加入0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mmol/L的ONP溶液。以第一只試管為空白,測(cè)OD420。以O(shè)NP濃度為縱坐標(biāo),OD420為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.5 菌株鑒定

1.5.1 菌體形態(tài)觀察 用革蘭氏染色法將細(xì)胞染色后觀察細(xì)菌個(gè)體形態(tài)。用已知菌(大腸桿菌和金黃色葡萄球菌)同時(shí)染色做為對(duì)照。

1.5.2 生理生化反應(yīng)特征 生理生化特性測(cè)定參照《常見(jiàn)細(xì)菌系統(tǒng)鑒定手冊(cè)》中的方法[24]。

1.5.3 分離菌株的16S rDNA鑒定 16S rDNA序列測(cè)定及系統(tǒng)發(fā)育分析采用細(xì)菌16S rDNA通用引物:27F(5′-AGAGTTTGATCMTGGCTCAG-3′)和1492R(5′-GGTTACCTTGTTACGACCT-3′)進(jìn)行PCR擴(kuò)增。PCR反應(yīng)采用50 μL體系。反應(yīng)條件:94 ℃,5 min;94 ℃,45 s;55 ℃,45 s;72 ℃,2 min,30個(gè)循環(huán);72 ℃,10 min。擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳,切膠回收,目的片斷交由睿博興科(青島)測(cè)序部進(jìn)行測(cè)序。將測(cè)定的16S rDNA序列與GenBank中已知核酸序列進(jìn)行BLSAT分析,從中獲得與菌株16S rDNA 同源的序列,利用MEGA7.0 軟件構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)。

1.6 乳糖酶酶學(xué)性能

1.6.1 最適反應(yīng)溫度與熱穩(wěn)定性 最適反應(yīng)溫度:取1 mL磷酸鹽緩沖液(pH6.5)稀釋的酶液,分別于30、40、50、60、70 ℃保溫5 min,同時(shí)另將1 mL ONPG溶液依次在相同溫度下預(yù)熱5 min。將ONPG加入到相應(yīng)溫度的酶液中反應(yīng)10 min,隨后加入3 mL Na2CO3終止反應(yīng)。計(jì)算各溫度下的相對(duì)酶活(即各酶活與最高酶活的百分比),確定酶的最適反應(yīng)溫度。

酶的熱穩(wěn)定性:取1 mL磷酸鹽緩沖液稀釋的酶液,于40、50、60、65 ℃保溫0、10、20、30、40、50 min,同時(shí)將1 mL ONPG溶液依次在相同溫度下進(jìn)行保溫。將ONPG加入到粗酶液中,37 ℃反應(yīng)10 min,加入3 mL Na2CO3終止反應(yīng),測(cè)OD420,以65 ℃加熱失活的酶液作為空白對(duì)照,以0 min酶活為100%,計(jì)算相對(duì)酶活,測(cè)定酶的熱穩(wěn)定性。

1.6.2 最適pH和pH穩(wěn)定性 最適pH:在最適溫度條件下,按1.6.1項(xiàng)下方法,測(cè)定pH4.0、5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0、8.5、9.0和10.0條件下酶活性。計(jì)算各pH酶活與最高酶活的百分比,確定酶最適反應(yīng)pH。

pH穩(wěn)定性:將酶液分別置于pH4.0、5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0、8.5、9.0和10.0的緩沖溶液中,37 ℃處理18 h,測(cè)定不同pH條件下的酶活,以最高酶活為100%,計(jì)算各pH酶活與最高酶活百分比,測(cè)定酶的pH穩(wěn)定性[25-26]。

1.6.3 金屬離子和EDTA對(duì)酶活的影響 在酶促反應(yīng)體系磷酸鹽緩沖液(pH6.5)中分別加入1 mol/L的Na+、K+、Mg2+、Mn2+、Ca2+、Cu2+、Zn2+和EDTA溶液,使最終反應(yīng)體系中金屬離子的濃度均為1 mmol/L,測(cè)定酶活力。以不加金屬離子溶液的酶活為空白對(duì)照,酶活力為100%,計(jì)算各離子存在時(shí)的相對(duì)酶活。

相對(duì)酶活(%)=各離子存在時(shí)的酶活/空白對(duì)照的酶活×100

1.7 菌株產(chǎn)酶穩(wěn)定性

將產(chǎn)乳糖酶菌株接種到斜面上連續(xù)傳代培養(yǎng)5代,每代均接種到液體發(fā)酵培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng),并按照1.6.1項(xiàng)下方法進(jìn)行酶活測(cè)定,測(cè)定各代的乳糖酶活力。

1.8 數(shù)據(jù)處理

利用Excel 2010及SPSS 20.0對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理及分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 菌種初篩

經(jīng)過(guò)挑選,從10個(gè)樣品中共分離得到10株產(chǎn)乳糖酶菌株。菌株在初篩培養(yǎng)基上的菌落顏色變化情況見(jiàn)表1。

表1 產(chǎn)酶菌株菌落變色情況Table 1 Bacterial colony discoloration of enzyme producing strain

由表1可知,10株產(chǎn)乳糖酶菌株在初篩培養(yǎng)基上有3株菌落藍(lán)色深,4株藍(lán)色較深,3株藍(lán)色較淺。將10株菌株接種到發(fā)酵培養(yǎng)基進(jìn)行復(fù)篩。

2.2 菌種復(fù)篩

2.2.1 ONPG標(biāo)準(zhǔn)曲線 以吸光度OD420為橫坐標(biāo),ONP濃度為縱坐標(biāo)繪制乳糖酶活性標(biāo)準(zhǔn)曲線,相關(guān)系數(shù)R2=0.998(圖1),說(shuō)明該標(biāo)準(zhǔn)曲線可用于乳糖酶的測(cè)定。

圖1 乳糖酶活性測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.1 Standard curve of lactase activity

2.2.2 產(chǎn)乳糖酶菌株的酶活 上述10株菌株接種于發(fā)酵培養(yǎng)基培養(yǎng)24 h后,以吸光度最低的菌株OD值0.9為標(biāo)準(zhǔn),把各菌株培養(yǎng)液的OD600調(diào)節(jié)為0.9,然后利用1.3項(xiàng)下的方法制備粗酶液,按1.5.1項(xiàng)下測(cè)定酶活。各菌株酶活復(fù)篩結(jié)果如表2所示,酶活力高于3.00 U/mL的菌株有3株,低于3.00 U/mL高于1.00 U/mL的菌株有2株,低于1.00 U/mL的菌株有5株。菌株RTM-111的酶活顯著高于其他菌株(p<0.05),為18.07 U/mL。近年來(lái)關(guān)于產(chǎn)乳糖酶細(xì)菌的報(bào)道,酶活一般在10 U/mL以下[23,25-28],Venkateswarulu等[29]報(bào)道的產(chǎn)乳糖酶的枯草芽孢桿菌,經(jīng)條件優(yōu)化后,酶活可達(dá)到15.27 U/mL。由此可見(jiàn),RTM-111具有較強(qiáng)的產(chǎn)酶活力,對(duì)其進(jìn)行鑒定并進(jìn)行后續(xù)研究。

表2 不同菌株產(chǎn)乳糖酶的活力Table 2 Activity of lactase in different strains

2.3 菌株鑒定

2.3.1 形態(tài)特征 菌株RTM-111在牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上的菌落邊緣不規(guī)則、微黃色、表面粗糙不透明、有許多褶皺。革蘭氏染色為陽(yáng)性,有芽孢(如圖2所示)。

圖2 菌株RTM-111革蘭氏染色照片(100×)Fig.2 Gram stain of strain RTM-111(100×)

2.3.2 生理生化反應(yīng) 生理生化反應(yīng)結(jié)果表明,RTM-111菌株V-P實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性,接觸酶陽(yáng)性,能水解酪素、淀粉和明膠,能發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸,可發(fā)酵甘露醇、木糖、阿拉伯糖,能利用檸檬酸鹽,不能利用丙酸鹽,卵黃反應(yīng)和吲哚產(chǎn)生實(shí)驗(yàn)陰性,硝酸鹽還原實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性。菌株RTM-111生長(zhǎng)特征和生理生化特性與枯草芽孢桿菌的特征吻合[24]。

表3 菌株RTM-111生理生化特征Table 3 Biological and physiological characteristics of strain RTM-111

2.3.3 16S rDNA序列測(cè)定及同源性分析 序列測(cè)定結(jié)果如圖4所示,結(jié)果表明,RTM-111菌株 16SrDNA 序列全長(zhǎng)1424 bp,其電泳結(jié)果如圖3所示。將該序列進(jìn)行BLAST比對(duì)分析,結(jié)果發(fā)現(xiàn)其與枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)同源性最高,達(dá)99%。選出相關(guān)性較高的芽孢桿菌屬內(nèi)相關(guān)菌株的16S rDNA序列,用MEGA7.0構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù),結(jié)果顯示其與Bacillussubtilis聚為一族(圖4)。結(jié)合理化反應(yīng)特征及分子鑒定結(jié)果,確定RTM-111為枯草芽孢桿菌,命名為BacillussubtilisRTM-111。枯草芽孢桿菌是一種重要的益生菌,是美國(guó)FDA及我國(guó)衛(wèi)生部都認(rèn)定的安全菌種[30],已被廣泛應(yīng)用于農(nóng)業(yè)、工業(yè)、食品、醫(yī)藥、衛(wèi)生、水產(chǎn)、畜牧業(yè)及科研等諸多領(lǐng)域[31-33],因此食源性RTM-111可保證乳糖酶的安全性。

圖3 RTM-111菌株16S rDNA瓊脂糖凝膠電泳Fig.3 Agarosegel electrophoresis of 16S rDNA from RTM-111

圖4 RTM-111與相關(guān)菌株系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)Fig.4 Evolutionary tree of RTM-111 and related strains

2.4 乳糖酶酶學(xué)性能研究

2.4.1 最適反應(yīng)溫度與熱穩(wěn)定性 酶的最適反應(yīng)溫度是酶的重要性能,工業(yè)生產(chǎn)中一般要求乳糖酶的最適溫度達(dá)37 ℃或更高[34]。以橫坐標(biāo)為溫度,縱坐標(biāo)為相對(duì)酶活繪圖,反應(yīng)溫度對(duì)RTM-111菌產(chǎn)生的乳糖酶活力的影響如圖5所示。結(jié)果表明,酶活性隨溫度升高而先增加后減少,40 ℃酶活上升到較高水平(最高值的86.8%),50 ℃酶活最高(21.52 U/mL),60 ℃之后酶活快速下降,至70 ℃相對(duì)酶活已降至10%以下。由此可以確定菌株RTM-111乳糖酶的最適溫度為50 ℃。

圖5 反應(yīng)溫度對(duì)RTM-111菌產(chǎn)生的乳糖酶活力的影響Fig.5 Effect of temperature on activity of lactase produced by RTM-111

乳糖酶熱穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)如圖6所示,結(jié)果表明乳糖酶在40 ℃和50 ℃穩(wěn)定性好,保溫40 min,相對(duì)酶活仍保持在80%以上,說(shuō)明該酶在最適酶活溫度下具有良好的穩(wěn)定性,具有潛在的應(yīng)用價(jià)值。在60 ℃及以上溫度,酶的穩(wěn)定性急劇下降,保溫至30 min時(shí)酶活下降到10%以下,說(shuō)明該酶不耐高溫。

圖6 乳糖酶的熱穩(wěn)定性Fig.6 Thermal stability of lactase

2.4.2 最適pH和pH穩(wěn)定性 最適pH結(jié)果如圖7所示,RTM-111菌株所得酶液在酸性條件下酶活較低,隨pH的增加活性逐漸增強(qiáng),在pH7.5時(shí)達(dá)最高值,最后活性逐漸減弱,由此確定該酶的最適pH為7.5。乳糖酶最適pH決定了其用途不同,霉菌產(chǎn)生的乳糖酶最適pH偏酸性(pH2.5～5.0),可應(yīng)用于酸性乳清和奶酪的水解;而酵母菌和細(xì)菌所產(chǎn)乳糖酶最適pH近中性(分別為pH6～7和pH6.5～7.5),適于牛乳和鮮乳清的水解[9,35-36]。該結(jié)果說(shuō)明RTM-111在乳制品水解領(lǐng)域具有應(yīng)用價(jià)值。

圖7 pH對(duì)RTM-111菌產(chǎn)生的乳糖酶活力的影響Fig.7 Effect of pH on activity of lactase produced by RTM-111

乳糖酶的pH穩(wěn)定性結(jié)果表明,在pH6.5～8.0范圍內(nèi),維持18 h,乳糖酶酶活性較高(86.7%～100%),說(shuō)明該酶在最適pH條件下具有較高的穩(wěn)定性,具有潛在的應(yīng)用價(jià)值(圖8)。

圖8 酶的pH穩(wěn)定性Fig.8 pH stability of the enzyme

2.4.3 金屬離子和EDTA對(duì)酶活的影響 金屬離子會(huì)對(duì)酶活產(chǎn)生激活或抑制作用,如圖9所示,Na+、Mg2+和Mn2+對(duì)酶活有較明顯激活作用,K+、Ca2+對(duì)酶活無(wú)明顯作用,Cu2+和Zn2+對(duì)酶活具有顯著抑制作用,EDTA對(duì)乳糖酶活具有完全抑制作用。Rahim等研究嗜冷枯草芽孢桿菌所產(chǎn)生的乳糖酶發(fā)現(xiàn),Na+和K+對(duì)酶有激活作用,Ca2+有部分抑制作用,Cu2+和Zn2+有完全抑制作用[37]。而Lara等獲得的枯草芽孢桿菌產(chǎn)生的乳糖酶,能夠明顯被Cu2+和Zn2+所抑制,而對(duì)Mg2+、Mn2+和Ca2+不敏感[38]。這些與我們所研究的乳糖酶有區(qū)別,說(shuō)明即使來(lái)源于同種不同株的微生物所產(chǎn)生的乳糖酶,其酶學(xué)性質(zhì)也會(huì)有區(qū)別。上述結(jié)果可作為酶活性調(diào)節(jié)與控制的理論依據(jù)。

圖9 金屬離子和EDTA對(duì)乳糖酶活力的影響Fig.9 Effect of metalic ions and EDTA on enzyme activity

2.5 菌株產(chǎn)酶穩(wěn)定性

枯草芽孢桿菌RTM-111每代產(chǎn)乳糖酶結(jié)果如表4所示,傳代培養(yǎng)5次,酶活變化幅度很小,差異不顯著(p>0.05),說(shuō)明該菌株產(chǎn)酶能力穩(wěn)定。

表4 RTM-111菌株產(chǎn)酶穩(wěn)定性Table 4 Stability of RTM-111 for enzyme production

3 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)從藏區(qū)牦牛奶酪制品中分離篩選出得到一株高產(chǎn)乳糖酶菌株RTM-111,綜合形態(tài)學(xué)、理化反應(yīng)特征及16S rDNA序列分析,將其鑒定為枯草芽孢桿菌。對(duì)RTM-111所產(chǎn)酶的酶學(xué)性質(zhì)研究表明,該酶最適反應(yīng)溫度為50 ℃,且在 40～50 ℃具有很強(qiáng)的穩(wěn)定性,說(shuō)明其在高酶活區(qū)能夠保持穩(wěn)定的性能,具備良好的生產(chǎn)潛力。該酶的最適pH為7.5,在pH6.5～8.0條件下穩(wěn)定性較高,適于牛乳和乳清的水解。金屬離子對(duì)酶活的研究表明,Na+、Mg2+和Mn2+對(duì)酶活性具有較強(qiáng)的激活作用,使用時(shí)可適當(dāng)添加以作為酶的激活劑;而Cu2+、Zn2+和EDTA對(duì)酶活有顯著的抑制作用,使用時(shí)應(yīng)控制這些離子的濃度。且連續(xù)傳代培養(yǎng)后,枯草芽孢桿菌RTM-111產(chǎn)酶能力穩(wěn)定。總之,本研究所得枯草芽孢桿菌RTM-111所產(chǎn)乳糖酶與以往枯草芽孢桿菌乳糖酶性質(zhì)不同,具有新穎性且具有較好的應(yīng)用潛力,為進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用乳糖酶提供了理論依據(jù)。