雷娟利，鐘新民，岳智臣，陶鵬，趙彥婷，李必元

(浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院 蔬菜研究所，浙江 杭州 310021)

大白菜葉柄黑點癥嚴重影響大白菜的品質(zhì)，降低商品價值，給生產(chǎn)者、經(jīng)營者和消費者造成巨大損失，但引起大白菜葉柄黑點癥發(fā)生的機制尚不完全清楚。有研究表明，大白菜葉柄黑點癥是一種生理性病害，是基因型和環(huán)境因素共同作用的結(jié)果，過量施用氮肥是引起此癥的重要因素[1]；不同形態(tài)氮素營養(yǎng)對大白菜葉柄黑點癥的發(fā)生也有影響，其中銨態(tài)氮促進大白菜葉柄黑點癥發(fā)生的作用高于硝態(tài)氮和酰胺態(tài)氮[2-3]；高曉蓉等[4]研究發(fā)現(xiàn)，葉柄黑點癥的發(fā)生與品種有關(guān)，因此可從育種的角度解決葉柄黑點癥的問題。

大白菜葉柄黑點癥田間鑒定一般都在收獲期進行，費時費工，且周期長，不能應(yīng)用于抗葉柄黑點癥育種工作。因此建立一套快速有效的大白菜葉柄黑點癥苗期鑒定方法，對大白菜抗葉柄黑點癥育種具有重要作用。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)[5]，1.0倍菜心營養(yǎng)液+10 mmol·L-1NH4NO3的配方可使抗感品系的葉柄黑點癥充分展現(xiàn)，因此可用于大白菜葉柄黑點癥苗期水培鑒定。本試驗采用水培法，以1.0倍菜心營養(yǎng)液+10 mmol·L-1NH4NO3的配方，對部分材料進行葉柄黑點癥抗性鑒定，現(xiàn)將鑒定方法及結(jié)果總結(jié)如下。

1 材料與方法

1.1 供試材料

供試材料由浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院蔬菜研究所大白菜甘藍課題組提供，其中品系材料6份，分別是韓春娃C8-1、韓春娃-4-2-3-4、SD-1-12-3-1-6-3、PB-3-1-4-4-2-1、DG16-7和CXW-20-1-2-3-1；品種材料2份，分別是浙白3號和改良青雜3號。

1.2 大白菜葉柄黑點癥苗期鑒定方法

1)每個品系(品種)取100粒籽粒飽滿的種子，用蒸餾水洗凈后放入帶濕潤濾紙的培養(yǎng)皿中，在25 ℃的培養(yǎng)箱中催芽48 h；2)各品系(品種)中分別挑選50粒發(fā)芽勢一致的種子，用鑷子放入圓筒水培海綿；將水培海綿放入50孔穴盤中，穴盤底部放置塑料托盤；托盤中加入0.2倍的菜心營養(yǎng)液，營養(yǎng)液的液面高度達到水培海綿高度1/2；3)幼苗真葉長出后，將托盤中菜心營養(yǎng)液濃度調(diào)整為0.5倍，繼續(xù)培養(yǎng)；4)培養(yǎng)至幼苗呈4葉1心時，將托盤中菜心營養(yǎng)液濃度調(diào)整到1.0倍，繼續(xù)培養(yǎng)5～7 d；5)挑選各品系(品種)長勢整齊一致的幼苗，定植到盛有1.0倍菜心營養(yǎng)液+10 mmol·L-1NH4NO3的水培箱中，每個品系定植30株，定植株行距12 cm×12 cm；水培箱置于控溫溫室中，采用打氧通氣；6)定植培養(yǎng)3周后每個品系(品種)隨機取10株幼苗統(tǒng)計葉柄黑點數(shù)，黑點數(shù)越少的品系，葉柄黑點癥的抗性越強。

菜心營養(yǎng)液的配方為每噸水加472 g四水硝酸鈣[Ca(NO3)2·4H2O)]、202 g硝酸鉀(KNO3)、246 g七水硫酸鎂(MgSO4·7H2O)、80 g磷酸二氫銨(NH4H2PO4)、100 g磷酸二氫鉀(KH2PO4)和174 g硫酸鉀(K2SO4)。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同品系(品種)大白菜葉柄黑點數(shù)

在1.0倍菜心營養(yǎng)液+10 mmol·L-1NH4NO3中定植培養(yǎng)3周后，每個品系(品種)隨機取10株幼苗統(tǒng)計葉柄黑點數(shù)。

由表1可知，單株葉柄黑點數(shù)最多的是改良青雜3號和韓春娃-4-2-3-4，分別為19.8和18.8個；平均單株葉柄黑點數(shù)最少的是韓春娃C8-1、SD-1-12-3-1-6-3和PB-3-1-4-4-2-1，分別為0.6、1.0和1.2個。

表1 不同品系(品種)大白菜葉柄黑點數(shù)

2.2 不同品系(品種)大白菜葉柄黑點癥抗性

在田間鑒定中，品系材料韓春娃C8-1和PB-3-1-4-4-2-1表現(xiàn)為高抗，品系材料韓春娃-4-2-3-4和品種材料改良青雜3號表現(xiàn)為高感[6]。結(jié)合本次試驗結(jié)果，擬制定大白菜葉柄黑點癥苗期水培鑒定抗感性分級標準如表2。按照此標準，有3個材料被歸為高抗類，分別是韓春娃C8-1、SD-1-12-3-1-6-3和PB-3-1-4-4-2-1；有3個材料被歸為抗病類，分別是DG16-7、CXW-20-1-2-3-1和浙白3號；有2個材料被歸為高感類，分別是韓春娃-4-2-3-4和改良青雜3號。

表2 大白菜葉柄黑點癥苗期水培鑒定 抗感性分級標準

3 小結(jié)與討論

大白菜葉柄黑點癥多發(fā)生在結(jié)球期、收獲期和儲藏期，因此田間鑒定費時費工，且周期長，不宜用于大量材料的篩選，因此很難應(yīng)用于抗病育種實踐中。

雖然也有報道用苗期扦插法鑒定大白菜葉柄黑點癥[7]，但在實踐中發(fā)現(xiàn)，此方法因為采用離體葉片，故易造成葉片黃化和污染，且離體葉片也不一定能完全反映植株的整體情況。總體來說，大白菜葉柄黑點癥苗期水培鑒定方法的優(yōu)勢：1)相比在結(jié)球后期對大白菜采用逐個葉片小黑點數(shù)統(tǒng)計方法進行抗病性鑒定的田間鑒定法，該方法省時省工；2)相比用葉片扦插法進行抗病性鑒定，該技術(shù)避免葉片扦插法離體葉片容易黃化、污染等缺點，且活體鑒定方法能反映植株的真實情況。

前期研究中認為，1.0倍菜心營養(yǎng)液+5～10 mmol·L-1NH4NO3的配方可用于大白菜葉柄黑點癥苗期水培鑒定[5]。因此本文專門介紹了采用1.0倍菜心營養(yǎng)液+10 mmol·L-1NH4NO3的配方進行大白菜葉柄黑點癥抗性鑒定的具體方法，并用此法對部分材料進行鑒定研究，結(jié)果與田間鑒定結(jié)果基本一致，說明此方法可行。