張 云,庹 敏

(恩施土家族苗族自治州中心醫(yī)院：1.臨床檢驗中心；2.乳腺外科，湖北恩施 445000)

EB病毒的慢性感染是全世界肝臟相關(guān)的發(fā)病率和病死率的主要原因，并且易患肝纖維化和終末期肝臟并發(fā)癥[1]。其中，肝損傷是EB病毒誘發(fā)的較為常見肝臟疾病[2]。肝損傷的嚴重程度由EB病毒基因型和病毒組分調(diào)節(jié)[3]。但是，目前EB病毒誘導(dǎo)的肝損傷早期診斷困難[4]。EB病毒在感染后，患者血清中的EB病毒衣殼抗原抗體會顯著增加[5]。肝損傷后，患者血清的鐵代謝與健康人群顯著不同[6]。鐵對人類的生物功能和細胞生化過程至關(guān)重要。 鐵缺乏和鐵超負荷都會造成嚴重且可能致命的健康風(fēng)險，并且鐵的穩(wěn)態(tài)受到嚴格監(jiān)管[7]。當該調(diào)節(jié)被破壞時，鐵在許多重要器官的實質(zhì)細胞中沉積來介導(dǎo)對組織器官的損傷，包括心臟、胰腺和肝臟[8]。許多實驗和臨床研究表明，慢性鐵沉積促進肝損傷的進展并增加了患病風(fēng)險[9]。其中，轉(zhuǎn)鐵蛋白受體是個重要的鐵穩(wěn)態(tài)分子[10]。本文旨在探討EB病毒衣殼抗原抗體聯(lián)合轉(zhuǎn)鐵蛋白受體在EB病毒感染所致肝損傷的早期診斷價值。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2015年7月至2018年7月本院收治的EB病毒感染所致肝損傷患者70例(觀察組1)，其中男32例，女38例，平均年齡(51±17)歲；藥物性肝損傷患者70例(觀察組2)，其中男37例，女33例，平均年齡(47±14)歲。乙型肝炎病毒(HBV)肝損傷患者70例(觀察組3)，其中男29例，女41例，平均年齡(49±18)歲。納入肝損傷患者均經(jīng)病理科明確診斷，且未經(jīng)過相應(yīng)的藥物治療。另選取同期來院體檢健康者70例(對照組)，其中男34例，女36例，平均年齡(53±12)歲。各組一般資料比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，可納入此次分析。受試者均知情同意且經(jīng)過本院倫理委員會批準。

1.2納入標準 (1)藥物性肝損傷患者根據(jù)對應(yīng)的病史包括使用相應(yīng)的腫瘤藥、免疫制劑、抗結(jié)核藥，以及臨床表現(xiàn)、輔助檢查選擇確診患者；(2)EB病毒感染所致肝損傷患者根據(jù)病史、臨床表現(xiàn)及外周血EB病毒DNA篩查選擇確診患者；(3) HBV肝損傷患者根據(jù)病史、臨床表現(xiàn)及血清HBV抗原篩查選擇確診患者；(4)合并肝功能相關(guān)指標：總膽紅素(TBil)>0.019 μmmol/L和丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)>40 IU/L。

1.3排除標準 (1)藥物性肝損傷患者血清HBV抗原篩查陽性或外周血EB病毒DNA篩查陽性；(2)EB病毒感染所致肝損傷患者血清HBV抗原篩查陽性后有服用相應(yīng)的腫瘤藥、免疫制劑、抗結(jié)核藥的病史；(3)HBV肝損傷患者外周血EB病毒DNA篩查陽性或有服用相應(yīng)的腫瘤藥、免疫制劑、抗結(jié)核藥的病史；(4)合并肝功能相關(guān)指標：TBil≤0.019 μmmol/L和ALT≤40 IU/L。

1.4方法 采取觀察組1、觀察組2和對照組肘前靜脈血5 mL，進行酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。將包被緩沖液中的抗原(5～20 μg/mL)加入到微量滴定板中。在37 ℃孵育4 h，然后在4 ℃下儲存直至使用。用洗滌液洗滌3次，在洗滌之間等待10 min。通過完全填充管或所有孔，用0.5%牛血清清蛋白封閉1 h。用洗滌液清洗4次，等待10～15 min。向每個孔中加入100 μL用含0.1%吐溫的磷酸緩沖鹽溶液(PBS-TA)稀釋的抗血清，在室溫下孵育5 h或在冰箱中孵育過夜。如前所述洗滌平板，然后加入用0.1%吐溫的磷酸緩沖鹽溶液(PBS-T)稀釋的綴合物。在室溫下1.5 h或在37 ℃下1 h。洗滌4次，然后向每個孔中加入100 μL底物。加入100 μL濃度為2 mol/L的硫酸磷酸停止反應(yīng)。讀取酶標儀450 nm數(shù)據(jù)。

1.5觀察指標 EB病毒衣殼抗原抗體和轉(zhuǎn)鐵蛋白受體的表達量采用 ELISA檢測，使用上海研卉生物公司的病毒衣殼抗原抗體ELISA試劑盒(貨號：KA0963)和上海科順生物科技有限公司的轉(zhuǎn)鐵蛋白受體ELISA試劑盒(貨號：KS18359)進行相應(yīng)蛋白表達量的分析。

2 結(jié) 果

2.1各組人員血清中EB病毒衣殼抗原抗體和轉(zhuǎn)鐵蛋白受體的表達量比較 觀察組1血清中EB病毒衣殼抗原抗體和轉(zhuǎn)鐵蛋白受體的表達量明顯高于觀察組2、觀察組3和對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。觀察組2血清中EB病毒衣殼抗原抗體和轉(zhuǎn)鐵蛋白受體的表達量明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。觀察組3血清中EB病毒衣殼抗原抗體的表達量與對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，但是其轉(zhuǎn)鐵蛋白受體的表達量明顯高于觀察組1、2和對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 各組人員血清中EB病毒衣殼抗原抗體和轉(zhuǎn)鐵蛋白受體的表達量比較(ng/mL,±s)

注：與對照組比較，*P<0.05；與觀察組2比較，▲P<0.05；與觀察組3比較，#P<0.05

2.2觀察組1、2血清中EB病毒衣殼抗原抗體和轉(zhuǎn)鐵蛋白受體的各指標比較 為了評估EB病毒衣殼抗原抗體和轉(zhuǎn)鐵蛋白受體在EB病毒感染所致肝損傷早期診斷的價值，繪制觀察組1和觀察組2血清中EB病毒衣殼抗原抗體和轉(zhuǎn)鐵蛋白受體的ROC曲線，見圖1。EB病毒衣殼抗原抗體的ROC曲線AUC為0.86±0.04(95%CI：0.787 8～0.927 5)，以EB病毒衣殼抗原抗體的陽性臨界值，其診斷靈敏度為84%，特異度為75%；轉(zhuǎn)鐵蛋白受體的ROC曲線AUC為0.79±0.04(95%CI：0.707 7～0.864 9)，以轉(zhuǎn)鐵蛋白受體的陽性臨界值，其診斷靈敏度為83%，特異度為54%，見表2。

2.3觀察組1與對照組血清中EB病毒衣殼抗原抗體和轉(zhuǎn)鐵蛋白受體的各指標比較 為了評估EB病毒衣殼抗原抗體和轉(zhuǎn)鐵蛋白受體在EB病毒感染所致肝損傷早期診斷的價值，繪制觀察組1和對照組血清中EB病毒衣殼抗原抗體和轉(zhuǎn)鐵蛋白受體的ROC曲線見圖2。EB病毒衣殼抗原抗體的ROC曲線AUC為0.77±0.04(95%CI：0.683 9～0.851 6)，以EB病毒衣殼抗原抗體的陽性臨界值，其診斷靈敏度為75%，特異度為84%；轉(zhuǎn)鐵蛋白受體的ROC曲線AUC為0.94±0.02(95%CI：0.900 2～0.985 6)，以轉(zhuǎn)鐵蛋白受體的陽性臨界值，其診斷靈敏度為84%，特異度為98%，見表3。

2.4觀察組1、3血清中EB病毒衣殼抗原抗體和轉(zhuǎn)鐵蛋白受體的各指標比較 為了評估EB病毒衣殼抗原抗體和轉(zhuǎn)鐵蛋白受體在EB病毒感染所致肝損傷早期診斷的價值，繪制觀察組1和觀察組3血清中EB病毒衣殼抗原抗體和轉(zhuǎn)鐵蛋白受體的ROC曲線見圖3。EB病毒衣殼抗原抗體的ROC曲線AUC為0.78±0.04(95%CI：0.701 0～0.865 9)，以EB病毒衣殼抗原抗體的陽性臨界值，其診斷靈敏度為75%，特異度為87%；轉(zhuǎn)鐵蛋白受體的ROC曲線AUC為0.62±0.05(95%CI：0.527 6～0.717 7)，以轉(zhuǎn)鐵蛋白受體的陽性臨界值，其診斷靈敏度為47%，特異度為82%，見表4。

圖1 觀察組1、2血清中EB病毒衣殼抗原抗體和轉(zhuǎn)鐵蛋白受體的ROC曲線

圖2 觀察組1與對照組血清中EB病毒衣殼抗原抗體和轉(zhuǎn)鐵蛋白受體的ROC曲線

圖3 觀察組1、3血清中EB病毒衣殼抗原抗體和轉(zhuǎn)鐵蛋白受體的ROC曲線

檢測變量靈敏度(%)特異度(%)截斷值A(chǔ)UC(x±s)P95%CIEB病毒衣殼抗原抗體84750.910.86±0.04<0.050.787 8～0.927 5轉(zhuǎn)鐵蛋白受體83540.70.79±0.04<0.050.707 7～0.864 9

表3 觀察組1和對照組血清中EB病毒衣殼抗原抗體和轉(zhuǎn)鐵蛋白受體各指標比較

表4 觀察組1、3血清中EB病毒衣殼抗原抗體和轉(zhuǎn)鐵蛋白受體的各指標比較

3 討 論

EB病毒是慢性肝炎的最主要原因之一[11]。由EB病毒感染引起的肝損傷影響許多細胞過程，例如細胞信號傳導(dǎo)、細胞凋亡、轉(zhuǎn)錄、DNA修復(fù)等[3]。這種擾動的后果導(dǎo)致膽汁分泌、糖異生、糖酵解，以及解毒和碳水化合物、蛋白質(zhì)、脂肪和營養(yǎng)素平衡的代謝的改變[3]。其中鐵代謝尤為關(guān)鍵[12]。肝臟是鐵的主要儲存器官。 大約三分之一的身體總鐵沉積在肝細胞，竇狀間充質(zhì)細胞和網(wǎng)狀內(nèi)皮細胞中。肝臟在回收鐵中也起著重要作用。肝損傷和功能障礙可以干擾鐵的穩(wěn)態(tài)[13]。肝臟中過量的鐵沉積會通過引發(fā)肝細胞壞死、炎癥、纖維化甚至癌癥而導(dǎo)致進一步的損傷[14-17]。本文研究發(fā)現(xiàn)，代謝中的關(guān)鍵蛋白分子轉(zhuǎn)鐵蛋白受體和EB病毒衣殼抗原抗體在觀察組1血清中的表達量明顯高于對照組和觀察組2,但低于觀察組3，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。觀察組1和對照組中轉(zhuǎn)鐵蛋白受體的AUC為0.94±0.02，靈敏度和特異度分別為98%和82%，顯示轉(zhuǎn)鐵蛋白受體在甄別EB病毒感染所致肝損傷患者和健康人群具有較高的診斷效能。EB病毒衣殼抗原抗體的靈敏度和特異度較轉(zhuǎn)鐵蛋白受體低，這可能是因為90%的健康人群存在皰疹病毒潛伏[18]，而降低了靈敏度和特異度。這些提示轉(zhuǎn)鐵蛋白受體和EB病毒衣殼抗原抗體可成為EB病毒感染所致肝損傷的早期診斷的潛在標志物。

DELIMA等[19]在小鼠模型中發(fā)現(xiàn)血色素沉著病蛋白或轉(zhuǎn)鐵蛋白受體2的突變通過阻止肝臟鐵調(diào)節(jié)激素的產(chǎn)生而導(dǎo)致遺傳性血色素沉著癥并最終導(dǎo)致肝損傷。與此同時，CHITAMBAR等[20]發(fā)現(xiàn)EB病毒刺激的B淋巴細胞增殖和免疫球蛋白產(chǎn)生會被轉(zhuǎn)鐵蛋白受體抑制。EB病毒感染所致肝損傷可能會誘導(dǎo)機體產(chǎn)生大量的轉(zhuǎn)鐵蛋白受體。這可能是機體一種針對EB病毒的免疫反應(yīng)，但是隨著轉(zhuǎn)鐵蛋白受體的增多，轉(zhuǎn)鐵蛋白受體的數(shù)量是一定的，造成了大量轉(zhuǎn)帖蛋白沉積，最終引發(fā)了肝損傷。

藥物性肝損傷是肝損傷的另一分類,藥物誘導(dǎo)的肝損傷主要因為市場上用于治療各種疾病的化合物的數(shù)量不斷增加及草藥的日益普及，包括對乙酰氨基酚[21-22]。本研究發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)鐵蛋白受體和EB病毒衣殼抗原抗體在觀察組1、2之間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。觀察組1、2中EB病毒衣殼抗原抗體的AUC為0.86±0.04，靈敏度和特異度分別為84%和75%，顯示轉(zhuǎn)鐵蛋白受體在甄別EB病毒感染所致肝損傷患和藥物性肝損傷患者具有較高的診斷效能。轉(zhuǎn)鐵蛋白受體的靈敏度和特異度較EB病毒衣殼抗原抗體低，這可能是藥物性肝損傷患者的鐵代謝系統(tǒng)也存在一定的紊亂[23]。江智龍等[23]的研究結(jié)果指出在甄別EB病毒感染所致肝損傷患和藥物性肝損傷患者可再聯(lián)合血清鐵、血清鐵蛋白等指標。這些提示轉(zhuǎn)鐵蛋白受體和EB病毒衣殼抗原抗體可成為EB病毒感染所致肝損傷的早期診斷的潛在標志物。

在HBV相關(guān)的肝病中，鐵代謝的數(shù)據(jù)及其臨床意義相對較少[24]。 BLUMBERG等[25]在1981年首次描述了鐵水平變化與乙型肝炎感染之間的關(guān)聯(lián)性。報道指出33例持續(xù)性HBV攜帶者的血清鐵水平明顯高于34例清除病毒感染的患者，暗示高水平的血清鐵可能與慢性HBV感染的存在有關(guān)。然而卻沒有報告血清鐵蛋白或轉(zhuǎn)鐵蛋白受體水平，或總鐵結(jié)合能力。而本研究中，HBV肝損傷患者的轉(zhuǎn)鐵蛋白受體水平明顯高于EB病毒所致肝損傷患者，藥物性肝損傷患者和健康人群。相應(yīng)地，HBV肝損傷患者血清中鐵蛋白水平可能與健康人群有所差別。轉(zhuǎn)鐵蛋白受體在血清中的作用又與轉(zhuǎn)鐵蛋白受體相關(guān)[10]，故血清中轉(zhuǎn)鐵蛋白受體水平的升高可能與轉(zhuǎn)鐵蛋白受體結(jié)構(gòu)和蛋白水平有關(guān)，這需要進一步研究驗證。

4 結(jié) 論

本研究發(fā)現(xiàn)EB病毒衣殼抗原抗體聯(lián)合轉(zhuǎn)鐵蛋白受體可作為病毒感染所致肝損傷早期診斷的潛在標志物。