高建輝 ，馬 艷 ，余云飛 ，劉俊昌 ，2

（1．新疆醫(yī)科大學(xué)附屬中醫(yī)醫(yī)院，烏魯木齊 830001；2．新疆醫(yī)科大學(xué)，烏魯木齊 830000）

失眠目前已成為嚴(yán)重影響人們身心健康和日常生活的常見(jiàn)疾病之一，其患病率在全球范圍內(nèi)正逐年升高，并日趨普遍化、年輕化[1-2]。最新的研究認(rèn)為，睡眠和覺(jué)醒的產(chǎn)生與維持主要依賴(lài)于腦內(nèi)的睡眠和覺(jué)醒中樞及其相應(yīng)的神經(jīng)遞質(zhì)，包括：去甲腎上腺素（NE）、5-羥色胺（5-HT）、多巴胺（DA）、γ-氨基丁酸（GABA）等[3]。此外，下丘腦的食欲素（Orexin）系統(tǒng)也被認(rèn)為與睡眠和覺(jué)醒密切相關(guān)并發(fā)揮重要作用[4]。摩腹手法作為中醫(yī)的推拿療法，在臨床上治療原發(fā)性失眠療效確切，具有安全性高、無(wú)毒副作用及依賴(lài)性等優(yōu)勢(shì)。本研究通過(guò)觀察摩腹手法對(duì)睡眠剝奪大鼠腦內(nèi)睡眠和覺(jué)醒中樞相應(yīng)神經(jīng)遞質(zhì)及Orexin-A水平的影響，探討摩腹手法調(diào)節(jié)睡眠和覺(jué)醒的機(jī)制，為腹部推拿治療失眠提供科學(xué)的實(shí)驗(yàn)證據(jù)。

1 材料

1.1 動(dòng)物及分組 選取Wistar大鼠共30只，雌雄各半（新疆醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供），5～6月齡，體質(zhì)量（300±50）g，喂養(yǎng)環(huán)境保持安靜，溫度控制在18～22℃，通風(fēng)良好，自然光線。適應(yīng)性喂養(yǎng)3 d，稱(chēng)質(zhì)量編號(hào)后采用分層隨機(jī)分組分為正常對(duì)照組、模型對(duì)照組和摩腹手法組，每組10只，雌雄各半。

楊絳擔(dān)心丈夫?yàn)樨埗米锶?，便引用他自己的?huà)勸他：“打狗要看主人面，那么，打貓要看主婦面了！”（小說(shuō)《貓》的第一句）那只貓可是林徽因的貓，“打貓要看主婦面”，不要因?yàn)椤柏埵隆眰藘杉业摹昂蜌狻薄?/p>

1.2 主要試劑 戊巴比妥鈉（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司），GABA檢測(cè)試劑盒（ELISA）、DA檢測(cè)試劑盒（ELISA）、NE 檢測(cè)試劑盒（ELISA）、5-HT檢測(cè)試劑盒（ELISA）、Orexin-A 檢測(cè)試劑盒（ELISA）（北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司）。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 實(shí)驗(yàn)造模 針對(duì)模型對(duì)照組和摩腹手法組的大鼠進(jìn)行睡眠剝奪造模。采用改良多平臺(tái)水環(huán)境法[5]：自制 90 cm×70 cm×50 cm 的水槽作為鼠箱，其內(nèi)設(shè)10個(gè)直徑6 cm、高8 cm的圓形平臺(tái)，兩兩間隔15 cm。向水槽內(nèi)注水并使水面保持在平臺(tái)面下方約1 cm處，水溫保持約20℃。箱內(nèi)單次放入大鼠5只，確保大鼠可在平臺(tái)間自由活動(dòng)。

2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 統(tǒng)計(jì)分析采用SPSS 21．0統(tǒng)計(jì)軟件，所得計(jì)量資料進(jìn)行正態(tài)性與方差齊性檢驗(yàn)，組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)；檢驗(yàn)水準(zhǔn) α=0．05，以 P＜0．05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3.1 造模情況 造模完成后各組大鼠戊巴比妥鈉睡眠實(shí)驗(yàn)情況見(jiàn)表1，造模的兩組大鼠在睡眠潛伏期和總睡眠時(shí)間方面與正常對(duì)照組相比均存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0．05），提示造模成功。

因此，本土學(xué)者在開(kāi)展工作重塑研究時(shí)，應(yīng)深入探索工作重塑行為與個(gè)人和組織創(chuàng)新績(jī)效的關(guān)系及其作用機(jī)制，促進(jìn)管理理論研究服務(wù)于我國(guó)經(jīng)濟(jì)發(fā)展的現(xiàn)實(shí)需要。

2.3 取材及標(biāo)本處理 3組大鼠干預(yù)完成后，將麻醉完全的大鼠斷頭取腦，根據(jù)第6版Sprague-Dawley大鼠腦圖譜，分離出雙側(cè)下丘腦和腦干組織，稱(chēng)質(zhì)量后，分別將大鼠下丘腦及腦干組織勻漿、離心，取上清液。

第三，由于各路管線眾多、管道網(wǎng)絡(luò)復(fù)雜，在施工過(guò)程中必須要對(duì)管線網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行統(tǒng)籌考慮，并加強(qiáng)對(duì)管線的保護(hù)和避讓?zhuān)瑖?yán)格按照規(guī)范要求做好規(guī)范化施工，以確保工程質(zhì)量。

造模成功的判定：采用戊巴比妥鈉睡眠實(shí)驗(yàn)判定[6]。造模完成后，3組大鼠均腹腔注射戊巴比妥鈉（劑量為預(yù)實(shí)驗(yàn)測(cè)得引起100%大鼠睡眠的最小閾劑量），將大鼠腹部向上置于實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，記錄大鼠的睡眠潛伏時(shí)間和睡眠時(shí)間。以翻正反射消失滿(mǎn)1 min為發(fā)生睡眠，以翻正反射恢復(fù)為覺(jué)醒。對(duì)正常對(duì)照組和造模兩組大鼠的睡眠潛伏時(shí)間、睡眠時(shí)間及睡眠率進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，若有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0．05），則提示造模成功。

3 結(jié)果

2.2 干預(yù)方法 將大鼠束縛于實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，取仰臥位。摩腹手法具體操作：根據(jù)“逆摩為補(bǔ)，順摩為瀉”的原則，操作者位于大鼠左側(cè)，右手拇指末節(jié)指腹羅紋面著實(shí)于關(guān)元穴，其余四指并攏自然伸開(kāi)或彎曲，通過(guò)肩關(guān)節(jié)在外前方向的小幅度環(huán)轉(zhuǎn)，帶動(dòng)拇指在大鼠腹部做逆時(shí)針?lè)较颦h(huán)形平移摩擦；移動(dòng)范圍：上起鳩尾穴，下止關(guān)元穴，左右至雙側(cè)帶脈穴；周而復(fù)始，5～7次/min，操作5 min后，改變環(huán)轉(zhuǎn)方向?yàn)轫槙r(shí)針，按照上述方法再操作5 min。操作時(shí)發(fā)力應(yīng)平穩(wěn)著實(shí)，速度適中，每日治療1次，連續(xù)治療14 d。模型對(duì)照組：每日束縛于實(shí)驗(yàn)臺(tái)10 min，不予治療，只進(jìn)行實(shí)驗(yàn)檢測(cè)。每日束縛1次，連續(xù)捆綁14 d。正常對(duì)照組：同模型對(duì)照組。

表1 造模后各組大鼠戊巴比妥鈉睡眠實(shí)驗(yàn)比較（x±s）Tab.1 Comparison of sleep experiments on pentobarbital sodium in rats after moulding±s)min

表1 造模后各組大鼠戊巴比妥鈉睡眠實(shí)驗(yàn)比較（x±s）Tab.1 Comparison of sleep experiments on pentobarbital sodium in rats after moulding±s)min

注：與正常對(duì)照組相比，*P＜0．05。

組別 動(dòng)物數(shù) 睡眠潛伏期 睡眠時(shí)間正常對(duì)照組 10 11．7±1．4 111．5±7．0模型對(duì)照組 10 25．2±1．5* 76．1±2．6*摩腹手法組 10 25．8±1．3* 76．9±2．6*

3.3 大鼠腦內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)的水平 與正常對(duì)照組相比，模型對(duì)照組大鼠腦內(nèi)5-HT水平有明顯降低（P＜0．01），DA 和 NE 水平明顯升高（P＜0．01），差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示動(dòng)物模型造模成功。與模型對(duì)照組相比，摩腹手法組大鼠腦內(nèi)5-HT水平有顯著回升（P＜0．01），DA 和 NE 水平明顯回落（P＜0．01，P＜0．01），差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示摩腹手法可通過(guò)調(diào)節(jié)大鼠腦內(nèi)DA、NE和5-HT這3種單胺類(lèi)神經(jīng)遞質(zhì)的水平，起到調(diào)節(jié)動(dòng)物睡眠和覺(jué)醒狀態(tài)的作用。見(jiàn)表2。

2.4 檢測(cè)指標(biāo) 采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）分別測(cè)定下丘腦樣品內(nèi)GABA、Orexin-A和腦干樣品內(nèi)DA、NE、5-HT的水平，按相應(yīng)試劑盒的說(shuō)明操作。記錄所得的各組樣品的OD值，在配套軟件中，繪制標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸曲線，計(jì)算相應(yīng)數(shù)據(jù)。

3.2 大鼠的一般情況 干預(yù)完成后，正常對(duì)照組大鼠精神最為良好，活動(dòng)迅速，反應(yīng)靈敏，毛發(fā)柔順光澤，體質(zhì)量有顯著增加；模型對(duì)照組大鼠精神明顯萎靡，毛發(fā)雜亂或豎直變硬且暗黃無(wú)光，或易受驚擾，消瘦；摩腹手法組大鼠精神、情緒及反應(yīng)情況均不如正常對(duì)照組，與模型對(duì)照組相比較平靜，偶見(jiàn)瞇眼，體質(zhì)量降低也相對(duì)較少。

表2 各組大鼠腦內(nèi)單胺類(lèi)神經(jīng)遞質(zhì)的水平（x±s）Tab.2 Levels of monoamine neurotransmitters in the brains of rats of each group(±s)mg/mL

表2 各組大鼠腦內(nèi)單胺類(lèi)神經(jīng)遞質(zhì)的水平（x±s）Tab.2 Levels of monoamine neurotransmitters in the brains of rats of each group(±s)mg/mL

注：與正常對(duì)照組比較，**P＜0．01；與模型對(duì)照組比較，##P＜0．01。

組別 動(dòng)物數(shù) NE正常對(duì)照組 10 436．2±7．1模型對(duì)照組 10 474．6±8．1**摩腹手法組 10 451．3±4．7##DA 246．6±6．3 287．3±7．1**244．3±6．9##5-HT 254．4±10．3 213．5± 7．9**247．8± 7．5##

3.4 大鼠腦內(nèi)Orexin-A和GABA的水平 與正常對(duì)照組相比，模型對(duì)照組大鼠下丘腦Orexin-A水平有明顯升高（P＜0．01），GABA 水平明顯降低（P＜0．01），差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示動(dòng)物模型造模成功。與模型對(duì)照組相比，摩腹手法組大鼠下丘腦Orexin-A 水平有顯著回落（P＜0．05），但 GABA 水平無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0．05），提示摩腹手法可明顯降低大鼠下丘腦Orexin-A的水平，而對(duì)GABA水平并無(wú)明顯影響。見(jiàn)表3。

表3 各組大鼠腦內(nèi)Orexin-A和GABA的水平（x±s）Tab.3 Levels of Oresin-A and GABA of rats in each group(±s)mg/mL

表3 各組大鼠腦內(nèi)Orexin-A和GABA的水平（x±s）Tab.3 Levels of Oresin-A and GABA of rats in each group(±s)mg/mL

注：與正常對(duì)照組比較，**P＜0．01；與模型對(duì)照組比較，#P＜0．05。

組別 動(dòng)物數(shù) Orexin-A GABA正常對(duì)照組 10 22．80±1．90 0．28±0．03模型對(duì)照組 10 31．90±1．81** 0．17±0．02**摩腹手法組 10 24．00±2．83# 0．19±0．02

4 討論

睡眠和覺(jué)醒的產(chǎn)生與維持主要依賴(lài)于腦內(nèi)的睡眠和覺(jué)醒系統(tǒng)[7]。下丘腦腹外側(cè)視前區(qū)（VLPO）和內(nèi)側(cè)視前區(qū)的抑制性GABA能神經(jīng)元是腦內(nèi)主要的睡眠中樞，其釋放的抑制性遞質(zhì)GABA可在睡眠期抑制覺(jué)醒腦區(qū)的活動(dòng)，促進(jìn)和維持睡眠。藍(lán)斑（LC）NE能、中縫背核（DR）5-HT能、黑質(zhì) DA能等單胺能神經(jīng)元，是腦內(nèi)覺(jué)醒調(diào)節(jié)中樞的主要結(jié)構(gòu)，其纖維末梢釋放相應(yīng)的覺(jué)醒遞質(zhì)，可直接調(diào)控對(duì)應(yīng)腦區(qū)的活動(dòng)[8-9]，從而興奮皮質(zhì)和維持覺(jué)醒狀態(tài)。有研究表明VLPO睡眠中樞與單胺能覺(jué)醒中樞之間存在雙向的纖維聯(lián)系，并且是相互抑制的關(guān)系，這種關(guān)系是構(gòu)成人體睡眠和覺(jué)醒狀態(tài)穩(wěn)定的基礎(chǔ)。因此，上述神經(jīng)遞質(zhì)水平的變化對(duì)機(jī)體睡眠和覺(jué)醒狀態(tài)的調(diào)節(jié)有著重要意義。這些結(jié)論在本實(shí)驗(yàn)中即得到體現(xiàn)：模型對(duì)照組大鼠腦內(nèi)的GABA、DA、NE和5-HT的水平與正常對(duì)照組相比均產(chǎn)生了顯著變化，并且，除了GABA水平外，摩腹手法組大鼠腦內(nèi)的DA、NE和5-HT的水平與模型對(duì)照組相比也都呈現(xiàn)出差異。據(jù)此推測(cè)：摩腹手法可能是對(duì)覺(jué)醒中樞的DA、NE和5-HT這3種單胺類(lèi)神經(jīng)遞質(zhì)的影響比較明顯，并以此降低了覺(jué)醒中樞對(duì)大腦皮質(zhì)的興奮作用；而對(duì)睡眠中樞及GABA的影響卻并不顯著。

工程地質(zhì)勘察是工程設(shè)計(jì)的基礎(chǔ)。地質(zhì)調(diào)查的質(zhì)量對(duì)工程的建設(shè)與設(shè)計(jì)有著重要的影響。必須加強(qiáng)工程地質(zhì)勘察的質(zhì)量管理。在目前的工程地質(zhì)勘察質(zhì)量管理中，仍然存在一些影響地質(zhì)勘察質(zhì)量管理的問(wèn)題。

當(dāng)今世界，知識(shí)經(jīng)濟(jì)深入發(fā)展、創(chuàng)新發(fā)展加快推進(jìn)。在我國(guó)經(jīng)濟(jì)發(fā)展新常態(tài)下，知識(shí)產(chǎn)權(quán)制度已經(jīng)成為激勵(lì)創(chuàng)新的基本保障，知識(shí)產(chǎn)權(quán)已經(jīng)成為發(fā)展的重要資源和競(jìng)爭(zhēng)力的核心要素。具體而言，《知識(shí)產(chǎn)權(quán)基本法》的立法背景包括以下三個(gè)方面。

此外，下丘腦后外側(cè)區(qū)的Orexin能系統(tǒng)被認(rèn)為是機(jī)體的“覺(jué)醒開(kāi)關(guān)”[10]，它與上述睡眠和覺(jué)醒調(diào)節(jié)系統(tǒng)都分別存在雙向的神經(jīng)元投射關(guān)系，并通過(guò)Orexin（A和B）的分泌影響其活動(dòng)，是上述睡眠和覺(jué)醒調(diào)節(jié)系統(tǒng)的最終調(diào)控系統(tǒng)。研究發(fā)現(xiàn)Orexin神經(jīng)元可通過(guò)多種途徑影響GABA、DA、NE和5-HT的水平[11-17]。本實(shí)驗(yàn)中，模型對(duì)照組大鼠腦內(nèi)Orexin-A水平較正常對(duì)照組有明顯升高，而摩腹手法組大鼠下丘腦Orexin-A水平較模型對(duì)照組有顯著回落。可見(jiàn)，無(wú)論是睡眠剝奪造模還是摩腹手法干預(yù)，都對(duì)大鼠下丘腦Orexin-A的水平造成了明顯影響，而下丘腦Orexin-A水平的變化也明顯反映了大鼠睡眠與覺(jué)醒的狀態(tài)，這也從側(cè)面印證了上述研究結(jié)論。但是，有關(guān)下丘腦Orexin-A對(duì)GABA、DA、NE和5-HT等神經(jīng)遞質(zhì)的影響在本實(shí)驗(yàn)中未能涉及，希望可以在今后得到進(jìn)一步研究。

中醫(yī)學(xué)認(rèn)為失眠屬于“不寐”的范疇，而推拿療法中的腹部推拿療法，能夠很好的針對(duì)“不寐”的病因病機(jī)，對(duì)機(jī)體直接產(chǎn)生作用?！峨y經(jīng)》曰：“人之安臥，神歸心，魄歸肺，魂歸肝，意歸脾，志歸腎，五臟各安其位而寢?！薄鹅`樞·淫邪發(fā)夢(mèng)》指出：“正邪從外襲內(nèi)，而未有定舍，反淫于臟……使人臥不得安而喜夢(mèng)?！笨梢?jiàn)，失眠與腹部五臟功能的穩(wěn)定有著密切關(guān)系。而本實(shí)驗(yàn)中使用的摩腹手法可直接作用于腹部，手法作用范圍涵蓋了腹部的脾、胃、肝、腎經(jīng)以及任脈、沖脈和帶脈，依據(jù)中醫(yī)經(jīng)絡(luò)臟腑學(xué)說(shuō)，通過(guò)對(duì)腹部相應(yīng)經(jīng)絡(luò)腧穴進(jìn)行推按與摩運(yùn)，能起到貫通身體上下氣機(jī)，調(diào)節(jié)五臟六腑機(jī)能的作用。手法作用于任脈、沖脈和帶脈，可起到一定的調(diào)沖任以調(diào)周身氣血，強(qiáng)帶脈以強(qiáng)諸經(jīng)溝通的作用，手法作用于脾、胃、肝、腎經(jīng)以及腹內(nèi)肝、胃、脾、小腸等臟腑，亦可在一定程度上起到柔肝、和胃、實(shí)脾的作用[18]，最終來(lái)改善“不寐”的癥狀。