袁銘財(cái)

（三亞市動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所，海南三亞572000）

近幾年，在豬的養(yǎng)殖過(guò)程中，含抗生素添加劑大量使用，導(dǎo)致許多耐藥性菌株出現(xiàn)，造成相關(guān)疾病治療困難，豬機(jī)體免疫力下降和豬肉等畜產(chǎn)品中嚴(yán)重的藥物殘留，威脅著人類的健康（李林祥，2016）。抗菌肽是一類具有生物活性的小分子蛋白質(zhì)，其具有抗菌譜廣、穩(wěn)定性好、不易產(chǎn)生耐藥性等優(yōu)點(diǎn)（王棚，2018）。研究表明，抗菌肽是一種先天免疫的重要防御物質(zhì)，可以激活自身免疫系統(tǒng)，提高疫苗免疫效果，被廣泛應(yīng)用于畜禽養(yǎng)殖業(yè)中（王莉，2017；袁威，2015）。豬藍(lán)耳病又稱為豬繁殖與呼吸綜合征，其感染率和死亡率均較高，是一種危害養(yǎng)豬業(yè)的接觸性傳染病（胡成玉，2018）。由于藍(lán)耳病沒有有效藥物，免疫疫苗成為藍(lán)耳病防控的主要手段，臨床中由于多種原因?qū)е乱呙缧Ч焕硐?，抗體水平參差不齊，其保護(hù)率較低，應(yīng)引起重視（李衛(wèi)國(guó)，2017）。許多研究表明，抗菌肽可以提高畜禽的生長(zhǎng)生產(chǎn)性能、免疫機(jī)能。因此，本試驗(yàn)在仔豬基礎(chǔ)日糧中添加不同水平的抗菌肽粗提物，旨在探討其對(duì)仔豬生長(zhǎng)性能及藍(lán)耳病免疫抗體水平的影響，為抗菌肽粗提物臨床應(yīng)用提供參考。

1 材料與方法

1.1 試劑與儀器 抗菌肽粗提物（含量≥95%）購(gòu)自瑞鑫百奧生物科技（深圳）有限公司；藍(lán)耳病抗體檢測(cè)試劑盒購(gòu)自西班牙海博萊公司；藍(lán)耳病滅活疫苗購(gòu)自勃林格公司；ExL800型酶標(biāo)儀由美國(guó)寶特公司生產(chǎn)；8道移液槍由德國(guó)Eppendorf生產(chǎn)；高速小型離心機(jī)、培養(yǎng)箱均由Thermo公司生產(chǎn)；常規(guī)的儀器及試劑由本實(shí)驗(yàn)室提供。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物 （28±2）日齡、體重相近斷奶仔豬90只，由本市規(guī)?；B(yǎng)豬場(chǎng)提供。

1.3 試驗(yàn)日糧 仔豬的基礎(chǔ)飼糧營(yíng)養(yǎng)水平與配比參照NRC（1998）推薦的斷奶仔豬的營(yíng)養(yǎng)需要，配合基礎(chǔ)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平見表1，仔豬基礎(chǔ)配合飼料中不添加任何添加劑和抗生素。

1.4 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與飼養(yǎng)管理 采用單因素設(shè)計(jì)試驗(yàn)，選擇（28±2）日齡、體重相近斷奶仔豬90只隨機(jī)分成3組，每個(gè)組3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)10只，1組飼喂基礎(chǔ)日糧為對(duì)照組，2～3組分別在基礎(chǔ)日糧中添加0.25%、0.5%的抗菌肽粗提物，試驗(yàn)期為30 d。每個(gè)試驗(yàn)組每個(gè)重復(fù)單獨(dú)飼養(yǎng)，單獨(dú)給料，自由采食與飲水，在仔豬28日齡時(shí)，免疫2頭份的藍(lán)耳病滅活疫苗。

表1 基礎(chǔ)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平

1.5 指標(biāo)測(cè)定及方法

1.5.1 生長(zhǎng)性能測(cè)定 在試驗(yàn)開始與結(jié)束對(duì)每個(gè)試驗(yàn)組試驗(yàn)仔豬逐個(gè)空腹稱重，在試驗(yàn)期間記錄每個(gè)試驗(yàn)組的耗料量，測(cè)定生長(zhǎng)性能指標(biāo)。

平均日增重/kg=（試驗(yàn)?zāi)┢骄w重-初期平均體重）/試驗(yàn)天數(shù)；

平均日采食量/kg=試驗(yàn)期總耗料量/試驗(yàn)天數(shù)；

料重比=平均日采食量/日增重。

1.5.2 藍(lán)耳病抗體水平檢測(cè) 在試驗(yàn)結(jié)束，每個(gè)試驗(yàn)組隨機(jī)挑選10頭試驗(yàn)仔豬，前腔靜脈采血，離心分離血清，按照說(shuō)明書用藍(lán)耳病抗體ELISA檢測(cè)試劑盒測(cè)定試驗(yàn)仔豬免疫抗體水平，并計(jì)算IPRC值、合格率及變異系數(shù)。

1.6 數(shù)據(jù)分析 試驗(yàn)結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS 19.0進(jìn)行方差分析，以P＜0.05表示差異顯著性。

2 結(jié)果與分析

2.1 抗菌肽粗提物對(duì)仔豬生長(zhǎng)性能的檢測(cè)結(jié)果 由表2可知，2組試驗(yàn)?zāi)┲睾推骄赵鲋鼐哂?組，但差異性不顯著（P＞0.05），3組試驗(yàn)?zāi)┲睾推骄赵鲋嘏c1組相比分別提高4.92%、7.27%（P＜0.05），2組和3組之間差異性不顯著（P＞0.05）；2組和3組平均日采食量均高于1組，但是差異性不顯著（P＞0.05）；2組料重比低于1組，差異性不顯著（P＞0.05），3組料重比與1組相比降低5.81%（P＜0.05），2組和3組之間差異性不顯著（P＞0.05）。

2.2 抗菌肽粗提物對(duì)仔豬藍(lán)耳病抗體免疫水平檢測(cè) 由表3可知，2組和3組的IPRC值與1組相比分別提高39.32%、55.70% （P＜0.05）；2組抗體水平合格率高于1組（P＞0.05），3組與1組相比提高27.98%（P＜0.05），2組和3組相比差異性不顯著（P＞0.05）；2組抗體水平變異系數(shù)低于1組（P＞0.05），3組與1組相比降低31.84% （P＜0.05），2組和3組相比差異性不顯著（P＞0.05）。

表2 抗菌肽粗提物對(duì)仔豬生長(zhǎng)性能檢測(cè)結(jié)果

表3 抗菌肽粗提物對(duì)仔豬藍(lán)耳病抗體免疫水平檢測(cè)

3 討論

3.1 抗菌肽粗提物對(duì)仔豬生長(zhǎng)性能的影響 王莉（2017）等研究表明，抗菌肽和β-甘露聚糖酶合用可以提高鵪鶉的生長(zhǎng)性能。侯改鳳（2017）等報(bào)道，在飼料中添加50 mg/kg抗菌肽可以提高育肥豬生長(zhǎng)性能。張海文（2017）等研究表明，抗菌肽可以提高LPS刺激下仔豬生長(zhǎng)性能。本研究表明，在仔豬的基礎(chǔ)日糧中添0.5%抗菌肽提取物，與對(duì)照組相比，可以顯著提高仔豬的試驗(yàn)?zāi)┲睾推骄赵鲋?，降低料肉比。因此證實(shí)抗菌肽提取物可以提高仔豬生長(zhǎng)性能。其原因可能與抗菌肽粗提物含有多種生物活性小分子多肽及未知生長(zhǎng)因子，能夠促進(jìn)飼料在仔豬腸道的消化與吸收，提高飼料的利用率有關(guān)。

3.2 抗菌肽粗提物對(duì)仔豬藍(lán)耳病抗體免疫水平影響 研究表明，抗菌肽中所含的生物活性物質(zhì)是生物體天然防御系統(tǒng)的重要組成部分之一，可以有效調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫系統(tǒng)，提高抗感染免疫，同時(shí)還可以誘導(dǎo)動(dòng)物機(jī)體產(chǎn)生獲得性免疫（趙紅霞，2003）。抗菌肽可以促進(jìn)體內(nèi)T、B淋巴細(xì)胞增殖和成熟，促進(jìn)B淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化為漿細(xì)胞分泌抗體，提高機(jī)體抵抗力（陳星星，2016）。本試驗(yàn)結(jié)果表明，0.5%抗菌肽提取物添加組可以顯著提高藍(lán)耳病抗體IPRC值和合格率，降低變異系數(shù)。因此證明，0.5%抗菌肽提取物可以提高仔豬藍(lán)耳病疫苗免疫抗體水平，促進(jìn)仔豬生長(zhǎng)?？赡苡捎诳咕拇痔嵛锟梢杂行д{(diào)節(jié)體內(nèi)的細(xì)胞免疫及體液免疫功能，使藍(lán)耳病疫苗等抗原物質(zhì)與體內(nèi)的抗體結(jié)合，形成免疫復(fù)合物，并產(chǎn)生有效的藍(lán)耳病抗體，促進(jìn)仔豬體內(nèi)的免疫應(yīng)答，因此提高仔豬藍(lán)耳病疫苗免疫抗體水平。

4 小結(jié)

在仔豬基礎(chǔ)日糧中添加0.5%抗菌肽粗提物可以提高仔豬生長(zhǎng)性能及藍(lán)耳病疫苗免疫抗體水平。