（鄭州工程技術(shù)學(xué)院，河南鄭州450044）

農(nóng)藥殘留是農(nóng)藥使用以后，一定時(shí)期內(nèi)沒(méi)有被分解而殘留于生物體、收貨物、土壤、水體、大氣中的微量農(nóng)藥原體、有毒代謝物、降解物和雜質(zhì)的總稱(chēng)[1-2]。目前，我國(guó)用于防治植物病蟲(chóng)害的有機(jī)磷農(nóng)藥是當(dāng)前使用最廣泛的三類(lèi)農(nóng)藥之一，大多起到殺蟲(chóng)作用，常見(jiàn)的有敵敵畏、樂(lè)果、敵百蟲(chóng)等[3-6]。近年來(lái)，雖然出現(xiàn)了一些低毒的、生物農(nóng)藥產(chǎn)品，但因有機(jī)磷農(nóng)藥價(jià)格低廉、效果好、藥效強(qiáng)，而被普遍使用。有機(jī)磷農(nóng)藥對(duì)人體的毒性極強(qiáng)，會(huì)致使頭暈、惡心等癥狀，嚴(yán)重時(shí)可肺水腫、腦水腫、呼吸麻痹，甚至死亡[7]。有研究表明，果蔬市場(chǎng)的農(nóng)藥超標(biāo)率為30%，其中有機(jī)磷農(nóng)藥超標(biāo)尤其嚴(yán)重，樂(lè)果、甲胺磷、對(duì)硫磷是果蔬農(nóng)藥殘留超標(biāo)的主要品種，也是農(nóng)殘檢測(cè)的主要種類(lèi)[8]。

目前，檢測(cè)有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的方法[1-10]有紅外光譜法、原子吸收分光光度法、紫外分光光度法、氣相色譜法、氣質(zhì)聯(lián)用色譜法、高效液相色譜法、超臨界流體色譜法和快速檢測(cè)法（酶抑制技術(shù)法、免疫分析法、生物傳感器技術(shù)法）等，其中氣相色譜法檢測(cè)農(nóng)藥可以做到多個(gè)樣本的分離，而且具有高選擇性、高分離效能、高靈敏度、快速、回收率較高的特點(diǎn)，所以本文選用氣相色譜法檢測(cè)有機(jī)磷農(nóng)藥殘留。目前，對(duì)果蔬中的農(nóng)藥殘留檢測(cè)研究的很多，但對(duì)肉類(lèi)及肉制品的農(nóng)藥殘留檢測(cè)甚少。肉類(lèi)作為初始食品的原材料，隨著人們對(duì)食品安全的要求的提高，對(duì)肉類(lèi)的檢測(cè)既要做到定性，又要滿(mǎn)足定量檢測(cè)，此方法能夠及時(shí)、快速、準(zhǔn)確的測(cè)定肉類(lèi)及肉類(lèi)產(chǎn)品中農(nóng)藥有機(jī)磷的殘留量，對(duì)監(jiān)控農(nóng)藥的合理使用、防止農(nóng)藥殘留量超標(biāo)的肉類(lèi)上市銷(xiāo)售以及保障人民群眾身體健康有著重要的意義。

1 儀器與試劑

1.1 儀器

GC-2010島津氣相色譜儀（火焰光度檢測(cè)器）：日本島津公司；FA2004N電子天平：上海菁海儀器有限公司；S2-A808絞肉機(jī)：九陽(yáng)股份有限公司；FSH-2勻漿機(jī)：江蘇省金壇市友聯(lián)儀器研究所；RE-2000A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀：上海亞榮儀器公司；BCD-258WDPM海爾冰箱：海爾集團(tuán)公司；MWCNT多壁碳納米管：中國(guó)科學(xué)院成都有機(jī)化學(xué)有限公司。

1.2 試劑

敵敵畏、乙酰甲胺磷、氧化樂(lè)果、治螟磷、樂(lè)果、馬拉硫磷、毒死蜱、水胺硫磷、殺撲磷、三唑磷、亞胺硫磷農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品（含量＞99.9%）：天津環(huán)境監(jiān)測(cè)站；乙腈，丙酮，正己烷：國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

2 方法

2.1 樣品及其制備

豬肉、牛肉、羊肉各5份，購(gòu)買(mǎi)于農(nóng)產(chǎn)品批發(fā)市場(chǎng)。將肉去筋膜，切成小塊，經(jīng)組織搗碎機(jī)搗碎，分別放入冰箱冷藏。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

2.2.1 單體有機(jī)磷農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液

準(zhǔn)確稱(chēng)取各有機(jī)磷農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品0.010 0 g于小燒杯中，用丙酮溶解，然后轉(zhuǎn)移到25 mL容量瓶中，用丙酮定容，濃度為400 μg/mL，在-18℃下保存。使用時(shí)，分別用丙酮將標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液稀釋至需要的濃度。

2.2.2 混合有機(jī)磷農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)使用液

按照農(nóng)藥在儀器上的響應(yīng)值，準(zhǔn)確逐一吸取一定體積的單個(gè)農(nóng)藥儲(chǔ)備液分別注入同一容量瓶中，用丙酮稀釋至刻度。

2.3 提取

試驗(yàn)比較了勻漿提取法、超聲提取法以及微波提取法[10]。

2.3.1 勻漿提取法

將樣品15.0 g放入200 mL錐形瓶中，加入30 mL二氯甲烷，在勻漿機(jī)中勻漿提取5 min。勻漿好的樣品過(guò)濾到預(yù)先5 g氯化鈉的100 mL具塞量筒內(nèi)，過(guò)濾后，蓋上蓋子，充分振搖5min，靜置分層后，用移液管移取上層乙腈相10 mL，置于試管中，待凈化。

2.3.2 超聲提取法

取樣品15 g于超聲提取器中，加入30 mL二氯甲烷，選擇 5、10、20、30 min 作為超聲提取時(shí)間，確定超聲最佳提取時(shí)間。不同超聲時(shí)間回收率如表1所示。

表1 不同超聲時(shí)間的回收率Table 1 Recovery rate for different ultrasonic time

在同樣條件下，超聲5 min比超聲10 min的回收率要低，因?yàn)闃悠穬?nèi)部的農(nóng)藥還未完全提取出，而提出時(shí)間過(guò)長(zhǎng)會(huì)使液體溫度升高，從而導(dǎo)致有些成分發(fā)生變化，回收率反而會(huì)隨著時(shí)間的延長(zhǎng)下降。超聲10 min的提取效率最高，所以最終選擇超聲提取10 min。

2.3.3 微波提取法

微波提取的本質(zhì)是微波對(duì)提取溶劑和樣品的熱作用。微波加熱的原理與常規(guī)加熱不同，它能夠穿透整個(gè)體系而均勻加熱，快速升溫，加快提取速率。本試驗(yàn)采用500 g/L的水-乙醇為提取溶劑，對(duì)提取時(shí)間、提取功率做了對(duì)比，當(dāng)提取功率為210 W、提取時(shí)間為90 s時(shí)回收率最高，所以確定了最終的微波提取條件功率為210 W提取時(shí)間為90 s。

2.4 凈化

將石墨炭黑-氨基固相萃取小柱多壁碳納米管相連，然后置于150 mL平底燒瓶上，用6 mL丙酮-正己烷（體積比5∶5）淋洗柱子，棄掉淋洗液。上樣，待萃取完的樣品溶液下降到多壁碳納米管底部時(shí)，用6 mL丙酮-正己烷（體積比5∶5）洗脫，待洗脫液下降到多壁碳納米管底部圓盤(pán)時(shí)，用洗耳球吹出存留在填料中的殘液。

2.5 氣相色譜條件

氣化室溫度（T）：200℃；進(jìn)樣模式（M）：不分流；進(jìn)樣時(shí)間（S）：1.00 min；載氣：N2；壓力（P）：75.0 kPa；總流量（O）：25.0 mL/min；色譜柱流量（C）：2.00 mL/min；吹掃流量（U）：3.0 mL/min；分流比（I）：10.0；檢測(cè)器溫度（T）：270.0 ℃；氫氣流量（H）：80.0 mL/min；空氣流量（A）：120.0 mL/min。

3 結(jié)果與分析

將所有制備好的樣品按照上述氣相色譜條件，由自動(dòng)進(jìn)樣器吸取1.0 μL標(biāo)準(zhǔn)混合液和凈化后的樣品溶液注入色譜儀中，所得色譜圖，然后以雙柱保留時(shí)間定性、以獲得的樣品溶液峰面積與標(biāo)準(zhǔn)品溶液峰面積比較定量。

3.1 提取方法的選擇

比較了勻漿提取法、超聲提取法以及微波提取法，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 不同提取方法的回收率Table 2 Recovery rates by different extraction methods

由表2可知，微波提取法的回收率最高為89.7%，所以本試驗(yàn)采用微波提取法。

3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線

分別將各農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品的標(biāo)準(zhǔn)溶液按照試驗(yàn)要求配置一系列的標(biāo)準(zhǔn)溶液，濃度分別為0.02、0.05、0.10、0.15、0.20 mg/L，按照試驗(yàn)條件進(jìn)行測(cè)定，然后以相應(yīng)的峰面積為縱坐標(biāo)，以農(nóng)藥的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果在濃度0.02 mg/L～0.20 mg/L范圍內(nèi)，各農(nóng)藥的質(zhì)量濃度和峰面積均呈線性關(guān)系，線性回歸方程、相關(guān)系數(shù)及以3倍信噪比計(jì)算得各農(nóng)藥的檢出限，見(jiàn)表3，各標(biāo)準(zhǔn)品的氣相色譜圖見(jiàn)圖1。

表3 線性回歸方程及相關(guān)系數(shù)以及保留時(shí)間Table 3 Linear regression equation and correlation coefficient and retention time

圖1 農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品氣相色譜圖Fig.1 Pesticide standard gas chromatography

3.3 精密度

取1號(hào)豬肉樣品制備好的樣液連續(xù)進(jìn)樣5次，分析結(jié)果計(jì)算精密度RSD均小于為2.3%，表明本方法精密度良好。

3.4 穩(wěn)定性

將 1 號(hào)豬肉樣品的制備液分別于 0、5、7、12、15、24 h測(cè)定，結(jié)果RSD均小于5%，表明樣品在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

3.5 回收率

取1號(hào)豬肉、1號(hào)牛肉、1號(hào)羊肉樣品各9份，將一定體積的低、中、高3個(gè)濃度的敵敵畏、樂(lè)果、毒死蜱標(biāo)準(zhǔn)使用溶液（濃度分別為 0.02、0.10、0.20 mg/kg）分別加入到樣品中，然后按照上述前處理方式處理樣品，按照氣相色譜條件進(jìn)行測(cè)試，計(jì)算回收率，見(jiàn)表4。

表4 方法回收率（n=3）Table 4 Method recovery rate（n=3）

3.6 測(cè)定結(jié)果

將所有的樣品按照前處理方式制樣，然后將制備好的樣液按照氣相色譜分析測(cè)試條件進(jìn)樣，計(jì)算結(jié)果見(jiàn)表5。

表5 含量測(cè)定結(jié)果Table 5 Results of content determination mg/kg

從表5中可以看出，敵敵畏的檢出率為100%，含量最高的為5號(hào)牛肉樣品，為0.213 1 mg/kg，含量最低的為4號(hào)羊肉樣品，為0.010 23 mg/kg，15個(gè)樣品的平均值為0.104 5 mg/kg；乙酰甲胺磷的檢出率為93.33%，含量最高的1號(hào)牛肉樣品，為0.389 2 mg/kg，含量最低的為3號(hào)羊肉樣品，為0.010 62 mg/kg，平均值為0.194 7 mg/kg；氧化樂(lè)果的檢出率為100%，含量最高的為2號(hào)豬肉樣品，為0.146 4 mg/kg，含量最低的為4號(hào)牛肉樣品，為 0.010 91 mg/kg，平均值為 0.057 19 mg/kg；治螟磷的檢出率為100%，含量最高的為3號(hào)羊肉樣品，為0.218 7 mg/kg，含量最低的為5號(hào)牛肉樣品，為0.018 75 mg/kg，平均值為 0.099 52 mg/kg；樂(lè)果的檢出率為93.33%，含量最高的為2號(hào)豬肉樣品，為0.229 4 mg/kg，含量最低的為4號(hào)牛肉樣品，為0.017 73 mg/kg，平均值為0.053 00 mg/kg；馬拉硫磷的檢出率為93.33%，含量最高的為5號(hào)牛肉樣品，為0.235 4 mg/kg，含量最低的為4號(hào)牛肉樣品，為0.017 71 mg/kg，平均值為 0.079 88 mg/kg；毒死蜱的檢出率為86.67%，含量最高的為2號(hào)羊肉樣品，為0.242 7 mg/kg，含量最低的為5號(hào)牛肉樣品，為0.012 33 mg/kg，平均值為0.052 15 mg/kg；水胺硫磷的檢出率為100%，含量最高的為4號(hào)豬肉樣品，為0.247 3 mg/kg，含量最低的為2號(hào)豬肉樣品，為0.010 32 mg/kg，平均值為0.122 3 mg/kg；殺撲磷的檢出率為93.33%，含量最高的為1號(hào)豬肉樣品，為0.056 43 mg/kg，含量最低的為1號(hào)牛肉樣品，為0.011 28 mg/kg，平均值為 0.029 72 mg/kg；三唑磷的檢出率為93.33%，含量最高的為5號(hào)牛肉樣品，為0.265 3 mg/kg，含量最低的為1號(hào)豬肉樣品，為0.016 32 mg/kg，平均值為0.018 86 mg/kg；亞胺硫磷的檢出率為93.33%，含量最高的為2號(hào)豬肉樣品，為0.349 1 mg/kg，含量最低的為1號(hào)牛肉樣品，為0.018 23 mg/kg，平均值為 0.043 20 mg/kg。

4 結(jié)論

本試驗(yàn)采用氣相色譜法對(duì)豬、牛、羊肉中的有機(jī)磷農(nóng)藥殘留進(jìn)行檢測(cè)。比較了勻漿提取法、超聲提取法以及微波提取法，最終確定微波提取法來(lái)提取樣品中的有機(jī)磷，經(jīng)過(guò)氨基萃取小柱和多壁碳納米管凈化，進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果表明，11種有機(jī)磷農(nóng)藥線性關(guān)系良好，檢出限在 0.015 μg/kg～1.5 μg/kg，RSD＜5%，實(shí)際樣品檢出率在93.3%～100%之間。畜禽肉中農(nóng)藥殘留主要是在飼養(yǎng)、屠宰和加工過(guò)程中造成的，很多畜禽以農(nóng)作物為飼料，而農(nóng)作物對(duì)土壤中的農(nóng)藥有富集作用，這些脂溶性的農(nóng)藥進(jìn)入家禽體內(nèi)不易排出，對(duì)人體產(chǎn)生負(fù)面影響，畜牧肉中農(nóng)藥殘留量雖然不高，但對(duì)人身體的潛在危害較大。提倡政府必須加大監(jiān)管力度，加強(qiáng)質(zhì)量監(jiān)管工作；改變畜牧業(yè)生產(chǎn)方式，規(guī)范肉制品生產(chǎn)企業(yè)的行為，嚴(yán)把原料質(zhì)量，完善標(biāo)準(zhǔn)體系，提升檢驗(yàn)水平，強(qiáng)化質(zhì)量監(jiān)管。我國(guó)政府應(yīng)高度重視肉和肉制品安全問(wèn)題，為全面加強(qiáng)食品質(zhì)量安全工作保駕護(hù)航，只有認(rèn)清了肉和肉制品農(nóng)藥殘留的現(xiàn)狀和危害，才能從根本上防控農(nóng)藥殘留，最大限度地保障肉和肉制品的安全。