河南省土壤肥料站 主辦

隨著我國農(nóng)業(yè)的不斷發(fā)展，化學肥料的大量施用，我國的土壤肥力，特別是有機質(zhì)質(zhì)量分數(shù)的下降趨勢十分明顯。為解決化肥過量施用帶來的各種問題，改善農(nóng)業(yè)生態(tài)環(huán)境，促進農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的可持續(xù)發(fā)展，開發(fā)、使用新興的水溶肥料是今后農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中的必然趨勢。氨基酸水溶肥料作為一種與立體高效栽培技術(shù)、高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)栽培技術(shù)相配套的新型肥料，是未來肥料發(fā)展的重要方向之一。

采用S-433 D氨基酸自動分析儀測定含氨基酸水溶肥料中氨基酸的含量，可對目前人們所關(guān)注的所有氨基酸進行定性定量檢測。目前，該方法已被《水溶肥料 游離氨基酸含量的測定》（NY/T 1975-2010）推薦使用，并列為仲裁法。但是標準中沒有規(guī)定氨基酸分析的型號和樣品含量的檢測范圍，因此，本文采用此方法測定水溶肥料中游離氨基酸的含量，分別研究了進樣濃度和進樣體積對氨基酸分離度的影響，以確定適宜的進樣濃度和體積，然后對氨基酸自動分析儀法進行驗證。

一、材料與方法

（一）試劑與儀器

1.試劑。0.06 mol/L的鹽酸溶液；500 g/L的氫氧化鈉溶液；50 g/L的磺基水楊酸溶液；10 g/L的EDTA-Na溶液；pH值為2.2的檸檬酸鈉緩沖液；氨基酸混合標準溶液 2.5 ×109 nmol/mL。

2.儀器。S-433 D氨基酸分析儀；0.45μ m的微孔濾膜及過濾頭、注射器等。

（二）測定方法

1.樣品的制備。含氨基酸水溶肥料樣品經(jīng)多次縮分后，取出約100 g，將其研磨至全部通過0.50 mm的孔徑過篩，混合均勻，置于潔凈、干燥的容器中。

2.測定方法。稱取試樣2～10 g，置于250 mL的容量瓶中。充分溶解后，加水至刻度，混勻，過濾后吸取上清液2 mL于10 mL的離心管中，準確加入2 mL的磺基水樣酸溶液，混勻，放置1 h。準確加入1 mL的EDTA-Na溶液和1 mL的鹽酸溶液，混勻，用0.45μm的微孔濾膜過濾。吸取濾液1 mL，蒸干。準確加入1～5 mL的檸檬酸鈉緩沖液溶解，使氨基酸濃度處于儀器最佳檢測范圍內(nèi)，供儀器測定用。

3. S-433 D氨基酸分析儀的色譜條件。色譜柱：SYKAMLCAK06/Na。流動相A：檸檬酸鈉= 0.12 N，pH值為 3.45；流動相B：檸檬酸鈉=0.2 N，pH值為10.85。流速：茚三酮溶液流速0.25 mL/min，洗脫液流速0.45 mL/min。檢測器1：570 nm，雙極的，12 123 mV，6.25樣品數(shù)每秒；檢測器2 ：440 nm，雙極的，12 123 mV，6.25樣品數(shù)每秒。反應溫度：138 ℃。

（三）數(shù)據(jù)分析

本文運用IBM SPSS Statistics 20.0進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析，用Microsoft Office Excel 2010制圖。

二、結(jié)果與分析

（一）進樣濃度和進樣體積對氨基酸分離度的影響

為確定進樣濃度和進樣體積對氨基酸峰分離度的影響，試驗按照雙因素布置，進樣濃度分別設為5nmol/mL、25 nmol/mL、100 nmol/mL 3個水平，進樣體積分別設為5μL、25μ L、100μL 3個水平，共9個處理，每個處理重復3次。按照測定方法進行測定。經(jīng)過校準、積分后，考察蘇氨酸和絲氨酸峰形的分離度（Rh），計算公式為：

式中，H0為蘇氨酸和絲氨酸平均峰高，單位為mm；H為蘇氨酸和絲氨酸峰交點到基線的距離，單位為mm。

圖1 蘇氨酸-絲氨酸分離度隨進樣量的趨勢

表1 進樣濃度和進樣體積對氨基酸分離度的方差分析（因變量：蘇氨酸-絲氨酸分離度）

如表1所示，通過雙因素分析，進樣濃度和進樣體積對氨基酸分離度的影響均達到極顯著水平（p＜0.001），并且存在著極顯著的交互作用（p＜0.001）。

由圖1可知，在進樣量＜0.5 nmol時，分離度隨著進樣量的增大而急劇增大；在進樣量＞0.5 nmol時，分離度隨著進樣量的增加而緩慢增加，并且在5.0 nmol之后分離度隨著進樣量的增加而基本保持穩(wěn)定。

（二）方法的驗證

1.穩(wěn)定性。取氨基酸含量約為15%的氨基酸水溶肥料，按照測定方法進行測定。由表2可知，24 h內(nèi)17種氨基酸的RSD值均在1.5%以下。其中蛋氨酸的RSD最高，為1.43%；甘氨酸的RSD最低，為0.27%?？偡迕娣e的RSD為0.23%。

2.重復性。按照測定方法測定氨基酸含量的RSD值。如表3所示，各氨基酸含量結(jié)果的RSD值均＜1.5%。組氨酸的穩(wěn)定性最差，RSD為1.44%；天冬氨酸的穩(wěn)定性最好，RSD為0.76%?？偡迕娣e的RSD為0.51%。

三、結(jié)論

本文探討了S-433D氨基酸分析儀的進樣濃度和進樣體積對分離度的影響，明確了適宜的進樣濃度和進樣體積，對測定方法進行了驗證，得到以下結(jié)論：

（一）對于S-433 D氨基酸分析儀，分離度隨著進樣體積和進樣濃度的增加而提高，保持絕對進樣量為5 nmol時，即可得到較高的分離度；當進樣體積為50μ L時，最適宜的上機濃度為100 nmol/mL。

（二）《水溶肥料 游離氨基酸含量的測定》（NY/T 1975-2010）氨基酸自動分析儀法中的進樣體積為50μL時，在 0.25～50 nmol下，重復性和24 h穩(wěn)定性的RSD均＜1.5%。

表2 17種氨基酸24 h內(nèi)的峰面積及相對標準偏差

表3 17種氨基酸峰面積的重復性